. Materials and methods2.1. DWW and

. Materials and methods
2.1. DWW and its characterization
The DWW was collected from the inlet of effluent treatment plant of Sarvottam Dairy (The BhavnagarDistrict co-operative Milk Producer’s Union Ltd.), Bhavnagar, Gujarat, India. The dairy with annual turnover of 320,00,000 L of milk, mainly focuses on packaged milk, butter, buttermilk and ghee. The DWW was filtered to remove suspended particles and stored at 4C until further use. The pH, conductivity and salinity of the DWW were determined using a pH meter (EcoScan pH 6, Eutech Instruments Pte Ltd., Singapore) and conductivity meter (HI 2300, Hanna Instruments, USA). Total solids content of the DWW was determined gravimetrically (Clesceri et al., 1998). COD of the DWW was determined using potassium dichromate-ferrous ammonium sulphate method (Clesceri et al., 1998). The nitrite, nitrate and ammonia concentrations in the DWW were determined using sulphanilamide-NEDA (Clesceri et al., 1998), salicylic acid-sodium hydroxide (Cataldo et al., 1975) and sodium nitroprusside-sodium hypochlorite phenate method (Clesceri et al., 1998), respectively. The phosphate concentration in the DWW was estimated using ascorbic acid method (Clesceri et al., 1998). TIC and TOC content of the DWW was determined by TOC analyser (Elementar, Liqui TOC, Germany). Total sugar content in DWW was estimated by phenol sulphuric acid method (Dubois et al., 1956). Heavy metals present in the DWW were analysed by ICP-OES (Perkin Elmer). The physicochemicalcharacteristic of DWW usedin the present study is shown in Table 1. The COD of DWW was
2593.33± 277.37 mg/L. The concentration of nitrite and nitrate nitrogen was very low or below detectable level; whereas, ammoniacal nitrogen was present at concentration of 277.40± 10.75mg/ L. The phosphate concentration of DWW was 5.96 ± 0.04 mg/L. Concentration of total organic carbon (TOC) and total inorganic carbon (TIC) was found to be 116.23 ± 4.38 and 373.20 ±5.47 mg/ L, respectively. Moreover, DWW also contained a variety of trace minerals viz. Ca, Mg, K, Fe, Zn, Mn, Cu, etc. which are required micronutrients for the growth of microalgae. The nutrient profiling of DWW used in the present study is similar to the characteristics of DWW reported earlier (Lu et al., 2015).
2.2. Growth of microalgae in DWW
Microalgae used in this study, Acutodesmus dimorphus isolated from an industrial effluent polluted stream, have optimum cultivation temperature of 35C(Chokshi et al., 2015) and exhibits thermotolerant characteristics (Chokshi et al., 2016). The growth experiment was carried out in triplicate in 1 L Erlenmeyer flasks containing 500 mL of DWW (raw DWW without sterilization or any dilution) inoculated with 10% of actively growing culture [(0.96± 0.06)106 cellsmL1] ofA. dimorphus. The flasks were incubated at 35C under 60lmol m2 s1 light intensity (cool white fluorescent lights) and 12:12h of light:dark period. Flasks were manually shaken thrice a day to avoid adherence of the cells to the surface of the flasks. On 8th day, culture was harvested by centrifugation and biomass was dried in an oven at 60C. To check thegrowthof A. dimorphus inDWW,culturewas withdrawn every alternate day. To determine the dry cell weight (DCW), 50 mL culture was centrifuged at 9000 rpm for 5 min, supernatant was discarded and cell pellet was dried in an oven at 60C until constant weight was observed. The DCW was then determined gravimetrically. For cell count, 10 ml culture was harvested by centrifugation, supernatant was discarded and cell pellet was re-suspended in 10 ml distilled water (appropriate dilutions
Table 1 Physico-chemical characteristics of DWW used in the present study.
