The C. difficile membrane fraction

The C. difficile membrane fraction was prepared as previously described [19] with some modifications. In brief, nontoxigenic JND13-023 cells were anaerobically cultivated in Brain Heart Infusion broth (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA) for 48 h at 37
C. Bacterial cells were collected by centrifugation at 10,000  g for 10 min at 4
C, washed twice with phosphate-buffered saline (PBS), and suspended in PBS. Cells were then disrupted by sonication (Hielscher Ultrasonics, Teltow, Germany) and centrifuged at 20,000  g for 15 min at 4
C. The supernatant was fractionated by ultracentrifugation at 100,000  g for 1 h at 4
C and the resulting pellet resuspended in EzRIPA lysis buffer (ATTO Corporation, Tokyo, Japan) for use as ntCDMF. The protein content was measured using the Takara BCA Protein Assay Kit

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เศษเยื่อ C. difficile ถูกเตรียมไว้เป็นก่อนหน้านี้อธิบายไว้ [19] ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง สังเขป เซลล์ JND13-023 nontoxigenic ได้ anaerobically เพาะปลูกในสมองหัวใจคอนกรีตซุป (Becton สัน และ บริษัท แฟรงคลินทะเลสาบ NJ สหรัฐอเมริกา) สำหรับ 48 h ที่เซลล์แบคทีเรีย 37 C. ถูกรวบรวม โดย centrifugation ที่ g 10000 ใน 10 นาทีที่ 4 C ล้างสองครั้งกับ buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS), และหยุดชั่วคราวใน PBS เซลล์แล้วระหว่างสองวัน โดย sonication (Hielscher Ultrasonics, Teltow เยอรมนี) และ centrifuged ที่ g 20000 สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ค Supernatant ถูกแบ่ง โดย ultracentrifugation ที่ 100000 g สำหรับ h 1 4 C และเม็ดได้ที่ resuspended ใน EzRIPA lysis บัฟเฟอร์ (ATTO คอร์ปอเรชั่น โตเกียว ญี่ปุ่น) สำหรับใช้เป็น ntCDMF โปรตีนถูกวัดโดยใช้ Takara BCA โปรตีน Assay Kit

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ส่วนเมมเบรน C. difficile ถูกจัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [19] ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ในช่วงสั้น ๆ nontoxigenic JND13-023 เซลล์ได้รับการปลูกฝังแบบโรบิกในน้ำซุป Infusion สมองหัวใจ (Becton ดิกคินสันและ บริษัท แฟรงคลินเลค, นิวเจอร์ซีย์สหรัฐอเมริกา) เวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เซลล์แบคทีเรียได้จากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000? กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสล้างสองครั้งด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส) และลอยอยู่ในพีบีเอส เซลล์จากนั้นกระจัดกระจายโดย sonication (Hielscher Ultrasonics, Teltow, เยอรมนี) และหมุนเหวี่ยงที่ 20,000? กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ใสถูก fractionated โดย ultracentrifugation ที่ 100,000? กรัมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและเม็ดผล resuspended ในบัฟเฟอร์สลาย EzRIPA (ATTO คอร์ปอเรชั่นโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) เพื่อใช้เป็น ntCDMF ปริมาณโปรตีนที่ได้รับการวัดโดยใช้ Takara BCA โปรตีนชุดทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

c . difficile เยื่อส่วนที่เตรียมไว้ [ 19 ] ก่อนหน้านี้มีการปรับเปลี่ยน ในช่วงสั้น ๆ , nontoxigenic jnd13-023 เซลล์มีน้ำฉีดพเลี้ยงสมอง หัวใจ ( เบคตอนดิกคินสันและ บริษัท , Franklin Lakes , NJ , USA ) 48 ชั่วโมง 37
C เซลล์แบคทีเรียมีจำนวน 3 , 000  กรัมใน 10 นาทีที่ 4
Cล้างสองครั้งกับฟอสเฟตในน้ำเกลือ ( PBS ) และแขวนลอยใน PBS เซลล์ จึงต้อง sonication ( hielscher อัลตราโซนิกส์ Teltow , เยอรมนี ) และระดับที่ 20 , 000  G สำหรับ 15 นาทีที่ 4
C สูงเป็นลำดับ โดย ultracentrifugation ที่ 100000  กรัมเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน 4
C และส่งผลให้เม็ด resuspended ใน ezripa การสลายบัฟเฟอร์ ( อัตโต บริษัท โตเกียวญี่ปุ่น ) เพื่อใช้เป็น ntcdmf . ปริมาณโปรตีนถูกวัดโดยใช้ Takara BCA โปรตีน ( ชุด