CORRESPONDING AUTHORDr. Krishan Nan

CORRESPONDING AUTHOR
Dr. Krishan Nandan, Assistant Professor,
Department of Microbiology,
Katihar Medical College,
Karim Bagh, Katihar. Bihar 854105,
E-mail: [e-mail],
Phone: [phone].

ABSTRACT: BACKGROUND: Extended Spectrum β-lactamases (ESBL) are enzymes that have the ability to hydrolyze β-lactam antibiotics containing oxyimino group and are inhibited by β-lactamase inhibitors. These enzymes are responsible for resistance to penicillins, monobactams, third generation and in some instances fourth generation cephalosporins. ESBLs are encoded by transferable conjugative plasmids that often code for resistance to other antibiotics as well. OBJECTIVE: This prospective study aimed to determine ESBL production in Gram negative bacteria in patients attending a tertiary care hospital in eastern Bihar. METHOD: A total of 556 samples from patients attending inpatient and outpatient departments from May 2009 to April 2010 were included in the study. Samples were processed as per standard protocol and antibiotic susceptibility testing was done by modified Kirby–Bauer method. Isolates showing resistance to any third generation cephalosporin were subjected to Double Disc Synergy Test (DDST), Phenotypic Confirmatory Disc Diffusion Test (PCDDT) and MIC reduction test for ESBL production. RESULTS: 42.62% of Gram negative bacilli were ESBL producers. 56.3% of Klebsiella pneumoniae strains were found to be ESBL producers whereas only 40.5% of Escherichia coli produced ESBL. PCDDT and MIC reduction test showed 100% correlation whereas the DDST failed to detect 13.5% of ESBL producers. All ESBL producers were sensitive to Imipenem and Cefoperazone/ Sulbactam. CONCLUSION: The present study gives us an indication regarding the occurrence of ESBL producing Gram negative bacilli in Eastern Bihar. The number of ESBL producers in this region is alarmingly large. It is therefore recommended that PCDDT be incorporated in all laboratories as a part of routine antibiotic susceptibility testing procedures as it is simple, reliable and reproducible test for detection of ESBLs.
KEYWORDS: Extended Spectrum β-lactamases, ESBL, DDST, PCDDT.

INTRODUCTION: Extended Spectrum β-lactamases (ESBL) are enzymes that have the ability to hydrolyze β-lactam antibiotics containing an oxyimino group (third generation cephalosporin and Aztreonam) and are inhibited by β-lactamase inhibitors like Clavulanic acid, Sulbactam and tazobactam1. Production of ESBLs lead to resistance to penicillins, monobactams, third generation cephalosporins like Cefotaxime, Ceftriaxone, Ceftazidime and in some instances fourth generation cephalosporins also2.
Emergence of resistance to β-lactam antibiotics began even before the first β-lactam antibiotic penicillin was developed3. The first plasmid mediated β-lactamase, TEM-1 was reported in 1965 from an Escherichia coli isolate belonging to a patient in Athens, Greece named Temoniera [hence designated TEM]4. Over the years, many new β-lactam antibiotics have been developed; however, with each new class of antibiotic, a new β-lactamase emerged that caused resistance to that class of drug. Presumably, the selective pressure imposed by the use and overuse of new antibiotics results in the emergence of new variants of β-lactamases5. The first report of plasmid-encoded β-lactamase capable of hydrolyzing the extended spectrum cephalosporins was published in 1983 from Germany6. Hence these new β-lactamases were coined as extended spectrum β-lactamases7. Over the past few decades, a number of new β-lactamases in clinical isolates of members of the family Enterobacteriaceae have emerged. The total number of ESBLs characterized exceeds 200 today8. ESBLs are encoded by transferable conjugative plasmids which often code for resistance to other antibiotics as well7. Being plasmid mediated, they are easily transmitted among the members of Enterobacteriaceae family, thus facilitating the dissemination of resistance not only to β- lactams but also to other commonly used antibiotics such as quinolones and aminoglycosides9. Major risk factors for colonization or infection with ESBL producing organisms are prolonged exposure to antibiotics, prolonged ICU stay, nursing home residency, severe illness, catheterization, instrumental intervention and residence in an institution with high rate of use of third generation cephalosporins.5
This prospective study aimed at determining ESBL production in Gram negative bacilli in a tertiary care hospital in eastern Bihar. Detection of ESBL production is important because it ultimately determines the clinical outcome in patients infected with such strains. Studies on ESBL producing Gram negative bacilli have been reported from all parts of India however, to the best of our knowledge; no such studies till date have been reported from Bihar and Jharkhand.

