. Whole-mount in situ hybridization

. Whole-mount in situ hybridization was performed as described by Futahashi and Fujiwara (2005, 2008b). RNA probe for each gene was prepared using the DIG RNA Labeling Kit (Roche Biochemicals, Mannheim, Germany). Digoxigenin-labeled antisense RNA probes were used, and the color reaction was performed at room temperature in 100 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, and 50 mM MgCl2 (pH 9.5) containing 3.5 ml/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phos- phate, 4-toluidine salt, and 4.5 ml/ml nitroblue tetrazolium chloride. Digoxigenin-labeled sense strand probes were used as negative controls. Sequence information about species-specific probes is shown in supporting information Table S2. Topical 20-hydro- xyecdysone (20E) application was performed as described by Fu- tahashi and Fujiwara (2007).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

. ทั้งแบบติดใน situ hybridization ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ โดย Futahashi และ Fujiwara (2005, 2008b) อาร์เอ็นเอโพรบสำหรับแต่ละยีนถูกจัดทำขึ้นโดยขุด RNA ฉลากชุด (โรชชีวเคมี มานไฮม์ เยอรมนี) ใช้โพรบ Digoxigenin ป้าย antisense RNA และทำสีปฏิกิริยาที่อุณหภูมิห้องในทริสเรทติ้ง HCl 100 มม. 100 มม. NaCl และ 50 มม. MgCl2 (pH 9.5) ที่ มี phate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phos-3.5 มิลลิลิตร/ml เกลือ 4 toluidine, 4.5 มิลลิลิตร/ml nitroblue tetrazolium คลอไรด์ รู้สึกชื่อ Digoxigenin สาระหัวถูกใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบ ลำดับข้อมูลเกี่ยวกับสายโพรบจะแสดงอยู่ในข้อมูลตาราง S2 สนับสนุน แอพลิเคชันเฉพาะ 20-ไฮโดร-xyecdysone (20E) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ โดย tahashi ฟูและ Fujiwara (2007)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. ทั้ง-mount ในการผสมพันธุ์แหล่งกำเนิดได้ดำเนินการตามที่อธิบาย Futahashi และฟูจิวาระ (2005, 2008b) สอบสวน RNA สำหรับแต่ละยีนถูกจัดทำขึ้นโดยใช้ขุด RNA ฉลาก Kit (Roche ชีวเคมี, Mannheim, เยอรมนี) digoxigenin ป้าย antisense probes RNA ถูกนำมาใช้และการเกิดปฏิกิริยาสีได้ดำเนินการที่อุณหภูมิห้องใน 100 มิลลิเมตร Tris-HCl, โซเดียมคลอไรด์ 100 มิลลิเมตรและขนาด 50 มม MgCl2 (pH 9.5) ที่มี 3.5 มล. / มล. 5 Bromo-4-chloro- 3 indolyl-phos- phate เกลือ 4 toluidine และ 4.5 ​​มล. / ml nitroblue tetrazolium คลอไรด์ digoxigenin ป้าย probes สาระความรู้สึกที่ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ ลำดับข้อมูลเกี่ยวกับยานสำรวจสายพันธุ์เฉพาะที่แสดงให้เห็นในการสนับสนุนข้อมูลตาราง S2 เฉพาะ 20 hydro- xyecdysone (20E) แอพลิเคชันที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบาย tahashi Fu- และฟูจิวาระ (2007)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

. ทั้งภูเขาใน situ hybridization ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดย futahashi และฟูจิวาระ ( 2005 2008b ) RNA probe แต่ละยีนก็เตรียมการขุด RNA ชุดฉลาก ( โรช อัลลิซิน Mannheim , เยอรมัน ) ติดป้าย antisense RNA probes ที่ใช้และสีปฏิกิริยาแสดงอุณหภูมิห้องใน HCl ซึ่ง 100 mM NaCl 100 มม. และ 50 มม. ชุด ( pH 9.5 ) ที่มี 3.5 ml / ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phos - เฟต 4-toluidine , เกลือ , และ 4.5 ml / ขวด nitroblue tetrazolium คลอไรด์ ติดข้อความรู้สึกเส้นฟิวส์ที่ใช้ควบคุมลบ ลำดับข้อมูลเกี่ยวกับเผ่าพันธุ์ - เฉพาะวัดจะแสดงในการสนับสนุนตารางข้อมูล S2 . หัวข้อ 20 น้ำ xyecdysone ( 20e ) การกระทำตามที่อธิบายไว้โดย Fu - tahashi และฟูจิวาระ ( 2007 )