Aflatoxins (AFT), a group of naturally-occurring mycotoxins, are produced by many species of
Aspergillus fungi, most notably A. flavus and A. parasiticus. Aflatoxin-producing members of
Aspergillus are common and widespread in Nature. In particular, peanuts, nuts, vegetable oils, and
cereals are known to often be contaminated with this class of mycotoxins [1]. Aflatoxin B1 (AFB1) has
been reported to cause liver tumors in different animal species [2,3]. The European Commission has
proposed to set tolerance levels at 2 μg·kg−1
for AFB1 and at 4 μg·kg−1
for total aflatoxins in certain
foods [4]. The maximum limit (ML) set by United States and China is 20 µg·kg−1
in foodstuffs.
The current analytical techniques used to assay aflatoxin levels include thin-layer chromatography
(TLC) [5], high performance liquid chromatography (HPLC) [6], liquid chromatography-mass
spectroscopy (LC-MS) [7], LC-MS/MS [8], enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) [9], ion
mobility spectrometry and so on [10]. Immunoaffinity utilizes the specific and reversible interaction
between an antibody and antigen, providing the most powerful separation and purification of target
analytes from complex matrices [11]. Various applications of immunoaffinity chromatography for
toxins, veterinary drugs and pesticide residues have been reported [12,13].
In this work, we will describe a procedure for the preparation of a monoclonal antibody (MAb)
using 1C11-based immunoaffinity chromatography followed by HPLC analysis of AFT in agri-product
samples. The aims of this study were to: (1) prepare and identify an immunoaffinity column (IAC)
employing MAb 1C11 and amino-silica gel microparticles; (2) develop optimal extraction conditions
for the binding and release of antibody-bound AFT from the IAC; and (3) evaluate the prepared IAC
for the effective extraction of AFT from real samples.
มีผลิต aflatoxins (AFT), กลุ่ม mycotoxins เกิดขึ้นเองตามธรรมชาติ โดยหลายพันธุ์เชื้อรา aspergillus, A. flavus และ A. parasiticus ส่วนใหญ่ ผลิต aflatoxin สมาชิกของAspergillus มีทั่วไป และแพร่หลายในธรรมชาติ เฉพาะ ถั่วลิสง ถั่ว น้ำมันพืช และธัญญาหารรู้จักมักจะปนเปื้อนกับคลาสนี้ของ mycotoxins [1] Aflatoxin B1 (AFB1) ได้การรายงานทำให้เกิดเนื้องอกที่ตับในสัตว์ต่างชนิด [2,3] คณะกรรมาธิการยุโรปได้เสนอการกำหนดระดับการยอมรับที่ 2 μg·kg−1 AFB1 และ ใน 4 μg·kg−1 สำหรับ aflatoxins รวมในบางอาหาร [4] วงเงินสูงสุด (มล) โดยสหรัฐอเมริกาและจีนเป็น 20 µg·kg−1 ในอาหารเทคนิคการวิเคราะห์ปัจจุบันใช้ assay aflatoxin ระดับรวม chromatography ชั้นบาง(TLC) [5], ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) [6] chromatography มวลของเหลวก (LC-MS) [7], LC-MS/MS [8], เอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay (ELISA) [9] ไอออนเคลื่อนไหว spectrometry และอื่น ๆ [10] Immunoaffinity ใช้การโต้ตอบที่ระบุ และสามารถย้อนกลับได้ระหว่างแอนติบอดีและตรวจหาการ ให้แยกและทำให้บริสุทธิ์ของเป้าหมายมีประสิทธิภาพมากที่สุดanalytes จากเมทริกซ์คอมเพล็กซ์ [11] Immunoaffinity chromatography สำหรับงานต่าง ๆสารพิษ ยาเสพติดสัตวแพทย์ และสารพิษตกค้างได้รับรายงาน [12,13]ในงานนี้ เราจะอธิบายขั้นตอนการเตรียมแอนติบอดี monoclonal (มาบ)ใช้ 1C 11-ใช้ immunoaffinity chromatography ตามวิเคราะห์ HPLC AFT ผลิตภัณฑ์ agriตัวอย่างการ จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้ได้: (1) จัดเตรียม และระบุคอลัมน์ที่มี immunoaffinity (IAC)ใช้มาบ 1C 11 และอะมิโนซิลิก้าเจ microparticles (2) พัฒนาเงื่อนไขสกัดที่ดีที่สุดการผูกและการปล่อยของแอนติบอดีผูก AFT จาก IAC และ (3) ประเมิน IAC เตรียมไว้การสกัดมีประสิทธิภาพของ AFT จากตัวอย่างจริง
การแปล กรุณารอสักครู่..