MATERIAL AND METHODS: Clearance from Institutional Ethics Committee was obtained prior to carrying out this study. A total of five hundred and fifty six (556) samples viz. urine, pus, stool and pleural fluid from patients attending different inpatient and outpatient departments were included in the study. A brief clinical history of the patients regarding antibiotic intake, instrumentation and duration of hospital stay was taken. Specimens collected were inoculated on 5% sheep blood agar and MacConkey’s agar. They were identified by standard biochemical tests.10 Antibiotic Susceptibility Testing (AST) was done on Mueller–Hinton agar (MHA) plates by modified Kirby–Bauer disc diffusion technique using commercially available antibiotic discs (HiMedia, Mumbai). When the zone of inhibition of an isolate for any one or more of the third generation cephalosporin (Cefotaxime, Ceftriaxone, Ceftazidime & Cefoperazone) was less than or equal to the zone diameter recommended by CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), the isolate was further tested by the PCDDT, MIC reduction test and DDST for ESBL production.11

DDST: Bacterial suspension to be tested was prepared in Mueller–Hinton Broth (MHB). After matching the turbidity to 0.5 McFarland’s standard, the organism was inoculated on MHA as per guidelines for disc diffusion technique. Amoxycillin/Clavulanic acid disc was placed in the centre of the plate. Four antibiotic discs i.e. Cefotaxime, Ceftazidime, Ceftriaxone and Cefoperazone were placed at a distance of 20 mm (centre to centre) from Amoxycillin/Clavulanic acid disc and at 90° from each other. The plates were examined after overnight incubation. Enhancement of inhibition zone for any of the four antibiotic discs towards Amoxycillin/ Clavulanic acid disc indicated the production of ESBL by the strain.

PCDDT: MHA plates were inoculated in the same manner as DDST. Four antibiotic discs viz. Cefotaxime, Cefotaxime/ Clavulanic acid, Ceftazidime and Ceftazidime/ Clavulanic acid were placed at a distance of 30 mm (centre to centre) from each other. Plates were examined after overnight incubation at 37°C. ESBL production was confirmed when there was an increase in the zone diameter by 5 mm or more when Clavulanic acid was added to the respective antibiotic. [Fig. 1]

MIC reduction test: Bacterial suspension to be tested was prepared in MHB and matched to 0.5 McFarland’s standard. As a final concentration of 5 X 105 CFU/ml was required, bacterial suspension equivalent to 0.5 McFarland’s standard was further diluted 1:100 in MHB.12
 Antibiotics in powder form were obtained from Sigma-Aldrich Chemicals Pvt. Ltd, Bangalore. Dilutions were prepared in the following range:
- Ceftazidime : 0.25 – 256 µg/ml
- Ceftazidime/Clavulanic acid : 0.25/4 – 256/4 µg/ml
- Cefotaxime : 0.25 – 256 µg/ml
- Cefotaxime/Clavulanic acid : 0.25/4 – 256/4 µg/ml

Antibiotic ranges were prepared one step higher than the final dilution range required to compensate for the addition of equal volume of inoculum. 100 µl of each antibiotic dilution was dispensed in their respective labelled wells. 100 µl of diluted bacterial suspension was added to each well. 200 µl of uninoculated and inoculated broth were also dispensed in wells in each row as sterility and growth control. After overnight incubation, the microtitre wells were examined. The lowest concentration of the antibiotic that showed no visible growth represented the MIC value of the organism. An isolate was confirmed as ESBL producer if there was ≥ 3 two folds (eight times) reduction in MIC of third generation cephalosporin on addition of Clavulanic acid as compared to third generation cephalosporin when used alone12. [Fig. 2]