Parameter Units Value pH – 7.8 Colour – Milky White Odour – Offensive Conductivity mS 1.87 Salinity g/L 1.33 Total Solids g/L 2.8 ± 0.02 COD mg/L 2593.33 ± 277.37 Nitrite–Nitrogen mg/L 0.95 ±0.01 Nitrate–Nitrogen mg/L ND Ammoniacal–Nitrogen mg/L 277.40 ± 10.75 Phosphate mg/L 5.96 ± 0.04 Total Sugar mg/L 47.70 ± 3.91 TIC mg/L 373.20 ± 5.47 TOC mg/L 116.23 ± 4.38 Metals B mg/L 0.15 Ca mg/L 38.10 Cd mg/L 0.35 Co mg/L 0.65 Cr mg/L 0.50 Cu mg/L 0.30 Fe mg/L 1.10 K mg/L 11.75 Mg mg/L 28.45 Mn mg/L 1.25 Na mg/L 345.65 Ni mg/L 0.80 Pb mg/L 0.65 Zn mg/L 0.30
ND: not detected.
456 K. Chokshi et al./Bioresource Technology 221 (2016) 455–460
weremade,whenevernecessary).The contentwasthoroughlyvortexed and cell count was performed using FlowCAM VS series portable model (Fluid Imaging Technologies, USA). To check the uptake of nutrients from DWW, 50 ml culture was centrifuged at 9000 rpm for 5 min; supernatant was filtered through Whatman filter paper (GF/C) and stored into refrigerator until further used.
2.3. Determination of lipid, carbohydrate and crude protein content of microalgae
Lipid was extracted from the dried microalgal biomass using chloroform: methanol (1:2, v/v) (Bligh and Dyer, 1959). Approximately200 mgofbiomasswasmixedin30 mLchloroform:methanol and ultrasonicated for 2 min (4–5 cycles)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

. วัสดุและวิธีการ2.1. DWW และสมบัติของDWW รวบรวมจากทางเข้าของโรงบำบัด effluent นม Sarvottam (The BhavnagarDistrict สหกรณ์นมผลิตยูเนี่ยน จำกัด), เบฟเนการ์ Gujarat อินเดีย นมกับหมุนเวียนประจำปีของ 320,00,000 L นม ส่วนใหญ่เน้นบรรจุนม เนย เนย และมอง DWW การแก้ไข filtered เพื่อเอาอนุภาคระงับ และเก็บไว้ที่ 4 C จนใช้ต่อไป ค่า pH ค่าการนำไฟฟ้า และความเค็มของ DWW ถูกตัดสินโดยใช้ pH มิเตอร์ (EcoScan pH 6, Eutech Pte จำกัด สิงคโปร์) และวัดค่าการนำไฟฟ้า (HI 2300, Hanna เครื่อง สหรัฐอเมริกา) กำหนดปริมาณของแข็งทั้งหมดของ DWW gravimetrically (Clesceri et al. 1998) COD ของ DWW ถูกกำหนดโดยใช้เหล็ก dichromate โพแทสเซียมซัลเฟตแอมโมเนีย (Clesceri et al. 1998) กำหนดความเข้มข้นของไนไตรท์ ไนเตรท และแอมโมเนียใน DWW ใช้ sulphanilamide-เยาวชน (Clesceri et al. 1998), กรดโซเดียมไฮดรอกไซด์ (Cataldo et al. 1975) และโซเดียม nitroprusside โซเดียมไฮโปคลอไรต์ phenate วิธี (Clesceri et al. 1998), ตามลำดับ ความเข้มข้นของฟอสเฟตใน DWW การประมาณโดยวิธีกรดแอสคอร์บิค (Clesceri