Materials and MethodsSeeds of two I

Materials and Methods
Seeds of two Indian accessions of Jatropha curcas viz. “RSAD” accession was obtained from Rain Shadow Area Development Department of Andhra Pradesh (A.P.) State Government, (Hyderabad, India), whereas the “KM” accession was collected from Venkatapur Village, Sircilla Mandal of Karimnagar District, A.P. at 18.43o N 79.15o E latitude. Both accessions were raised in the Experimental Botanical Garden, Department of Botany, Osmania University, Hyderabad, India.
Preliminary experiments were carried out with to selecting the most responsive explants. The hypocotyl and epicotyl explants were obtained from six‐days‐old seedlings, cotyledonary node (CN) explants were obtained from 21‐ days‐old seedlings and the axillary node (AN), shoot‐tip (ST), petiole (P) and leaf (L) explants from two‐year‐old mother plants growing in the Botanical Garden. The present study was carried out only with CN, AN and ST explants since the other explants did not respond. The explants were thoroughly surface‐sterilized using 10% (v/v) hydrogen peroxide, 50% (v/v) ethanol, 0.1% (w/v) mercuric chloride and Tween‐20, rinsed with sterile distilled water and inoculated with a pair of sterile forceps into 25 × 150 mm culture tubes on autoclaved and cooled MS supplemented with 3% (w/v) sucrose and solidified with 0.8% (w/v) Phyta‐ agar (Himedia). The pH of the medium was adjusted to 5.8 before autoclaving.
Forty explants were inoculated for each experiment with three replicates amounting to a total of 120 explants per accession. All the cultures were maintained in a sterile growth room with 16 hrs photoperiod at 25 ± 2ºC with light intensity of 60 µ Em2/s and 50 % relative humidity. Different culture media based on MS with supplementation of growth regulators were used. Citric acid (CA) 520.5 μM (w/v) was supplemented to all the media to prevent browning of tissue due to exudation of latex from explants. Compositions of the media (Table
1) are given below.
Medium‐A: MS supplemented with IAA (2, 8 μM), Kn (13.93 μM), AS (27.14 μM), Glutamine (Glu) (684.2 μM) and CA (520.5 μM). Medium‐B: MS supplemented with 2, 4‐D (9.04 μM), Kn (4.6 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM). Medium‐C: MS supplemented with 2, 4‐D (1.80 μM), BA (1.7 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).




Shoots which proliferated from all explants on medium‐A were sub‐cultured
on medium‐D for shoot elongation: Medium‐D: MS supplemented with GA3 (5.7
μM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Calluses which developed from explants on medium‐B were sub‐cultured on medium‐E for shoot induction: Medium‐E: MS supplemented with NAA (2.68 μM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Explants with somatic embryos (from medium‐C) were transferred to medium‐F for conversion of somatic embryos to plantlets.
Medium‐F: MS supplemented with BA (6.6 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Healthy, well developed and elongated shoots (3 cm) were transferred to medium‐G for root induction: Medium‐G: Half strength MS supplemented with IBA (14.7 μM), Glu (684.2 μM) and CA (520.5 μM).
Healthy plantlets with well‐developed roots were transferred to pots and gradually acclimated in the glasshouse in the shade for two weeks by enclosing the pots in polythene bags. Subsequently, the plants were transferred to the sunny areas of the glasshouse and later to the field.
Each experiment was repeated twice with three replicates/treatments Data pertaining to the study was recorded, statistically analyzed and presented as mean + standard error of the three replicates.