RESULTS: A total of five hundred and fifty six (556) samples were received in the laboratory during the study period out of which one hundred and twenty two strains of Gram negative bacilli were isolated (21.9%). 62 strains were from indoor while 60 were from outdoor patients. Overall 52 (42.6%) of these isolates were found to be ESBL producers; 56.3% of Klebsiella pneumoniae were ESBL producers, followed by 50.0% of Klebsiella oxytoca and 40.5% of Escherichia coli. ESBL production was also seen in Pseudomonas aeruginosa (35.7%) and Proteus mirabilis (33.3%). [Table 1]
Most of the ESBL strains were isolated from the department of Surgery (38.5%) followed by department of Obstetrics & Gynaecology (28.9%) and department of Medicine (23.1%). Comparison of DDST and PCDDT with MIC reduction test showed that the PCDDT was superior to the DDST for detection of ESBL producers. PCDDT showed 100% correlation with MIC reduction test whereas DDST failed to detect 13.5% of ESBL producers.
ESBL producers were isolated more frequently in patients hospitalized for more than 14 days (44.8%) when compared with ≤ 7 days of hospitalization (20.7%). [Table 2]
All ESBL producers were resistant to Cefuroxime and Piperacillin. 90.0% of strains were resistant to Cefoperazone, 82.7% to Ceftriaxone, 7

