วัฒนธรรมหลักของ HCECs และในหลอดทดลองรูปแบบ hyperosmolarity
มนุษย์ผู้บริจาคเนื้อเยื่อ corneoscleral (<72 ชั่วโมงหลังจากการตาย)
ไม่เหมาะสำหรับการใช้งานทางคลินิกจากผู้บริจาคที่มีอายุ19-67 ปีที่ผ่านมาที่ได้รับจากสิงโตธนาคารตาของเท็กซัส (ฮูสตัน, เท็กซัส) ประถม
HCECs เลี้ยงในแผ่น 12 ดีโดยใช้ชิ้นส่วนจากขอบ limbal
กระจกตาในกลางผิวหนังฮอร์โมนเสริม(เชม) ที่มี 5% FBS
เราก่อนหน้านี้โดยใช้วิธีการ[24] ไหลมารวมกันวัฒนธรรมเยื่อบุผิวหลักกระจกตาใน 14-18
วันถูกเปลี่ยนไปปริมาณเท่ากับ(0.5 มิลลิลิตร / ดี) ของกลางซีรั่มฟรี (เชมได้โดยไม่ต้อง FBS)
ในชั่วข้ามคืนและจากนั้นได้รับการรักษา4 หรือ 24 ชั่วโมงกับ isosmotic (312 mOsm) หรือ hyperosmolar สื่อ (350, 400 หรือ 450
mOsm) ซึ่งประสบความสำเร็จโดยการเพิ่ม (19, 44 หรือ 69 มม) โซเดียมคลอไรด์ (NaCl) osmolarity
ของสื่อวัฒนธรรมวัดโดย Osmometer ความดันไอในร่างกายของไหลเคมีคลินิกห้องปฏิบัติการของโรงพยาบาลเมธ (ฮูสตัน, เท็กซัส)
เซลล์ที่ได้รับการรักษา
4 ชั่วโมงถูก lysed ในบัฟเฟอร์ RLT จาก Qiagen RNeasy
พลัสชุดมินิและอยู่ภายใต้การสกัดอาร์เอ็นเอสำหรับการวิเคราะห์การแสดงออกของยีน เซลล์ที่ได้รับการรักษา 24-48
ชั่วโมงถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์โปรตีนดังกล่าวเป็นดวงตะวัน, พยาธิหรือเทคนิค immunohistochemistry แต่ละทดลองซ้ำแล้วซ้ำอีก 3-5 ครั้งและข้อมูลโดย representatively และ / หรือนำเสนอในทางสถิติผลกับตัวเลข
การแปล กรุณารอสักครู่..