To investigate in vivo functions of

To investigate in vivo functions of these GhTPSs, tobacco rattle virus (TRV)-based virus induced gene silencing (VIGS) system was employed to silence their expression in cotton. The 456-, 486- and 444-bp fragments of GhTPS1, GhTPS2 and GhTPS3 were used, and the corresponding Agrobacteria were infiltrated into cotton seedlings. Thirty days after inoculation, expression of target genes in true leaves was analyzed by quantitative real-time RT-PCR (qRT-PCR). In each VIGS-treated plant selected, transcripts of target genes decreased by more than 85%, whereas non-target TPS gene expressions were largely unaffected (Fig. 5 A). Consistent with target gene suppression, production of b-caryophyllene (18) and a-humulene (19) was decreased by 90% in GhTPS1-silenced plants (Fig. 5B, Supplementary Fig. 3A and B), and the b-elemene (10), guaia-1(5),11-diene (24) and guaia-1(10),11-diene (25) were undetectable in GhTPS2-suppressed leaves (Fig. 5B, Supplementary Fig. 2A and C). In the GhTPS3-silenced plant, a-pinene (14), b-pinene (15) and b-phellandrene (22) contents decreased by more than 80%, whereas b-myrcene (16) was unchanged (Fig. 5B, Supplementary Fig. 2D and E). Such a correlation between suppressed TPS gene expression and decreased contents of terpene products suggest precise silencing of target genes, and confirms activities of the three GhTPSs in planta.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจสอบฟังก์ชันในสัตว์ทดลองของ GhTPSs เหล่านี้ ยาสูบสั่นไวรัส (TRV) -ไวรัสโดยเหนี่ยวนำให้ยีน silencing (VIGS) ระบบถูกทำงานวิพากษ์ของนิพจน์ในฝ้าย 456- 486 - ใช้ 444 bp ชิ้นส่วนของ GhTPS1, GhTPS2 และ GhTPS3 และ Agrobacteria ที่เกี่ยวข้องได้ infiltrated ลงในกล้าไม้ฝ้าย วันที่สามสิบหลังจาก inoculationการตรวจสอบฟังก์ชันในสัตว์ทดลองของ GhTPSs เหล่านี้ ยาสูบสั่นไวรัส (TRV) -ไวรัสโดยเหนี่ยวนำให้ยีน silencing (VIGS) ระบบถูกทำงานวิพากษ์ของนิพจน์ในฝ้าย 456- 486 - ใช้ 444 bp ชิ้นส่วนของ GhTPS1, GhTPS2 และ GhTPS3 และ Agrobacteria ที่เกี่ยวข้องได้ infiltrated ลงในกล้าไม้ฝ้าย วันที่สามสิบหลังจาก inoculation ของยีนเป้าหมายในใบจริงถูกวิเคราะห์ โดยเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ RT-PCR (qRT-PCR) ในแต่ละโรงงาน VIGS รับเลือก ใบแสดงผลของเป้าหมายลดลงกว่า 85% ในขณะที่เป้าหมายไม่ใช่ TPS ยีนนิพจน์ถูกผลกระทบส่วนใหญ่ (Fig. 5 A) สอดคล้องกับเป้าหมายยีนปราบปราม b-pinene (15) และเนื้อหา (22) b phellandrene ที่ลดลงกว่า 80% ในขณะที่บี-myrcene (16) ถูกเปลี่ยนแปลง (Fig. 5B, 2D Fig. เสริม และ E) ความสัมพันธ์ดังกล่าวระหว่างระงับ TPS ยีน และเนื้อหาลดลงผลิตภัณฑ์เทอร์พีนแนะนำ silencing แม่นยำของยีนเป้าหมาย และกิจกรรม confirms GhTPSs สามในลเวียมานอร์ ผลิต b-caryophyllene (18) และ (19) ที่ humulene ถูกลด 90% ในพืช GhTPS1 silenced (Fig. 5B, 3A Fig. เสริม และ B), และแบบบี-elemene (10), guaia-1 (5) 11-diene (24) และ guaia-1 (10), (25) 11-diene สามคในใบระงับ GhTPS2 (Fig. 5B, 2A Fig. เสริม และ C) ใน GhTPS3 silenced โรงงาน (14), เป็น pinene

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการตรวจสอบในการทำงานภายในร่างกายของ GhTPSs เหล่านี้สั่นยาสูบไวรัส (TRV- ตาม) ไวรัสเกิดสมรยีน (VIGS) ระบบถูกจ้างมาเพื่อปิดปากการแสดงออกของพวกเขาในผ้าฝ้าย 456-, 486- และ 444-bp ชิ้นส่วนของ GhTPS1, GhTPS2 และ GhTPS3 ถูกนำมาใช้และอะโกที่สอดคล้องกันในไฟ ltrated ลงต้นกล้าฝ้าย สามสิบวันหลังจากการฉีดวัคซีนการแสดงออกของยีนเป้าหมายในใบจริงการวิเคราะห์เชิงปริมาณแบบ real-time RT-PCR (qRT-PCR) ในแต่ละโรงงาน V​​IGS รับการรักษาที่เลือกบันทึกของยีนเป้าหมายลดลงกว่า 85% ในขณะที่ไม่ใช่เป้าหมาย TPS การแสดงออกของยีนที่ได้รับผลกระทบส่วนใหญ่ (รูปที่ 5.) สอดคล้องกับยีนเป้าหมายปราบปรามการผลิตของ b-caryophyllene (18) และ-humulene (19) ลดลง 90% ในโรงงาน GhTPS1-เงียบ (รูปที่. 5B, เสริมรูปที่ 3A. และ B) และ b-elemene ( 10), Guaia-1 (5), 11-ไดอีน (24) และ Guaia-1 (10), 11-ไดอีน (25) เป็นจิตวิทยาในใบ GhTPS2-ปราบปราม (รูปที่. 5B, เสริมรูป. 2A การและ C) ในโรงงาน GhTPS3-เงียบ-pinene (14), b-pinene (15) และ b-phellandrene (22) เนื้อหาลดลงกว่า 80% ในขณะที่ b-myrcene (16) ไม่เปลี่ยนแปลง (รูปที่. 5B, เสริม มะเดื่อ. 2D และ E) เช่นความสัมพันธ์ระหว่างการปราบปรามการแสดงออกของยีนทีพีเอสและลดลงเนื้อหาของผลิตภัณฑ์ terpene แนะนำ silencing แม่นยำของยีนเป้าหมายและกิจกรรม RMS ไฟ con ในสาม GhTPSs ใน Planta