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผู้เขียนที่สอดคล้องกันดร. Krishan Nandan ผู้ช่วยศาสตราจารย์ ภาควิชาจุลชีววิทยาวิทยาลัยแพทยศาสตร์ Katiharลบากห์ Karim, Katihar พิหาร 854105อีเมล์: [e-mail]โทรศัพท์: + 91 9431259633บทคัดย่อ: พื้นหลัง: ขยายสเปกตรัมβ-lactamases (ESBL) เป็นเอนไซม์ที่มีความสามารถในการ hydrolyze ยาβ-lactam ประกอบด้วยกลุ่ม oxyimino และห้าม โดยβ-lactamase inhibitors เอนไซม์เหล่านี้มีหน้าที่ในการต้านทาน penicillins, monobactams รุ่นที่สาม และ ในบางกรณีสี่รุ่น cephalosporins ESBLs จะถูกเข้ารหัส โดย plasmids conjugative โอนที่มักรหัสสำหรับความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะอื่นเช่น วัตถุประสงค์: การศึกษานี้มีแนวโน้มมุ่งกำหนดผลิต ESBL ในแบคทีเรียลบกรัมในผู้ป่วยเข้าโรงพยาบาลการดูแลระดับตติยภูมิในพิหารตะวันออก วิธีการ: ทั้งหมด 556 ตัวอย่างจากผู้ป่วยเข้าห้องคลอดและผู้ป่วยนอกแผนกจาก 2552 พฤษภาคมถึง 2553 เมษายนถูกรวมในการศึกษา ตัวอย่างที่ถูกประมวลผลตามโพรโทคอลมาตรฐาน และทดสอบภูมิไวรับยาปฏิชีวนะทำ โดยปรับเปลี่ยนวิธีการเคอร์บี้ – Bauer แยกแสดงความต้านทานการใด ๆ cephalosporin รุ่นที่ 3 ถูกต้องการคู่ดิสก์ Synergy ทดสอบ (DDST), ไทป์เสร็จแผ่นแพร่ทดสอบ (PCDDT) และลด MIC ทดสอบ ESBL ผลิต ผลลัพธ์: 42.62% กรัมลบ bacilli ถูกผลิต ESBL 56.3 พบ%ของ Klebsiella pneumoniae สายพันธุ์จะ ผลิต ESBL โดยเฉพาะ 40.5% ของ Escherichia coli สร้าง ESBL PCDDT และ MIC ลดทดสอบสหสัมพันธ์แสดง 100% ขณะ DDST ล้มเหลวในการตรวจหา ESBL ผลิต 13.5% ผู้ผลิตทั้งหมด ESBL ได้สำคัญ Imipenem และ Cefoperazone / ซัลแบคแตม สรุป: การศึกษานำเสนอทำให้เราตัวบ่งชี้เกี่ยวกับการเกิดขึ้นของ ESBL ผลิตกรัมลบ bacilli ในพิหารตะวันออก จำนวนผู้ผลิต ESBL ในภูมิภาคนี้มีขนาดใหญ่ alarmingly ดังนั้นแนะนำว่า PCDDT จะรวมอยู่ในห้องปฏิบัติการทั้งหมดโดยเป็นส่วนหนึ่งของภูมิไวรับยาปฏิชีวนะที่ประจำที่ทดสอบขั้นตอนก็ง่าย เชื่อถือได้ และจำลองการทดสอบตรวจ ESBLsคำสำคัญ: ขยายสเปกตรัมβ-lactamases, ESBL, DDST, PCDDTบทนำ: ขยายสเปกตรัมβ-lactamases (ESBL) เป็นเอนไซม์ที่มีความสามารถในการ hydrolyze ยาβ-lactam ประกอบด้วย oxyimino การ จัดกลุ่ม (สาม cephalosporin รุ่นและ Aztreonam) และห้าม โดยβ-lactamase inhibitors เช่นกรด Clavulanic ซัลแบคแตม และ tazobactam1 ผลิต ESBLs ทำให้ทนทานต่อ penicillins, monobactams, cephalosporins รุ่นที่สาม เช่นเซฟตาซิดิมเซฟโฟแทกซิม เซฟไตรอะโซน และ ในบางกรณีสี่รุ่น cephalosporins also2 เกิดขึ้นของความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะβ-lactam เริ่มก่อนยาเพนนิซิลลินยาปฏิชีวนะβ-lactam แรกถูก developed3 Plasmid แรก mediated β-lactamase ยการ-1 รายงานในปี 1965 จากการ Escherichia coli แยกแยะต่าง ๆ ของผู้ป่วยในเอเธนส์ กรีซชื่อ Temoniera [จึงกำหนดยการ] 4 ปี ยาβ-lactam ใหม่จำนวนมากได้รับการพัฒนา อย่างไรก็ตาม ด้วยแต่ละชั้นใหม่ของยาปฏิชีวนะ β-lactamase ตัวใหม่เกิดที่ทำให้เกิดความต้านทานต่อยาคลาสนั้น ทับ ใช้ดันบังคับใช้และ overuse ใหม่ยาปฏิชีวนะผลในการเกิดขึ้นของตัวแปรใหม่ของβ-lactamases5 รายงานแรกของ plasmid เข้าβ-lactamase hydrolyzing cephalosporins สเปกตรัมขยายสามารถตีพิมพ์ในปี 1983 จาก