Histological studies were conducted to identify the morphogenetic pathway (organogenesis or somatic embryogenesis) either directly from explants or indirectly from callus according to Luna (1998). The materials were fixed in alcohol and glacial acetic acid 3 : 1. The fixed tissue was passed through a series of dehydration steps in tertiary butyl alcohol (30 ‐ 70%), and xylene was used as a clearing agent to make the tissue translucent. The material was then impregnated with paraffin (56 ‐ 58ºC) and placed in the embedding unit (Electron Corporation, model Shandon Histocenter‐3). The tissue was processed by Citadel‐2000 Thermo Shandon and stained with haemotoxylin and eosin, using an automated Leica Auto stainer‐Xl. These blocks were mounted and trimmed using a microtome (Leica model RM 2155) for very thin microsections of 6 ‐ 8 µm. The sections were mounted on slides, dewaxed and observed under the microscope‐ (Leitz Diaplan) and microphotographs of different stages of shoot‐bud induction or somatic embryogenesis were obtained with a digital camera.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเมล็ดของ accessions อินเดียสองภาคยานุวัติสบู่ curcas ได้แก่ "RSAD" ได้รับจากฝนเงาพื้นที่พัฒนากรมของรัฐอานธรประเทศ (อ่าวนาง) รัฐรัฐบาล, (ไฮเดอราบัด อินเดีย), ในขณะที่ภาคยานุวัติ "KM" รวบรวมจากอ่าวนาง Venkatapur วิลเลจ Sircilla Mandal ของ Karimnagar ริค ที่ 18.43o N 79.15o E แล ทั้ง accessions ขึ้นทดลองสวนพฤกษศาสตร์ ภาควิชา พฤกษศาสตร์ มหาวิทยาลัย Osmania ไฮเดอราบัด อินเดียทดลองเบื้องต้นได้ดำเนินการด้วยการเลือก explants สุดตอบสนอง Explants hypocotyl และ epicotyl ได้รับมาจากกล้าไม้ six‐days‐old, explants cotyledonary โหน (CN) ได้รับมาจากกล้าไม้ days‐old 21‐ และโหนรักแร้ (AN), shoot‐tip (ST), petiole (P) และใบไม้ (L) explants จาก two‐year‐old แม่พืชเติบโตในสวนพฤกษศาสตร์ ทำการศึกษานำเสนอออกมาเท่ากับ CN, AN และเซนต์ explants ตั้งแต่ explants อื่นไม่ตอบสนอง Explants ถูก surface‐sterilized อย่างละเอียดใช้ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 10% (v/v) เอทานอล 50% (v/v) คลอไรด์ mercuric 0.1% (w/v) และ Tween‐20, rinsed ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ และ inoculated กับคู่ของคีมกอซเป็น 25 × 150 มม. ท่อวัฒนธรรมบน MS autoclaved และเย็น ๆ เสริม ด้วยซูโครส 3% (w/v) และหล่อกับ 0.8% (w/v) Phyta‐ agar (Himedia) PH ของตัวกลางมีการปรับปรุงไป 5.8 ก่อน autoclavingสี่สิบ explants ถูก inoculated สำหรับแต่ละการทดลองกับสามเหมือนกับเกินจำนวน explants 120 ต่อทะเบียน วัฒนธรรมทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ในห้องฆ่าเชื้อเติบโต 16 น.ชั่วโมงที่ 25 ± 2ºC กับความเข้มแสงของ 60 เขต Em2/s และความชื้นสัมพัทธ์ 50% ใช้สื่อวัฒนธรรมอื่นที่ใช้ MS ด้วยแห้งเสริมของหน่วยงานกำกับดูแลการเจริญเติบโต แอซิด ซิทริกกรด μM (CA) 520.5 (w/v) ได้เสริมกับสื่อทั้งหมดให้ browning ของเนื้อเยื่อเนื่องจาก exudation ของยางจาก explants องค์ประกอบการสื่อ (ตาราง1) จะได้รับด้านล่างMedium‐A: MS เสริมกับ IAA (2, 8 μM), ช็อปปิ้ง (13.93 μM), เป็น (27.14 μM), Glutamine (Glu) (684.2 μM) และ CA (520.5 μM) Medium‐B: MS เสริมกับ 2, 4‐D (9.04 μM), ช็อปปิ้ง (4.6 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM) Medium‐C: MS เสริมกับ 2, 4‐D (1.80 μM), BA (1.7 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM) ถ่ายภาพที่ proliferated จาก explants ทั้งหมดใน medium‐A ได้ sub‐culturedใน medium‐D