Bacterial strain, conjugal plasmid,

Bacterial strain, conjugal plasmid, and growth media.
Pseudomonas putida KT2440::lacIq1, harboring the conjugative plasmid pKJK10, was used as the donor strain. Plasmid pKJK10 is a derivative of the 54-kb natural rhizosphere plasmid pKJK5 carrying natural tetracycline resistance (30).
pKJK10 has the gfp(mut3b) gene inserted downstream of the lac-repressible promoter PA1-04/03 (22, 30).
The plasmid donor strain was grown in Luria-Bertani (LB) broth
The broth cultures were grown with vigorous shaking (250 rpm) at 30°C for 20 h.
The cells were washed twice and resuspended in sterile saline (9‰ NaCl).
The plasmid donor cells were verified for repression of the gfp gene by flow cytometry prior to inoculation into microcosms.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องใช้แบคทีเรีย conjugal plasmid และเจริญเติบโตของสื่อ Putida ลี KT2440::lacIq1, harboring pKJK10 conjugative plasmid ถูกใช้เป็นสายพันธุ์ของผู้บริจาค Plasmid pKJK10 เป็นอนุพันธ์ของ pKJK5 plasmid 54 kb ไรโซสเฟียร์ธรรมชาติกำลังต้านทานธรรมชาติเตตราไซคลีน (30) pKJK10 มียีน gfp(mut3b) แทรกปลายน้ำของโปรโมเตอร์ลัค repressible PA1-04/03 (22, 30) Plasmid บริจาคพันธุ์ที่ปลูกในซุป Luria-Bertani (ปอนด์) วัฒนธรรมซุปได้เติบโตขึ้น ด้วยคึกคักสั่น (250 รอบต่อนาที) ที่ 30° C สำหรับ 20 hเซลล์ถูกล้างสองครั้ง และ resuspended ในการใส่น้ำเกลือ (9‰ NaCl)Plasmid บริจาคเซลล์ถูกตรวจสอบสำหรับปราบปรามของยีน gfp โดยเซลล์กระแสก่อน inoculation เป็น microcosms

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สายพันธุ์แบคทีเรีย, พลาสมิดสมรสและสื่อการเจริญเติบโต.
Pseudomonas putida KT2440 :: lacIq1 อาศัยพลาสมิด conjugative pKJK10 ใช้เป็นสายพันธุ์ที่ผู้บริจาค พลาสมิด pKJK10 เป็นอนุพันธ์ของ 54 กิโลธรรมชาติบริเวณรากพลาสมิด pKJK5 แบกต้านทาน tetracycline ธรรมชาติ (30).
pKJK10 มี GFP (mut3b) ยีนแทรกปลายน้ำของโปรโมเตอร์ครั่ง-repressible PA1-04 / 03 (22, 30).
สายพันธุ์พลาสมิดผู้บริจาคได้รับการปลูกใน Luria-Bertani (LB) น้ำซุป
น้ำซุปวัฒนธรรมที่ได้รับการปลูกด้วยพลังสั่น (250 รอบต่อนาที) ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง.
เซลล์ถูกล้างสองครั้งและ resuspended ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ (9 ‰ NaCl).
เซลล์พลาสมิดผู้บริจาคได้รับการตรวจสอบเพื่อการปราบปรามของยีน GFP โดย cytometry ไหลก่อนที่จะมีการฉีดวัคซีนเป็นจุลภาค

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แบคทีเรียสายพันธุ์คู่สมรสพลาสมิด และสื่อการ
ของ enrichment kt2440 : : laciq1 กรมเจ้าท่า , pkjk10 พลาส conjugative เคยใช้เป็นผู้บริจาคให้เมื่อย พลาสมิด pkjk10 เป็นอนุพันธ์ของรากธรรมชาติ ในบางครั้ง pkjk5 แบก tetracycline ความต้านทานธรรมชาติ ( 30 )
pkjk10 มียีน GFP ( mut3b ) แทรกอยู่ท้ายครั่งซึ่งอดกลั้นการ pa1-04 / 03 ( 22 : 30 )
สายพันธุ์สายพันธุ์ที่ปลูกในผู้บริจาคลุเรียแบร์ตานิ ( LB ) ซุป
ซุปวัฒนธรรมปลูกด้วยแรงเขย่า 250 รอบต่อนาทีอุณหภูมิ 30 องศา C ) 20 .
เซลล์ก็ซักสองครั้ง และ resuspended ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ ( 9 ‰ NaCl ) .
เซลล์ผู้บริจาคพลาสมิดถูกตรวจสอบสำหรับการปราบปรามของยีน GFP โดย เครื่องนับเซลล์ก่อนการเข้า microcosms .