Germany6 ดังนั้น β-lactamases เหล่านี้ใหม่ได้จังหวะเป็นสเปกตรัมขยายβ-lactamases7 ทศวรรษผ่านมาไม่กี่ จำนวนของβ-lactamases ใหม่ในทางคลินิกแยกของสมาชิกในครอบครัว Enterobacteriaceae ได้เกิด ลักษณะ ESBLs จำนวนเกิน 200 today8 ESBLs จะถูกเข้ารหัส โดยโอน conjugative plasmids ซึ่งมักจะได้รหัสสำหรับความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะอื่นเป็น well7 เป็น plasmid mediated พวกเขาได้ส่งสมาชิกของครอบครัว Enterobacteriaceae จึง อำนวยความสะดวกในการเผยแพร่ความต้านทานไม่เท่า กับβ-lactams แต่ยาปฏิชีวนะอื่น ๆ โดยทั่วไปใช้ quinolones และ aminoglycosides9 ปัจจัยเสี่ยงสำคัญสำหรับสนามหรือติดเชื้อกับ ESBL ที่ผลิตสิ่งมีชีวิตเปิดรับแสงนานยาปฏิชีวนะ นานฉุกเฉิน พยาบาลซี่ รุนแรง ใส่สายสวนหลอด ขัดจังหวะโดยบรรเลง พักในสถาบันมีอัตราสูงของใช้ของ cephalosporins.5 รุ่นสามการศึกษานี้มีแนวโน้มมุ่งกำหนดผลิต ESBL กรัมลบ bacilli ในโรงพยาบาลการดูแลระดับตติยภูมิในพิหารตะวันออก ตรวจหา ESBL ผลิตเป็นสิ่งสำคัญ เพราะในที่สุดกำหนดผลทางคลินิกในผู้ป่วยที่ติดเชื้อสายพันธุ์ดังกล่าว ศึกษา ESBL producing กรัมลบ bacilli ถูกรายงานจากทุกส่วนของอินเดียอย่างไรก็ตาม กับความรู้ของเรา ไม่ศึกษาดังกล่าวจนถึงวันมีการรายงานจากพิหารและ Jharkhandวิธีการและวัสดุ: เคลียร์จากคณะกรรมการจริยธรรมสถาบันได้รับก่อนดำเนินการศึกษา ผลรวมของห้าร้อยห้าสิบหก (556) ตัวอย่างได้แก่ปัสสาวะ หนองใน อุจจาระ และ pleural fluid จากผู้ป่วยเข้าห้องคลอดและผู้ป่วยนอกแผนกต่าง ๆ รวมอยู่ในการศึกษา ประวัติโดยสังเขปทางคลินิกของผู้ป่วยเกี่ยวกับการบริโภคยาปฏิชีวนะ การใช้เครื่องมือ และระยะเวลาของโรงพยาบาลถูกนำ รวบรวมไว้เป็นตัวอย่างที่ inoculated agar เลือดแกะ 5% และของ MacConkey agar พวกเขาได้ระบุตามมาตรฐาน tests.10 ชีวเคมีทดสอบภูมิไวรับของยาปฏิชีวนะ (AST) ทำบนแผ่น – Mueller Hinton agar (MHA) โดยปรับเปลี่ยนเคอร์บี้ – Bauer ดิสก์แพร่เทคนิคใช้ดิสก์ยาปฏิชีวนะใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ (HiMedia มุมไบ) เมื่อยับยั้งการแยกใด ๆ หรือของรุ่นที่สามคือ cephalosporin (เซฟโฟแทกซิม เซฟไตรอะโซน เซฟตาซิดิม และ Cefoperazone) น้อยกว่า หรือเท่ากับเส้นผ่าศูนย์กลางโซนแนะนำตาม CLSI (Clinical และ สถาบันมาตรฐานห้องปฏิบัติการ), การแยกโซนเพิ่มเติมทดสอบ โดยการ PCDDT ทดสอบลด MIC และ DDST สำหรับ ESBL production.11 DDST: ระงับเชื้อแบคทีเรียที่จะทดสอบถูกเตรียมใน Mueller – Hinton ซุป (MHB) หลังจากจับคู่ความขุ่นของน้ำ 0.5 McFarland มาตรฐาน สิ่งมีชีวิตที่ถูก inoculated ใน MHA ตามคำแนะนำสำหรับเทคนิคแพร่ดิสก์ ลดกรด Amoxycillin/Clavulanic ถูกวางในจาน สี่ยาปฏิชีวนะดิสก์เช่นเซฟโฟแทกซิม เซฟตาซิดิม เซฟไตรอะโซน และ Cefoperazone ถูกวาง ในระยะทาง 20 มม. (ศูนย์-ศูนย์) จากดิสก์กรด Amoxycillin/Clavulanic และ ที่ 90 องศากัน แผ่นถูกตรวจสอบหลังจากบ่มค้างคืน ของโซนยับยั้งของดิสก์ยาปฏิชีวนะ 4 ต่อ Amoxycillin / ลดกรด Clavulanic ระบุผลิตของ ESBL โดยสายพันธุ์PCDDT: MHA แผ่นถูก inoculated ในลักษณะเดียวกันเป็น DDST สี่ยาปฏิชีวนะดิสก์ viz.เซฟโฟแทกซิม เซฟโฟแทกซิม / กรด Clavulanic เซฟตาซิดิมและเซฟตาซิดิม / กรด Clavulanic ถูกวางในระยะทาง 30 มม. (ศูนย์-ศูนย์) จากกัน มีการตรวจสอบแผ่นหลังค้างคืนบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ผลิต ESBL ถูกยืนยันเมื่อมีการเพิ่มเส้นผ่าศูนย์กลางโซน 5 มม.