et al. 1998) เนื้อหา TIC และ TOC ของ DWW ถูกกำหนด โดยวิเคราะห์ TOC (Elementar, Liqui TOC เยอรมนี) น้ำตาลรวมเนื้อหาใน DWW ประมาณ โดยวิธีกรดซัลฟูริกฟีนอล (Dubois et al. 1956) โลหะหนักอยู่ใน DWW ถูกวิเคราะห์ ด้วย ICP-OES (เพอร์เอลเมอ) Physicochemicalcharacteristic ของ DWW usedin การศึกษาแสดงในตารางที่ 1 คือ COD DWW2593.33± 277.37 มิลลิกรัม/ลิตร ความเข้มข้นของไนไตรท์และไนเตรทไนโตรเจนได้ต่ำมาก หรือต่ำ กว่า ระดับที่ตรวจจับได้ ขณะ ammoniacal ไนโตรเจนถูกความเข้มข้นของ 277.40± 10.75 mg/l ความเข้มข้นของฟอสเฟตของ DWW เป็น 5.96 ± 0.04 มิลลิกรัม/ลิตรความเข้มข้นของคาร์บอนอินทรีย์รวม (TOC) และอนินทรีย์คาร์บอนรวม (TIC) พบจะ 116.23 ± 4.38 และ 373.20 ±5.47 mg / L ตามลำดับ นอกจากนี้ DWW ยังประกอบด้วยความหลากหลายของแร่ธาตุ viz. Ca, Mg, K, Fe, Zn, Mn, Cu ฯลฯ ซึ่งเป็นธาตุอาหารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของสาหร่าย Profiling สารอาหารของ DWW ที่ใช้ในการศึกษาจะคล้ายกับลักษณะของรายงานก่อนหน้านี้ DWW (Lu et al. 2015)2.2. การเจริญเติบโตของสาหร่ายใน DWWสาหร่ายที่ใช้ในการศึกษานี้ Acutodesmus dimorphus แยกจากสตรีมเสียอุตสาหกรรม effluent มีการเพาะปลูกที่เหมาะสมอุณหภูมิ 35 C (Chokshi et al. 2015) และแสดงลักษณะ thermotolerant (Chokshi et al. 2016) ทดลองเติบโตดำเนินลข้อใน 1 L Erlenmeyer flasks บรรจุ 500 mL DWW (ดิบ DWW ไม่ทำหมันหรือเจือจางใด ๆ) inoculated กับ 10% ของกำลังเติบโตวัฒนธรรม [(0.96± 0.06) 106 cellsmL 1] เสิร์ฟ dimorphus ได้รับการกก flasks การที่ 35 C ภายใต้ 60lmol m 2 s 1 ความเข้มแสง (ไฟเย็นสีขาว fluorescent) และ h ของแสง: มืดระยะเวลา 12:12 ขวดด้วยตนเองถูกเขย่าสามครั้งต่อวันเพื่อหลีกเลี่ยงการยึดเซลล์ผิวของ flasks ในวันที่ 8 วัฒนธรรมถูกเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยง และชีวมวลถูกอบแห้งในเตาอบที่ 60 c การตรวจ thegrowthof A. dimorphus inDWW, culturewas ถอนวันเว้นวัน การตรวจสอบน้ำหนักเซลล์แห้ง (DCW) วัฒนธรรม 50 mL เป็นผลิตภัณฑ์ที่ 9000 rpm 5 นาที supernatant ถูกละทิ้ง และเซลล์เม็ดแห้งในเตาอบที่ 60 C จนน้ำหนักคงพบว่า การ DCW แล้วพิจารณา gravimetrically สำหรับเซลล์จำนวน วัฒนธรรม 10 มล.ถูกเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยง supernatant ถูกละทิ้ง และเซลล์เม็ดถูกเลื่อนออกไปอีกครั้งในน้ำกลั่น 10 มล. (เจือจางที่เหมาะสมตารางที่ 1 ลักษณะดิออร์ของ DWW ที่ใช้ในการศึกษาพารามิเตอร์หน่วยค่า pH – 7.8 การนำรังเกียจสี –สีขาวกลิ่น – mS 1.87 เค็ม 1.33 แยกของเหลวแยก 2.8 ± 0.02 COD mg/L 2593.33 ± 277.37 ไนไตรท์ไนโตรเจน mg/L 0.95 ค่าความคลากเคลื่อนไนเตรท – ไนโตรเจน mg/L ND Ammoniacal – ไนโตรเจน mg/L 277.40 ± 10.75 ฟอสเฟต mg/L 5.96 ± 0.04 น้ำตาลรวม mg/L 47.70 ± 3.91 TIC mg/L 373.20 ± 5.47 TOC mg/L 116.23 ± 4.38 โลหะ B mg/L 0.15 Ca mg/L ซี 38.10 mg/L 0.35 Co mg/L 0.65 Cr mg/L 0.50 mg Cu/L 0.30 Fe mg/L 1.10 K mg/L 11.75 มิลลิกรัม mg/L 28.45 Mn mg/L 1.25 Na mg/L 345.65 Ni mg/L 0.80 Pb mg/L 0.65 Zn mg/L 0.30ND: ไม่พบร้อยเอ็ด/Bioresource K. Chokshi 456 เทคโนโลยี 221 (2016) 455 – 460weremade, whenevernecessary) จำนวน contentwasthoroughlyvortexed และเซลล์ถูกดำเนินการโดยใช้แบบพกพาชุด FlowCAM VS (เทคโนโลยีการถ่ายภาพของเหลว สหรัฐอเมริกา) การตรวจสอบการดูดซึมของสารอาหารจาก DWW วัฒนธรรม 50 มล.ผลิตภัณฑ์ที่ 9000 rpm 5 นาที supernatant filtered ผ่าน Whatman filter กระดาษ (GF/C) และเก็บไว้ในตู้เย็นจนกระทั่งใช้ต่อไป2.3. ความมุ่งมั่นของไขมัน คาร์โบไฮเดรต และโปรตีนเนื้อหาของสาหร่ายไขมันถูกแยกจากชีวมวล microalgal อบแห้งที่ใช้คลอโรฟอร์ม: เมทานอล (1:2, v/v) (Bligh และดายเออร์ 1959) Approximately200 mgofbiomasswasmixedin30 mLchloroform:methanol และ ultrasonicated สำหรับ 2 นาที (4-5 รอบ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. วัสดุและวิธีการ
2.1 DWW และลักษณะของ
DWW ถูกเก็บรวบรวมจากการไหลเข้าของ EF FL uent โรงบำบัดของ Sarvottam นม (ใน BhavnagarDistrict สหกรณ์ผู้ผลิตนมยูเนี่ยน จำกัด ), Bhavnagar รัฐคุชราตอินเดีย นมที่มีผลประกอบการประจำปีของ 320,00,000 L ของนมส่วนใหญ่เน้นการบรรจุนมเนยเนยและเนย DWW ถูก Fi ltered เพื่อเอาอนุภาคแขวนลอยและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนใช้งานต่อไป ค่า pH การนำและความเค็มของ DWW ได้รับการพิจารณาโดยใช้เครื่องวัดความเป็นกรดด่าง (พีเอช EcoScan 6 Eutech เครื่องดนตรี Pte Ltd. ประเทศสิงคโปร์) และการนำเมตร (HI 2300 HANNA INSTRUMENTS, สหรัฐอเมริกา) ปริมาณของแข็งที่รวมของ DWW ถูกกำหนด gravimetrically (Clesceri et al., 1998) ซีโอดีของ DWW ถูกกำหนดโดยใช้วิธีโพแทสเซียมซัลเฟตแอมโมเนียมไดโครเมธาตุเหล็ก (Clesceri et al., 1998) ไนไตรท์ไนเตรตและแอมโมเนียความเข้มข้นใน DWW ได้รับการพิจารณาโดยใช้ sulphanilamide-NEDA (Clesceri et al., 1998), Salicylic Acid โซเดียมไฮดรอกไซ (Cataldo et al., 1975) และวิธีการโซเดียม nitroprusside โซเดียมไฮโปคลอไร phenate (Clesceri et al, ., 1998) ตามลำดับ ความเข้มข้นของฟอสเฟตใน DWW เป็นที่คาดกันโดยใช้วิธีการวิตามินซี (Clesceri et al., 1998) TIC และ TOC เนื้อหาของ DWW ถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ TOC (Elementar, Liqui TOC, เยอรมนี) ปริมาณน้ำตาลทั้งหมดใน DWW ถูกประเมินโดยวิธีฟีนอลกรดกำมะถัน (บัว et al., 1956) โลหะหนักในปัจจุบัน DWW นำมาวิเคราะห์โดย ICP-OES (Perkin Elmer) physicochemicalcharacteristic ของ DWW usedin การศึกษาครั้งนี้จะแสดงในตารางที่ 1 COD ของ DWW เป็น