สำหรับยิง elongation: Medium‐D: MS เสริม ด้วย GA3 (5.7ΜM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM)Calluses ซึ่งพัฒนาจาก explants บน medium‐B ได้ sub‐cultured ใน medium‐E สำหรับยิงเหนี่ยวนำ: Medium‐E: MS เสริม ด้วย NAA (2.68 μM), BA (4.4 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM)Explants กับโคลน somatic (จาก medium‐C) ได้โอนย้ายไปที่ medium‐F สำหรับแปลงโคลน somatic plantletsMedium‐F: MS เสริม ด้วย BA (6.6 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM)ถ่ายภาพสุขภาพ พัฒนา และดีอีลองเกต (3 ซม.) ได้โอนย้ายไปที่ medium‐G สำหรับเหนี่ยวนำราก: Medium‐G: ความแรงครึ่ง MS เสริม ด้วยอิบา (14.7 μM), Glu (684.2 μM) และ CA (520.5 μM)Plantlets สุขภาพ มีราก well‐developed ถูกโอนย้ายไปยังหม้อ และค่อย ๆ acclimated ในเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้ในร่มสำหรับสองสัปดาห์ ด้วยหม้อที่เป็นถุง polythene ในเวลาต่อมา พืชได้แล้วด้านกลาสเฮ้าส์ซันนี่ และต่อ ไปยังเขตข้อมูลทดลองแต่ละไม่ซ้ำสองกับสามเหมือนกับ/รักษาข้อมูลเกี่ยวกับการศึกษาถูกบันทึก ทางสถิติวิเคราะห์ และนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย + ข้อผิดพลาดมาตรฐานของเหมือนกับสามศึกษาสรีรวิทยาได้ดำเนินการเพื่อระบุการ morphogenetic ทางเดิน (การเกิดของอวัยวะหรือการเกิดเอ็มบริโอ somatic) จาก explants โดยตรง หรือโดยอ้อม จากแคลลัสตามลูน่า (1998) วัสดุไม่ถาวรในแอลกอฮอล์และกรดอะซิติกน้ำแข็ง 3:1 เนื้อเยื่อถาวรที่ผ่านชุดของขั้นตอนการคายน้ำในระดับตติยภูมิส้ม butyl แอลกอฮอล์ (30 ‐ 70%), และไซถูกใช้เป็นตัวแทนหักบัญชีจะทำให้เนื้อเยื่อโปร่งแสง วัสดุที่ impregnated กับพาราฟิน (56 ‐ 58ºC) แล้ว และอยู่ในหน่วย embedding (อิเล็กตรอน Corporation รุ่น Histocenter‐3 แชนดอน) เนื้อเยื่อถูกประมวลผล โดยแชนดอน Citadel‐2000 เทอร์โม และสี haemotoxylin และ eosin ใช้ stainer‐Xl เป็นไลอัตโนมัติอัตโนมัติ บล็อกเหล่านี้ถูกติดตั้ง และตัดใช้ microsections มากของ 6 ‐ 8 µm microtome (ไลก้ารุ่น RM 2155) ส่วนถูกติดตั้งบนภาพนิ่ง dewaxed และสังเกตภายใต้ microscope‐ (Leitz Diaplan) และ microphotographs ของระยะต่าง ๆ ของการ shoot‐bud หรือการเกิดเอ็มบริโอ somatic ได้รับกับกล้องดิจิตอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการเมล็ดพันธุ์ของทั้งสองสายของอินเดีย ได้แก่ สบู่ดำ
"RSAD" คู่สัญญาที่ได้รับจากการพัฒนาพื้นที่ฝนเงากรมรัฐอานธรประเทศ (AP) รัฐ (Hyderabad, อินเดีย) ในขณะที่ "KM" เข้าที่ถูกเก็บรวบรวมจาก Venkatapur หมู่บ้าน Sircilla ของดั Karimnagar อำเภอ AP ที่ 18.43o ไม่มี ละติจูด 79.15o E สายทั้งสองถูกยกขึ้นในการทดลองสวนพฤกษศาสตร์ภาควิชาพฤกษศาสตร์, Osmania มหาวิทยาลัยไฮเดอราอินเดีย.
การทดลองเบื้องต้นได้ดำเนินการกับการเลือกชิ้นส่วนตอบสนองมากที่สุด hypocotyl epicotyl และชิ้นส่วนที่ได้รับจากต้นกล้าหกวันเก่าโหนด cotyledonary (CN) ชิ้นส่วนที่ได้รับจากต้นกล้าที่ 21- วันเก่าและซอกใบโหนด (เป็น) ยิงปลาย (ST) ก้านใบ (P) และ ใบ (L) ชิ้นจากสองปีแม่ของพืชที่กำลังเติบโตในสวนพฤกษศาสตร์ การศึกษาครั้งนี้ได้ดำเนินการเฉพาะกับ CN, และ ST ชิ้นตั้งแต่ชิ้นส่วนอื่น ๆ ที่ไม่ตอบสนอง ชิ้นส่วนได้อย่างทั่วถึงผิวผ่านการฆ่าเชื้อโดยใช้ 10% (v / v) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 50% (v / v) เอทานอล 0.1% (w / v) ปรอทและ Tween-20 ล้างด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและเชื้อด้วย คู่ของคีมผ่านการฆ่าเชื้อเป็น 25 × 150 มิลลิเมตรหลอดวัฒนธรรมเบาและระบายความร้อนด้วย MS เสริมด้วย 3% (w / v) และผลึกน้ำตาลซูโครสกับ 0.8% (w / v) Phyta- วุ้น (HIMEDIA) ค่า pH ของกลางที่ได้รับการปรับให้ 5.8 ก่อนที่จะนึ่งฆ่าเชื้อ.
ชิ้นสี่สิบถูกเชื้อสำหรับการทดสอบแต่ละคนมีสามซ้ำมูลค่ารวม 120 ชิ้นต่อการเข้า วัฒนธรรมทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ในห้องที่มีการเจริญเติบโตที่ผ่านการฆ่าเชื้อแสง 16 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25 ±2ºCกับความเข้มของแสง 60 μ EM2 / วินาทีและความชื้นสัมพัทธ์ 50% สื่อวัฒนธรรมที่แตกต่างกันขึ้นอยู่กับ MS ที่เสริมควบคุมการเจริญเติบโตถูกนำมาใช้ กรดซิตริก (CA) 520.5 ไมครอน (w / v) ก็ตบท้ายกับสื่อทั้งหมดเพื่อป้องกันการเกิดสีน้ำตาลของเนื้อเยื่อเนื่องจากการ exudation น้ำยางจากชิ้นส่วน องค์ประกอบของสื่อ (ตารางที่
1) ได้รับด้านล่าง.
กลาง A: MS เสริมด้วย IAA (2, 8 ไมครอน) Kn (13.93 ไมครอน), AS (27.14 ไมครอน) กลูตา (Glu) (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย ( 520.5 ไมครอน) กลาง B: MS เสริมด้วย 2, 4-D (9.04 ไมครอน) Kn (4.6 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน) กลาง C:. MS เสริมด้วย 2, 4-D (1.80 ไมครอน), BA (1.7 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน) ข้าวกล้าที่แพร่กระจายออกมาจากชิ้นส่วนทั้งหมดที่อยู่บนกลางถูกย่อยเพาะเลี้ยงบนขนาด D สำหรับการยืดตัวยิง: Medium-D: MS เสริมด้วย GA3 (5.7. ไมครอน), BA (4.4 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน) แคลลัสซึ่งพัฒนามาจากชิ้นส่วนในสื่อ-B เป็นอนุกรรมการ เพาะเลี้ยงบนอาหาร-E สำหรับการเหนี่ยวนำการถ่าย: Medium-E:. MS เสริมด้วย NAA (2.68 ไมครอน), BA (4.4 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน) ชิ้นกับโซมาติกเอ็มบริโอ (จากขนาด C) ถูกย้ายไปกลาง-F สำหรับการแปลงตัวอ่อนร่างกายจะต้น. Medium-F: MS เสริมด้วย BA (6.6 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน). สุขภาพ, การพัฒนาที่ดีและยอดยาว (3 ซม.) ถูกย้ายไปกลาง-G สำหรับการเหนี่ยวนำราก: Medium-G:. ความแข็งแรงครึ่ง MS เสริมด้วยไอบีเอ (14.7 ไมครอน) ผู้หญิง (684.2 ไมครอน) และแคลิฟอร์เนีย (520.5 ไมครอน) ต้นสุขภาพที่มีรากทั้งการพัฒนาที่ถูกถ่ายโอนไปยังหม้อและค่อยๆ ปรับตัวในเรือนกระจกในที่ร่มเป็นเวลาสองสัปดาห์โดยแนบหม้อในถุงพลาสติก ต่อจากนั้นพืชถูกย้ายไปยังพื้นที่ที่มีแดดของเรือนกระจกและต่อมาไปที่สนาม. แต่ละทดลองซ้ำเป็นครั้งที่สองกับสามซ้ำ / การรักษาข้อมูลที่เกี่ยวข้องกับการศึกษาได้รับการบันทึกวิเคราะห์ทางสถิติและนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย + ข้อผิดพลาดมาตรฐานของสามซ้ำ . การศึกษาทางจุลกายวิภาคได้ดำเนินการในการระบุเส้นทาง morphogenetic (อวัยวะหรือร่างกาย embryogenesis) โดยตรงจากชิ้นส่วนหรือโดยอ้อมจากแคลลัสตามลูน่า (1998) วัสดุที่ได้รับการแก้ไขในเครื่องดื่มแอลกอฮอล์และกรดอะซิติกน้ำแข็ง 3: 1. เนื้อเยื่อคงถูกส่งผ่านไปผ่านชุดของขั้นตอนการคายน้ำในแอลกอฮอล์บิวทิลตติยภูมิ (30-70%) และไซลีนถูกนำมาใช้เป็นตัวแทนหักบัญชีจะทำให้เนื้อเยื่อโปร่งแสง วัสดุที่ถูกฉาบไว้แล้วด้วยพาราฟิน (56 - 58ºC) และวางไว้ในหน่วยฝัง (อิคอร์ปอเรชั่นรุ่น Shandon Histocenter-3) เนื้อเยื่อได้รับการประมวลผลโดยป้อม-2000 เทอร์โมชานตงและย้อมด้วยสี haemotoxylin และ Eosin ใช้อัตโนมัติ Leica อัตโนมัติ Stainer-XL บล็อกนี้ได้รับการติดตั้งและตัดการใช้ microtome (ที่ Leica รุ่น RM 2155) สำหรับ microsections บางมากของ 6-8 ไมโครเมตร ส่วนที่ได้รับการติดตั้งอยู่บนสไลด์ dewaxed และสังเกตภายใต้ microscope- (Leitz Diaplan) และ microphotographs ของขั้นตอนที่แตกต่างกันของการเหนี่ยวนำการยิงตูมหรือ embryogenesis ร่างกายได้รับด้วยกล้องดิจิตอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
เมล็ดสองสายพันธุ์สบู่ดำของอินเดียได้แก่ " rsad " หนังสือที่ได้รับจากแผนกพัฒนาเขตเงาฝนของรัฐอานธรประเทศ ( เอพี ) และรัฐบาลมลรัฐ ( Hyderabad , อินเดีย ) ส่วน " km " หนังสือรวบรวมจาก venkatapur หมู่บ้าน sircilla Mandal ของกรีมนคร อำเภอ เอพี ที่ 18.43o N 79.15o E ละติจูดทั้งสองสายพันธุ์มีขึ้นในสวนพฤกษศาสตร์ทดลอง ภาควิชาพฤกษศาสตร์ มหาวิทยาลัย Osmania , Hyderabad , อินเดีย .
การทดลองเบื้องต้นทดลองด้วยการเลือกอาหารที่ตอบสนองมากที่สุด การย้ายเนื้อเยื่อ และป้อนกลับแบบลบได้จากหก‐วัน‐ต้นเก่าcotyledonary โหนด ( CN ) เนื้อเยื่อที่ได้จาก 21 วัน‐‐แก่ต้นกล้าและต่อมน้ำเหลืองรักแร้ ( ) , ยิง‐ทิป ( ST ) , ก้าน ( P ) และใบ ( L ) อาหารจากสอง‐ปี‐เก่าแม่พืชที่เติบโตในสวนพฤกษศาสตร์ การศึกษาครั้งนี้ดำเนินการเฉพาะกับ CN , เนื้อเยื่อและเนื้อเยื่ออื่น ๆตั้งแต่เริ่มต้น ไม่ตอบสนองเนื้อเยื่อผิวโดย‐ฆ่าเชื้อโดยใช้ 10% ( v / v ) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 50 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เอทานอล , 0.1% ( w / v ) เมอร์คิวริกคลอไรด์และทวี‐ 20 , ล้างด้วยน้ำกลั่นปราศจากเชื้อและกับคู่ของคีมเป็นหมันใน 25 × 150 มม. และสังเคราะห์ท่อบนวัฒนธรรม ระบายความร้อนด้วย MS ที่มี 3% ( w / v ) ซูโครสและแข็งกับ 0.8 % ( w / v ) phyta ‐ ( himedia )พีเอชของอาหารปรับฐานก่อนอัตราส่วนโฟกัส .
สี่สิบ เลี้ยงปลูกเชื้อในแต่ละการทดลอง 3 ซ้ำจำนวนรวม 120 การเจริญเติบโตต่อเข้า . วัฒนธรรมทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ในห้องปลอดเชื้อ ด้วยการให้แสง 16 ชั่วโมง 25 ± 2 ºองศาเซลเซียสความเข้มแสง 60 µ em2 / s และ 50 % ความชื้นสัมพัทธ์ .ที่แตกต่างกันตามวัฒนธรรมสื่อบนอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยสารควบคุมการเจริญเติบโตของการใช้ กรดซิตริก ( CA ) 520.5 μ m ( w / v ) เสริมกับสื่อทั้งหมดเพื่อป้องกันการเกิดสีน้ำตาลของเนื้อเยื่อเนื่องจาก exudation ยาง จากอาหาร . องค์ประกอบของสื่อ ( โต๊ะ
1 ) จะได้รับด้านล่าง .
