Cell proliferation and viability as

Cell proliferation and viability assessment
Cell proliferation was assessed using Alamar Blue (Thermo Scientific) and CFSE
(Invitrogen) labeling following manufacturer’s instructions. Briefly, the assays were
performed at the end of the culture experiments. Alamar Blue was added to culture medium
(100 μl/ml of medium) and incubated for 6 h. Fluorescence was monitored at 530–560 nm
excitation wavelength and 590 nm emission wavelength in a 96 well plate using a
fluorescence multiplate reader (FLUOstar OPTIMA, BMG LABTECH). For CFSE labeling,
cultures were treated with 1 μM CFSE in pre-warmed PBS for 15 min at 37°C. Labeling
solution was replaced by pre-warmed culture medium, and cells were cultured for 30 min at
37°C to allow acetate hydrolysis. Cells were washed, incubated for different time points and
analyzed using a FACScan flow cytometer (Becton Dickinson).
For the analysis of apoptosis, we used AnnexinV / 7-AAD labeling. Dissociated cells were
resuspended in AnnexinV binding buffer, and stained with FITC-AnnexinV (PharMingen).
Just before cell acquisition, 5 μl of 7-AAD was added and cells were acquired in a FACScan
flow cytometer (Becton-Dickinson).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์การงอกและการประเมินผลนี้ขยายเซลล์ถูกประเมินโดยใช้สีน้ำเงิน Alamar (เทอร์โมวิทยาศาสตร์) และ CFSE คำสั่ง (Invitrogen) ติดฉลากต่อไปนี้ของผู้ผลิต สั้น ๆ assays ถูก ดำเนินการที่สิ้นสุดการทดลองวัฒนธรรม Alamar บลูได้เพิ่มสื่อวัฒนธรรม (100 μl/ml ของกลาง) และ incubated สำหรับ 6 h. Fluorescence ถูกตรวจสอบที่ 530-560 nm ความยาวคลื่นในการกระตุ้นและความยาวคลื่นเล็ดรอด nm 590 ใน 96 ดีแผ่นการใช้การ fluorescence multiplate อ่าน (พติ FLUOstar, BMG LABTECH) สำหรับ CFSE ติดฉลาก วัฒนธรรมได้รับการรักษา ด้วย μM 1 CFSE ใน PBS ก่อน warmed ใน 15 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส ติดฉลาก โซลูชั่นถูกแทนที่ ด้วยสื่อวัฒนธรรม warmed ก่อน และเซลล์มีอ่างสำหรับ 30 นาทีที่ 37° C ให้ไฮโตรไลซ์ acetate เซลล์ถูกล้าง incubated สำหรับจุดเวลาต่าง ๆ และ วิเคราะห์โดยใช้ cytometer เป็นกระแส FACScan (Becton สัน)สำหรับการวิเคราะห์ของ apoptosis เราใช้ AnnexinV / 7-AAD ติดฉลาก เซลล์ที่ถูกได้ resuspended ใน AnnexinV ผูกบัฟเฟอร์ และสีกับ FITC-AnnexinV (PharMingen) ก่อนซื้อเซลล์ μl 5 ของ 7 AAD เข้ามา และเซลล์ได้รับการ FACScan กระแส cytometer (Becton-สัน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเพิ่มจำนวนเซลล์และการประเมินศักยภาพใน
การเพิ่มจำนวนเซลล์ได้รับการประเมินโดยใช้ Alamar สีฟ้า (เทอร์โมวิทยาศาสตร์) และ CFSE
(Invitrogen) การติดฉลากตามคำแนะนำของผู้ผลิต สั้น ๆ การตรวจที่ได้
ดำเนินการในตอนท้ายของการทดลองวัฒนธรรม Alamar สีฟ้าถูกบันทึกอยู่ในอาหารเลี้ยงเชื้อ
(100 ไมโครลิตร / ml ขนาดกลาง) และบ่มเป็นเวลา 6 ชั่วโมง เรืองแสงได้รับการตรวจสอบที่ 530-560 นาโนเมตร
ความยาวคลื่นกระตุ้นและความยาวคลื่น 590 นาโนเมตรปล่อยก๊าซเรือนกระจกใน 96 แผ่นเดียวใช้
อ่าน multiplate เรืองแสง (FLUOstar OPTIMA สบาย LABTECH) สำหรับการติดฉลาก CFSE,
วัฒนธรรมที่ได้รับการรักษาด้วย 1 ไมครอน CFSE ในพีบีเอสก่อนอุ่นเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 37 ° C การติดฉลาก
การแก้ปัญหาก็ถูกแทนที่ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อก่อนอบอุ่นและเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 30 นาทีที่
37 องศาเซลเซียสเพื่อให้การย่อยสลายอะซิเตท เซลล์ที่ถูกล้างบ่มเป็นจุดเวลาที่แตกต่างกันและ
ใช้ในการวิเคราะห์การไหล FACScan cytometer (Becton Dickinson).
สำหรับการวิเคราะห์ของ apoptosis เราใช้ AnnexinV / 7-AAD การติดฉลาก เซลล์พ้นจากถูก
resuspended ใน AnnexinV บัฟเฟอร์ผูกพันและย้อมด้วย FITC-AnnexinV (PharMingen).
ก่อนที่จะเข้าซื้อกิจการมือถือ 5 ไมโครลิตรของ 7-AAD ถูกเพิ่มเข้ามาและเซลล์ที่ได้มาใน FACScan
ไหล cytometer (Becton-ดิกคินสัน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แนะนำเซลล์และเซลล์ proliferation และสามารถประเมิน
ใช้ Alamar สีฟ้า ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ ) และ cfse
( Invitrogen ) การติดฉลากตามคําแนะนําของผู้ผลิต . สั้น ๆ , วิธี =
แสดงที่ส่วนท้ายของวัฒนธรรมนี้ Alamar สีน้ำเงินเพิ่ม
อาหารเลี้ยงเชื้อ ( 100 μ L / มิลลิลิตรบ่มเป็นเวลา 6 ชั่วโมง และ 2 ) การเรืองแสงที่ 530 - 560 nm
ความยาวคลื่น 590 nm ความยาวคลื่นและการกระตุ้นใน 96 ดีจานใช้
เรืองแสง multiplate อ่าน ( fluostar Optima BMG , labtech ) สำหรับ cfse ฉลาก วัฒนธรรมที่ได้รับการรักษาด้วยμ
1 M cfse ก่อนอุ่น PBS 15 นาทีที่ 37 องศา การติดฉลาก
โซลูชั่นถูกแทนที่ด้วยก่อนอุ่นอาหารเลี้ยงเชื้อและเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 ° C เพื่อให้
, การย่อยสลาย . เซลล์มีการล้างโดยจุดเวลาที่แตกต่างกันและ
วิเคราะห์โดยใช้ facscan ไหลใช้โมโน ( เบคตอน Dickinson ) .
สำหรับการวิเคราะห์ ( เราใช้ annexinv / 7-aad การติดฉลาก เซลล์มี resuspended ทางใจ
annexinv ผูกพันในบัฟเฟอร์ และย้อมด้วย fitc annexinv ( pharmingen )
ก่อนซื้อมือถือ 5 μ l 7-aad เพิ่มและเซลล์ได้มาใน facscan
การใช้โมโน ( เบคตอน Dickinson )