aflatoxins (AFT)
กลุ่มของสารพิษจากเชื้อราธรรมชาติที่เกิดขึ้นที่มีการผลิตโดยหลายสายพันธุ์ของเชื้อราAspergillus สะดุดตาที่สุด flavus และ A. parasiticus เอ สมาชิกอะฟลาท็อกซินที่ผลิตจากเชื้อรา Aspergillus เป็นเรื่องปกติและแพร่หลายในธรรมชาติ
โดยเฉพาะอย่างยิ่ง, ถั่วลิสง, ถั่ว,
น้ำมันพืชและธัญพืชเป็นที่รู้จักกันมักจะได้รับการปนเปื้อนด้วยสารพิษจากเชื้อราชั้นนี้[1] อะฟลาท็อกซินบี 1 (AFB1)
ได้รับรายงานว่าจะก่อให้เกิดมะเร็งตับในสัตว์ชนิดที่แตกต่างกัน[2,3] คณะกรรมาธิการยุโรปได้เสนอให้ตั้งค่าระดับความอดทนที่ 2 ไมโครกรัมต่อกิโลกรัม·-1 สำหรับ AFB1 และ 4 ไมโครกรัมต่อกิโลกรัม·-1 สำหรับ aflatoxins รวมในบางอาหาร[4] ขีด จำกัด สูงสุด (ML) ที่กำหนดโดยประเทศสหรัฐอเมริกาและประเทศจีนคือ 20 ไมโครกรัม·กิโลกรัม-1 ในอาหาร. เทคนิคการวิเคราะห์ในปัจจุบันใช้ในการ assay ระดับอะฟลาท็อกซินรวมถึงโคบางชั้น(TLC) [5] ที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) [6], โคมวลของเหลวสเปกโทรสโก(LC-MS) [7] LC-MS / MS [8], เอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน (ELISA) [9] ไอออนspectrometry การเคลื่อนไหวและอื่น ๆ [10] Immunoaffinity ใช้ปฏิสัมพันธ์ที่เฉพาะเจาะจงและย้อนกลับระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดีให้มีประสิทธิภาพมากที่สุดการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของเป้าหมายวิเคราะห์จากการฝึกอบรมที่ซับซ้อน[11] การใช้งานต่าง ๆ ของโค immunoaffinity สำหรับสารพิษยาสัตว์และสารเคมีตกค้างได้รับรายงาน[12,13]. ในงานนี้เราจะอธิบายขั้นตอนในการจัดทำโมโนโคลนอลแอนติบอดี (ที่แอนติบอดี) โดยใช้โค immunoaffinity 1C11 ตามตามด้วย HPLC การวิเคราะห์ใน AFT เกษตรสินค้าตัวอย่าง จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อ (1) การเตรียมความพร้อมและระบุคอลัมน์ immunoaffinity (IAC) จ้างแอนติบอดี 1C11 และอะมิโนซิลิก้าเจลไมโคร; (2) การพัฒนาเงื่อนไขการสกัดที่ดีที่สุดสำหรับการรวมและการเปิดตัวของAFT แอนติบอดีที่ถูกผูกไว้จาก IAC; และ (3) ประเมิน IAC เตรียมสำหรับการสกัดที่มีประสิทธิภาพของAFT จากตัวอย่างจริง
การแปล กรุณารอสักครู่..
อะฟลาทอกซิน ( หลัง ) , กลุ่มของธรรมชาติที่เกิดขึ้นไมโคทอกซิน , ผลิตโดยหลายสายพันธุ์
Aspergillus เชื้อรา A . flavus , A . ผู้ดูแล และที่สะดุดตาที่สุด . ปริมาณการผลิตของสมาชิก
Aspergillus ทั่วไปและแพร่หลายในธรรมชาติ ตัด peanuts ดูจะ , oils vegetable , (
cereals เหล่านี้คุณแล้วสดชื่น : contaminated with กะรัตของ mycotoxins [ 1 ] ) ขีดคั่น ( สาร ) ได้
มีรายงานเกิดเนื้องอกในตับในสัตว์ชนิดต่าง ๆ [ 2 ] คณะกรรมาธิการยุโรปได้เสนอให้ตั้งระดับความอดทนที่
2 μ G ด้วย− 1 กิโลกรัม สำหรับสารและμ
4 G ด้วย− 1 กิโลกรัมอะฟลาทอกซินในบาง
รวมอาหาร [ 4 ] ขีด จำกัด สูงสุด ( มิลลิลิตร ) ที่กำหนดโดยสหรัฐอเมริกาและจีน 20 µ G ด้วย− 1 กิโลกรัมในของกิน
.ปัจจุบันเทคนิคการวิเคราะห์ที่ใช้เพื่อการทดสอบระดับอะฟลาทอกซินรวม chromatography ( TLC )
1 [ 5 ] วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) [ 6 ] , ของเหลวสัปดาห์
spectroscopy ( อินซูลิน ) อินซูลินรักษาโรค [ 7 ] , [ 8 ] , enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) [ 9 ] ,
) และไอออน spectrometry ดังนั้นใน [ 10 ] immunoaffinity ใช้เฉพาะและการปฏิสัมพันธ์
between an antibody ( antigen ที่ separation most ยาง ( purification ของ analytes target
from complex matrices [ สุดยอด ] . การ immunoaffinity โครมาโทกราฟีสำหรับ
สารพิษสารตกค้างยาสัตว์ และมีการรายงาน [ 12 , 13 ‘ ] .
ในงานนี้เราจะอธิบายขั้นตอนการเตรียมการของโมโนโคลนอลแอนติบอดี ( แอนติบอดี )
สามี 1c11 based immunoaffinity chromatography followed by analysis hplc ของ aft in samples product
agri . การวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อ ( 1 ) พร้อมระบุ immunoaffinity คอลัมน์ ( IAC )
) ใช้ 1c11 อะมิโนไมโครซิลิกาเจล ( 2 ) พัฒนา
การสกัดที่เหมาะสมสำหรับการจับและปล่อยแอนติบอดีผูกหลังจาก IAC ; และ ( 3 ) ประเมินเตรียม IAC
สำหรับประสิทธิภาพการสกัดหลังน้ำลด จากตัวอย่างจริง
การแปล กรุณารอสักครู่..