Page 32.5.2. SDS-polyacrylamide gel

Page 3
2.5.2. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
SDSePAGE was performed by the method of Laemmli (1970).
Gel samples were dissolved in 50 g L
À1
SDS solution. The mixtures
were then heated at 85

C for 1 h using a temperature controlled
water bath model W350 (Memmert, Schwabach, Germany). The
mixtures were centrifuged at 8500 g for 5 min using a micro-
centrifuge (MIKRO20, Hettich Zentrifugan,170 Germany) to remove
undissolved debris. Solubilized samples were mixed at 1:1 (v/v)
ratio with the sample buffer (0.5 mol L
À1
TriseHCl, pH 6.8 con-
taining 5 g 100 mL
À1
SDS and 200 mL L
À1
glycerol). Samples (15
m
g
protein) were loaded onto a polyacrylamide gel made of 75 g L
À1
separating gel and 40 g L
À1
stacking gel and subjected to electro-
phoresis at a constant current of 20 mA gel
À1
. After electrophoresis,
the gels were stained with 0.5 mL L
À1
(w/v) Coomassie Blue R-250
in 150 mL L
À1
methanol and 50 mL L
À1
acetic acid for 30 min.
Finally, they were destained with a mixture of 300 mL L
À1
methanol
and 100 mL L
À1
acetic acid for 1 h and destained again with the
same solution for 30 min. High-molecular-weight protein markers
were used to estimate the molecular weight of proteins.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หน้า 32.5.2 การ SDS polyacrylamide เจ electrophoresis (SDS-หน้า)SDSePAGE ที่ดำเนินการ โดยวิธีการของ Laemmli (1970)มีละลายตัวอย่างเจใน 50 g LÀ1โซลูชั่นขององค์กร ส่วนผสมถูกความร้อนแล้วที่ 85C สำหรับ h 1 ที่ใช้อุณหภูมิในการควบคุมน้ำอ่างอาบน้ำรุ่น W350 (ความ Schwabach เยอรมนี) ที่ส่วนผสมมี centrifuged ที่ g 8500 สำหรับ 5 นาทีใช้ไมโครแบบเครื่องหมุนเหวี่ยง (MIKRO20, Hettich Zentrifugan เยอรมนี 170) เอาเศษ undissolved ตัวอย่าง solubilized ถูกผสม 1:1 (v/v)อัตราส่วนกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (0.5 โมล LÀ1TriseHCl คอน pH 6.8-taining 5 กรัม 100 มลÀ1SDS และ 200 มล LÀ1กลีเซอร) ตัวอย่าง (15mgโปรตีนถูกโหลดลงในเจ polyacrylamide ทำ 75 g LÀ1แยกเจและ 40 g LÀ1เจซ้อน และการ electro -phoresis ที่กระแส 20 mA เจคงÀ1. หลังจาก electrophoresisเจมีสี ด้วย 0.5 mL LÀ1(w/v) Coomassie Blue R-250ใน 150 mL LÀ1เมทานอลและ 50 mL LÀ1กรดอะซิติกสำหรับ 30 นาทีในที่สุด พวกเขาได้ destained ด้วยส่วนผสมของ L 300 mLÀ1เมทานอลและ 100 mL LÀ1กรดอะซิติก 1 h และ destained อีกครั้งโดยการโซลูชั่นเดียวกันสำหรับเครื่องหมายโปรตีนสูงโมเลกุลน้ำหนัก 30 นาทีใช้ในการประเมินน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หน้า 3 Page 3
2.5.2 ข่าวคราว SDS-อะคริเลต (SDS-PAGE) 2.5.2. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
SDSePAGE ได้ดำเนินการโดยวิธีการ Laemmli (1970). SDSePAGE was performed by the method of Laemmli (1970).
ตัวอย่างเจลถูกกลืนหายไปใน 50 กรัม L Gel samples were dissolved in 50 g L
A1 À1
แก้ปัญหา SDS SDS solution. The mixtures
were then heated at 85

C for 1 h using a temperature controlled
water bath model W350 (Memmert, Schwabach, Germany). The
mixtures were centrifuged at 8500 g for 5 min using a micro-
centrifuge (MIKRO20, Hettich Zentrifugan,170 Germany) to remove
undissolved debris. Solubilized samples were mixed at 1:1 (v/v)
ratio with the sample buffer (0.5 mol L
À1
TriseHCl, pH 6.8 con-
taining 5 g 100 mL
À1
SDS and 200 mL L
À1
glycerol). Samples (15
m
g
protein) were loaded onto a polyacrylamide gel made of 75 g L
À1
separating gel and 40 g L
À1
stacking gel and subjected to electro-
phoresis at a constant current of 20 mA gel
À1
. After electrophoresis,
the gels were stained with 0.5 mL L
À1
(w/v) Coomassie Blue R-250
in 150 mL L
À1
methanol and 50 mL L
À1
acetic acid for 30 min.
Finally, they were destained with a mixture of 300 mL L
À1
methanol
and 100 mL L
À1
acetic acid for 1 h and destained again with the
same solution for 30 min. High-molecular-weight protein markers
were used to estimate the molecular weight of proteins.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หน้า 3
งานวาง . SDS polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE )
sdsepage โดยใช้วิธี laemmli ( 1970 ) .
ตัวอย่างเจลละลาย 50 กรัม 1
L
Àซีโซลูชั่น ส่วนผสม
แล้วอุณหภูมิ 85

C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใช้ควบคุมอุณหภูมิน้ำอาบแบบ w350
( MEMMERT Schwabach , เยอรมนี )
ผสมอยู่ระดับที่ 8500 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้ไมโคร -
( mikro20 centrifuge ,zentrifugan Hettich 170 เยอรมัน ) เพื่อเอา
undissolved เศษเล็กเศษน้อย ตัวอย่างสารละลายผสมที่อัตราส่วน 1 : 1 ( v / v )
อัตราส่วนกับจำนวนบัฟเฟอร์ ( 0.5 โมลÀ L
1
trisehcl pH 6.8 con -
TAINING 5 กรัม 100 ml 1

À SDS และ 200 ml 1
L
Àกลีเซอรอล ) ตัวอย่าง ( 15
m
g
โปรตีน ) ถูกโหลดไปยัง polyacrylamide gel ให้ 75 g l

À 1 แยกเจลและ 40 g L
1
Àซ้อนเจลและภายใต้ Electro -
กุ้ง ณปัจจุบันคง 20 มาเจลÀ 1

หลังจากอิเล็ก
เจลถูกย้อมด้วยสีÀ L
1
0.5 มล. ( w / v ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250
L
À 150 มล. 1
L
Àเมทานอลและ 50 มล. กรดเป็นเวลา 30 นาที 1

ในที่สุดก็ destained ที่มีส่วนผสมของ 300 มล. ล. 1

Àเมทานอล
L
Àและ 100 มล. กรด 1
1 H และ destained อีกครั้งกับ
โซลูชั่นเดียวกันเป็นเวลา 30 นาที สูง น้ำหนัก โมเลกุลโปรตีนเครื่องหมาย
ใช้คำนวณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน .