2.3. Enzymatic extraction
To assess the effect of enzyme-assisted extraction on the yield
of stevioside, experiments were done using three different enzymes,
pectinase, cellulase and hemicellulase, and five different
concentrations (0.5%, 1%, 2%, 3% and 4%, w/v) at different extraction
temperatures (35, 45 and 55 C for pectinase; 40, 50 and 60 C for
cellulase; 50, 60 and 70 C for hemicellulase) and extraction times
(15, 30 and 45 min).
Dried leaf powder (100 g) was placed in a 500 ml conical flask
with different enzyme concentrations in 100 ml of acetate buffer
at pH 5.0. The contents were shaken at 150 rpm after the addition
of methanol (200 ml, 100%), which was repeated for each time
and temperature. The resultant extract was filtered with Whatmann
filter paper. The filtrate was collected and the above procedure
was repeated three times for each condition. To the
resultant filtrate, toluene (100 ml) was added and the resultant
mixture was passed through an alumina column preconditioned
with isopropyl alcohol (150 ml). Eluent was concentrated by boiling
for half an hour and was cooled to room temperature. Chilled
acetone was added in small amounts until precipitation occurred,
followed by refrigeration for 24 h. The solution (25 ml) was centrifuged
at 10,612g for 30 min at 4 C and was filtered through
a syringe filter (pore size 0.22 lm). Collected precipitates were
dissolved in HPLC grade water and sample volume (20 ll) was
used for the estimation of stevioside content (Metivier & Viana,
1979).
2.3. เอนไซม์ในระบบสกัด
เพื่อประเมินผลของการสกัดเอนไซม์ช่วยในผลตอบแทน
ของ stevioside ทำการทดลองโดยใช้เอนไซม์ต่าง ๆ สาม,
pectinase, cellulase และ hemicellulase และ 5 แตกต่างกัน
ความมาเข้มข้น (0.5%, 1%, 2%, 3% และ 4%, w/v) ได้ที่แยกแตกต่าง
อุณหภูมิ (35, 45 และ 55 C สำหรับ pectinase; C 40, 50 และ 60 สำหรับ
cellulase; 50 60 และ 70 C สำหรับ hemicellulase) และแยกเวลา
(15, 30 and 45 min).
ผงแห้ง (100 กรัม) ถูกวางใน 500 ml ทรงกรวยหนาว
กับความเข้มข้นเอนไซม์ต่าง ๆ ใน 100 ml ของบัฟเฟอร์ acetate
ที่ pH 5.0 เนื้อหาถูกเขย่าที่ 150 รอบต่อนาทีหลังการเพิ่ม
ของเมทานอล (200 ml, 100%), ซึ่งไม่ซ้ำกันในแต่ละครั้ง
และอุณหภูมิ สารสกัดจากผลแก่ถูกกรอง ด้วย Whatmann
กระดาษกรอง สารกรองถูกรวบรวม และกระบวนการข้างต้น
ถูกซ้ำสามครั้งสำหรับแต่ละเงื่อนไข การ
สารกรองผลแก่ โทลูอีน (100 ml) เพิ่ม และ resultant การ
ผสมถูกผ่านคอลัมน์อลูมินาที่ preconditioned
ด้วยแอลกอฮอล์ isopropyl (150 มล.) Eluent เข้มข้น โดยเดือด
ชั่วโมงครึ่ง และระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิห้อง อาหาร
อะซีโตนเพิ่มในเงินจนฝนเกิด,
ตามเครื่องทำความเย็นใน 24 ชม โซลูชั่น (25 ml) ถูก centrifuged
ที่ 10,612g ใน 30 นาทีที่ 4 C และถูกกรองผ่าน
ตัวเข็ม (รูขุมขนขนาด$ 0.22 lm) Precipitates รวบรวมถูก
ละลายใน HPLC เกรดน้ำและตัวอย่างปริมาณ (20 จะ) ถูก
ใช้สำหรับการประเมินเนื้อหา stevioside (Metivier & Viana,
1979)
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.3 สกัดเอนไซม์
เพื่อประเมินผลกระทบของการสกัดเอนไซม์ช่วยจากอัตราผลตอบแทน
ของสตีวิโอไซทดลองทำโดยการใช้เอนไซม์ที่แตกต่างกันสาม,
เพคติเนสเซลลูเลสและ Hemicellulase และห้าที่แตกต่างกัน
ความเข้มข้น (0.5%, 1%, 2%, 3% และ 4% , w / v) ในการสกัดที่แตกต่างกัน
อุณหภูมิ (35, 45 และ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลาเพคติเนส;? 40, 50 และ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
เซลลูเลส? 50, 60 และ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา Hemicellulase) และเวลาการสกัด
(15, 30 และ 45 นาที )
ผงใบแห้ง (100 กรัม) วางอยู่ในขนาด 500 ml ขวดรูปกรวย
ที่มีความเข้มข้นของเอนไซม์ที่แตกต่างกันในขนาด 100 ml ของบัฟเฟอร์อะซิเตท
ที่ pH 5.0 เนื้อหาถูกเขย่าที่ 150 รอบต่อนาทีหลังจากการเพิ่ม
ของเมทานอล (200 มล, 100%) ซึ่งได้รับการทำซ้ำสำหรับแต่ละเวลา
และอุณหภูมิ สารสกัดจากผลถูกกรองด้วย Whatmann
กระดาษกรอง กรองที่ถูกเก็บรวบรวมและขั้นตอนข้างต้น
ซ้ำสามครั้งเพื่อให้แต่ละเงื่อนไข เพื่อ
กรองผลลัพธ์โทลูอีน (100 ml) ถูกเพิ่มเข้ามาและผลที่
ได้รับการผสมผ่านคอลัมน์อลูมิ preconditioned
กับเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl (150 ml) ตัวชะเป็นความเข้มข้นโดยการต้ม
สำหรับครึ่งชั่วโมงและถูกระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้อง แช่เย็น
อะซิโตนถูกเพิ่มเข้ามาในปริมาณน้อยจนตกตะกอนเกิดขึ้น
ตามมาด้วยการทำความเย็นเป็นเวลา 24 ชั่วโมง การแก้ปัญหา (25 ml) ได้รับการหมุนเหวี่ยง
ที่ 10,612g 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสและได้รับการกรองผ่าน
ตัวกรองเข็มฉีดยา (ขนาดรูพรุน 0.22 LM) ตะกอนที่เก็บรวบรวมได้
ละลายในน้ำเกรด HPLC และปริมาณตัวอย่าง (20 LL) ถูก
นำมาใช้สำหรับการประมาณของเนื้อหาสตีวิโอไซ (Metivier & เวียนา,
1979)
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.3 เอนไซม์การสกัด
เพื่อศึกษาผลของการสกัดเอนไซม์ช่วยในผลผลิต
สตีวิโอไซด์ การทดลองทำโดยใช้เอนไซม์ , เอนไซม์เซลลูเลส และเอนไซม์ต่าง ๆ
, ,
5 ความเข้มข้นต่างกัน ( 0.5% , 1% , 2% , 3% และ 4% , w / v ) ที่อุณหภูมิการสกัด
ต่างกัน 35 , 45 และ 55 องศาเซลเซียส เอนไซม์ ; 40 , 50 และ 60 องศาเซลเซียสเซล
; 5060 และ 70 องศาเซลเซียส ) และเวลา เอนไซม์การสกัด
( 15 , 30 และ 45 นาที )
ผงใบแห้ง ( 100 กรัม ) คืออยู่ในขนาด 500 ml ขวดกรวย
ที่มีความเข้มข้นเอนไซม์ต่าง ๆ ใน 100 มิลลิลิตรที่พีเอช 5.0 อะซิเตทบัฟเฟอร์
. เนื้อหาสั่นสะเทือนที่ 150 รอบต่อนาทีหลังจากที่นอกเหนือจาก
เมธา ( 100% 200 ml ) ซึ่งเป็นซ้ำสำหรับแต่ละครั้ง
และอุณหภูมิ สารสกัดจากผลคือกรองด้วย whatmann
กระดาษกรอง ในการรวบรวมและ
ขั้นตอนข้างต้นทำซ้ำสามครั้งในแต่ละเงื่อนไข กับ
กรองซึ่งโทลูอีน ( 100 มล. ) เพิ่มและผสมซึ่งถูกส่งผ่านผ่าน อะ
กับคอลัมน์ preconditioned isopropyl แอลกอฮอล์ ( 150 มล. ) นี้นำโดยการต้ม
สำหรับครึ่งชั่วโมงและเย็นที่อุณหภูมิห้อง แช่เย็น
อะซิโตน ได้เพิ่มเพียงเล็กน้อย จนตกตะกอนเกิดขึ้น
ตามด้วยแช่แข็งเป็นเวลา 24 ชั่วโมง โซลูชั่น ( 25 มล. ) คือระดับที่ 10612g
30 นาทีที่ 4 C และถูกกรองผ่านตัวกรอง ( ขนาดรูพรุน
เข็ม 0.22 LM ) เก็บตะกอนละลายในน้ำมี
เกรด HPLC และตัวอย่างเล่ม 20 จะ ) คือ
ใช้ประมาณปริมาณสตีวิโอไซด์ ( metivier
& Viana , 1979 )
การแปล กรุณารอสักครู่..