2,593.33 ± 277.37 มิลลิกรัม / ลิตร ความเข้มข้นของไนไตรท์และไนเตรทไนโตรเจนต่ำมากหรือต่ำกว่าระดับที่ตรวจพบ; ขณะไนโตรเจนแอมโมเนียเป็นปัจจุบันที่ความเข้มข้น 277.40 ± 10.75mg / ลิตรความเข้มข้นของฟอสเฟต DWW เป็น 5.96 ± 0.04 มิลลิกรัม / ลิตร ความเข้มข้นของคาร์บอนอินทรีย์ (TOC) และรวมอนินทรีคาร์บอนไดออกไซด์ (TIC) ถูกพบว่าเป็น 116.23 ± 4.38 และ 373.20 ± 5.47 มิลลิกรัม / ลิตรตามลำดับ นอกจากนี้ยังมี DWW ความหลากหลายของแร่ธาตุ ได้แก่ Ca, Mg, K, Fe, Zn, Mn, Cu ฯลฯ ซึ่งจำเป็นต้องมีแร่ธาตุอาหารสำหรับการเจริญเติบโตของสาหร่ายทะเลขนาดเล็ก สารอาหาร Fi Pro หลิงของ DWW ใช้ในการศึกษาครั้งนี้จะคล้ายกับลักษณะของ DWW ที่มีการรายงานก่อนหน้านี้ (Lu et al., 2015).
2.2 การเจริญเติบโตของสาหร่ายใน DWW
สาหร่ายขนาดเล็กที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ Acutodesmus dimorphus แยกจาก EF อุตสาหกรรมชั้น uent กระแสปนเปื้อนมีอุณหภูมิการเพาะปลูกที่เหมาะสมของ 35? C (Chokshi et al., 2015) และการจัดแสดงทนร้อนลักษณะ (Chokshi et al., 2016) การทดลองการเจริญเติบโตได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าใน 1 ลิตร Erlenmeyer FL ถามที่มี 500 มล DWW (DWW ดิบโดยไม่ต้องฆ่าเชื้อหรือเจือจางใด ๆ ) เชื้อด้วย 10% ของวัฒนธรรมการเจริญเติบโตอย่างแข็งขัน [(0.96 ± 0.06)? 106 cellsmL? 1] OFA dimorphus ชั้นขอให้ได้รับการบ่มที่ 35 C ภายใต้ 60lmol ม. 2 วินาที 1 ความเข้มของแสง (ไฟ FL uorescent เย็นสีขาว) และ 12:? 12h ของแสง: ช่วงเวลาที่มืด ขวดถูกเขย่าด้วยตนเองสามครั้งต่อวันเพื่อหลีกเลี่ยงการยึดมั่นของเซลล์ไปยังพื้นผิวของฟลอริด้าถาม ในวันที่ 8 วัฒนธรรมได้รับการเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงและชีวมวลแห้งในเตาอบที่ 60 องศาเซลเซียส หากต้องการตรวจสอบ thegrowthof A. dimorphus inDWW, culturewas ถอนทุกวันอื่น เพื่อตรวจสอบน้ำหนักเซลล์แห้ง (DCW) 50 มิลลิลิตรวัฒนธรรมหมุนเหวี่ยงที่ 9000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที, ใสทิ้งและตะกอนเซลล์ถูกทำให้แห้งในเตาอบที่ 60 องศาเซลเซียสจนกระทั่งน้ำหนักคงเป็นที่สังเกต DCW ถูกกำหนดแล้ว gravimetrically สำหรับการนับเซลล์วัฒนธรรมมล. 10 ได้รับการเก็บเกี่ยวโดยหมุนเหวี่ยงใสทิ้งและตะกอนเซลล์ใหม่ที่กำลังลอยอยู่ใน 10 มล. น้ำกลั่น (เจือจางที่เหมาะสม
ตารางที่ 1 ลักษณะทางกายภาพและทางเคมีของ DWW ใช้ในการศึกษาในปัจจุบัน.
พารามิเตอร์หน่วยค่าความเป็นกรด - 7.8 สี - มิลค์กี้สีขาวกลิ่น - น่ารังเกียจการนำ mS 1.87 เค็มกรัม / ลิตร 1.33 ของแข็งทั้งหมดกรัม / ลิตร 2.8 ± 0.02 COD มิลลิกรัม / ลิตร 2,593.33 ± 277.37 ไนไตรท์ไนโตรเจน mg / l 0.95 ± 0.01 ไนเตรตไนโตรเจน mg / l ND แอมโมเนียไนโตรเจนมิลลิกรัม / L 277.40 ± 10.75 ฟอสเฟตมิลลิกรัม / ลิตร 5.96 ± 0.04 ปริมาณน้ำตาลรวมมิลลิกรัม / ลิตร 47.70 ± 3.91 TIC มิลลิกรัม / ลิตร 373.20 ± 5.47 TOC มิลลิกรัม / ลิตร 116.23 ± 4.38 โลหะ B มิลลิกรัม / ลิตร 0.15 Ca มิลลิกรัม / ลิตร 38.10 Cd mg / l 0.35 ร่วมมิลลิกรัม / ลิตร 0.65 Cr มิลลิกรัม / ลิตร 0.50 ลูกบาศ์กมิลลิกรัม / ลิตร 0.30 เฟ mg / l 1.10 K มิลลิกรัม / ลิตร 11.75 มิลลิกรัมมิลลิกรัม / ลิตร 28.45 Mn มิลลิกรัม / ลิตร 1.25 นา mg / l 345.65 Ni มิลลิกรัม / ลิตร 0.80 Pb มิลลิกรัม / ลิตร 0.65 Zn มิลลิกรัม / ลิตร 0.30
ND:. ตรวจไม่พบ
456 เค Chokshi et al./Bioresource เทคโนโลยี 221 (2016) 455-460
weremade, whenevernecessary) ได้โดยเริ่มต้นนับ contentwasthoroughlyvortexed และมือถือได้รับการดำเนินการโดยใช้ FlowCAM? VS ชุดรูปแบบพกพา (เทคโนโลยีการถ่ายภาพ Fluid, สหรัฐอเมริกา) ในการตรวจสอบการดูดซึมของสารอาหารจาก DWW 50 มล. วัฒนธรรมได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 9000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที; ใสถูก Fi ltered ผ่าน Whatman Fi กระดาษกรอง (GF / C) และเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ต่อไป.
2.3 ความมุ่งมั่นของไขมันคาร์โบไฮเดรตและโปรตีนของสาหร่าย
ไขมันเป็นสารสกัดจากชีวมวลสาหร่ายแห้งโดยใช้คลอโรฟอร์ม: เมทานอล (1: 2, v / v) (ไบลห์และผ้า 1959) Approximately200 mgofbiomasswasmixedin30 mLchloroform: เมทานอลและ ultrasonicated เป็นเวลา 2 นาที (4-5 รอบ)