กลาง‐ : MS ที่มี IAA ( 2 , 8 μ M ) KN ( 13.93 μ M ) , ( 27.14 μ M ) , มีน ( GLU ) ( 684 คน2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M ) กลาง‐ B : MS ที่มี 2 , 4 ‐ D ( 9.04 μ M ) KN ( 4.6 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M ) กลาง‐ C : MS ที่มี 2 , 4 ‐ D ( 1.80 μ M ) b ( 1.7 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )




ยิงซึ่งพัฒนาจากอาหารกลาง ‐ได้ซบ‐เลี้ยง
เมื่อกลาง‐ D สำหรับ การยิงกลาง‐ D : MS ที่มี GA3 ( 5.7
μ M )BA ( 4.4 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )
แคลลัสที่ได้รับจากอาหารกลาง ‐ B ถูกย่อย‐เพาะเลี้ยงบนอาหาร‐ E สําหรับเหนี่ยวยิงกลาง‐ E : MS ที่มี NAA ( 2.68 μ M ) b ( 4.4 μ M ) ( 684.2 ซึ่งμ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )
อาหารกับโซมาติกเอ็มบริโอ ( จากกลาง‐ C ) ถูกย้ายกลาง‐ F สำหรับการแปลงของโซมาติกเอ็มบริโอจะได้ดีที่สุด ‐
( fMS ที่มี BA ( 6.6 μ M ) , GLU ( 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ M )
สุขภาพ พัฒนาได้ดี และยิงยาว 3 ซม. ) ถูกย้ายกลาง‐กรัมรากเหนี่ยวกลาง‐ G : MS แรงครึ่งหนึ่งที่เติม IBA ( 14.7 μ GLU ( M ) , 684.2 μ M ) และ Ca ( 520.5 μ
m )ต้นแข็งแรงดี‐พัฒนารากถูกโอนไปยังหม้อและค่อยๆ acclimated ในเรือนกระจกในร่มเป็นเวลาสองสัปดาห์ โดยการปิดล้อมหม้อในถุงโพลีเทน ต่อมาพืชถูกย้ายไปยังพื้นที่แดดของเรือนกระจกและต่อมาเขต .
แต่ละ 3 ซ้ำทำการทดลองซ้ำ 2 ครั้ง / การรักษาข้อมูลที่เกี่ยวข้องกับการบันทึกสถิติวิเคราะห์และนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ยความคลาดเคลื่อนมาตรฐานของทั้งสาม ได้แก่ ผลการศึกษา มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษา
ทางเดิน morphogenetic ( แกนโนเจเนซิสหรือเซลล์เพาะเลี้ยงจากเนื้อเยื่อ ) ทั้งโดยตรง หรือโดยอ้อมจากแคลลัสจากลูน่า ( 1998 ) วัสดุที่ถูกกำหนดในแอลกอฮอล์และกรดแอซีติก 3 : 1เนื้อเยื่อถาวรที่ผ่านชุดของขั้นตอนในการดื่มแอลกอฮอล์บิวทิลตติย ( 30 ‐ 70 % ) และไซลีนถูกใช้เป็นตัวแทนการล้างเพื่อให้เนื้อเยื่อโปร่งแสง วัสดุแล้วชุบด้วยน้ำมันพาราฟิน ( 56 ‐ 58 º C ) และวางไว้ในการฝังตัวหน่วย ( Electron Corporation , รุ่น Shandon histocenter ‐ 3 )เนื้อเยื่อที่ถูกประมวลผลโดยป้อม‐ 2000 เทอร์โมซ่านและเปื้อนด้วย haemotoxylin และ eosin ใช้ไลก้าแบบอัตโนมัติ Auto สเตนเนอร์‐ XL . บล็อกเหล่านี้ถูกติดตั้งและตัดด้วยเครื่องตัดชิ้นเนื้อ ( Leica รุ่น RM 2155 ) สำหรับบางมาก microsections 6 ‐ 8 µเมตร ส่วนที่ติดบนสไลด์dewaxed การสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์‐ ( leitz diaplan ) และ microphotographs ของขั้นตอนที่แตกต่างกันของการยิง‐หน่อหรือเซลล์เพาะเลี้ยงได้ด้วยกล้องดิจิตอล