หรือเพิ่มมากขึ้นเมื่อกรด Clavulanic ถูกให้ยาปฏิชีวนะตามลำดับ [Fig. 1]ทดสอบลด MIC: เตรียมใน MHB และตรงกับมาตรฐาน 0.5 McFarland ระงับเชื้อแบคทีเรียที่สามารถทดสอบ เป็นความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 X 105 CFU/ml เชื้อแบคทีเรีย ต้อง ระงับที่เทียบเท่ากับมาตรฐาน 0.5 McFarland ได้เพิ่มเติม 1: 100 แตกออกใน MHB.12 ยาปฏิชีวนะในรูปแบบผงได้รับมาจากซิกมา-Aldrich เคมี pvt. Ltd บังกาลอร์ Dilutions ถูกเตรียมในช่วงต่อไปนี้: -เซฟตาซิดิม: 0.25 – มล 256 ไมโครกรัมเป็นเครื่อง -เซฟตาซิ ดิม/Clavulanic กรด: 0.25/4 – 256/4 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml -เซฟโฟแทกซิม: 0.25 – มล 256 ไมโครกรัมเป็นเครื่อง -เซฟโฟแทก ซิม/Clavulanic กรด: 0.25/4 – 256/4 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/mlช่วงยาปฏิชีวนะได้เตรียมขั้นตอนหนึ่งที่สูงกว่าช่วงเจือจางสุดท้ายต้องชดเชยการเพิ่มของปริมาณเท่าของ inoculum 100 µl ของเจือจางยาปฏิชีวนะแต่ละที่คำในบ่อมันของพวกเขาเกี่ยวข้อง เพิ่ม 100 µl ของระงับแบคทีเรียแตกออกให้ดีละกัน 200 µl ของซุป uninoculated และ inoculated ยังมีคำในบ่อในแต่ละแถวเป็นควบคุม sterility และเจริญเติบโต บ่อ microtitre ถูกตรวจสอบหลังจากบ่มค้างคืน ความเข้มข้นต่ำสุดของยาปฏิชีวนะที่พบเจริญเติบโตไม่เห็นแสดงค่า MIC ของสิ่งมีชีวิตที่ เพราะการได้รับการยืนยันเป็นโปรดิวเซอร์ ESBL ถ้ามี≥ 3 สองต้นนี้หุบ (8 เท่า) ลดใน MIC cephalosporin รุ่นที่สามในเพิ่มกรด Clavulanic เมื่อเทียบกับ cephalosporin รุ่นที่ 3 เมื่อใช้ alone12 [Fig. 2]ผล: ผลรวมของห้าร้อยห้าสิบหก (556) ได้รับตัวอย่างในห้องปฏิบัติการในช่วงเวลาศึกษาจากสายพันธุ์ที่หนึ่งร้อยยี่สิบสองของกรัม ลบ bacilli ได้แยก (21.9%) 62 สายพันธุ์ได้จากภายในขณะที่ 60 จากผู้ป่วยกลางแจ้ง โดยรวมพบ 52 (42.6%) ของเหล่านี้แยกเป็น ESBL ผลิต 56.3% ของ Klebsiella pneumoniae มี ESBL ผลิต ตาม ด้วย 50.0% ของ Klebsiella oxytoca และ 40.5% ของ Escherichia coli ผลิต ESBL ยังเห็นใน Pseudomonas aeruginosa (35.7%) และ Proteus mirabilis (33.3%) ตาราง [1] ทั้งสายพันธุ์ ESBL แยกต่างหากจากวิชาผ่าตัด (38.5%) ตาม ด้วยภาควิชาสูติศาสตร์ และนรีเวชวิทยา (28.9%) และภาควิชาเวชศาสตร์ (23.1%) เปรียบเทียบ DDST และ PCDDT กับ MIC ลดทดสอบพบว่า PCDDT ที่มีเหนือกว่า DDST สำหรับการตรวจหา ESBL ผู้ผลิต PCDDT แสดงให้เห็นความสัมพันธ์ 100% กับ MIC ลดทดสอบขณะ DDST ล้มเหลวในการตรวจหา ESBL ผลิต 13.5% ผู้ผลิต ESBL แยกต่างหากบ่อยในผู้ป่วยที่พักมากกว่า 14 วัน (44.8%) เมื่อเปรียบเทียบกับ≤ 7 วัน ๑๐๐๐ (20.7%) [ตาราง 2] ผู้ผลิตทั้งหมด ESBL ทนต่อเซฟูรอกซิมและ Piperacillin ได้ 90.0% ของสายพันธุ์ทนต่อ Cefoperazone, 82.7% เซฟไตรอะโซน 7

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผู้ติดต่อ
ดร. Krishan นานดาน, ผู้ช่วยศาสตราจารย์
ภาควิชาจุลชีววิทยา
Katihar วิทยาลัยการแพทย์,
คาริม Bagh, Katihar มคธ 854105,
E-mail: [e-mail],
โทรศัพท์: [phone]. บทคัดย่อ: ภูมิหลัง: สเปกตรัมขยายβ-lactamases (เชื้อ) เป็นเอนไซม์ที่มีความสามารถในการย่อยสลายยาปฏิชีวนะβ-lactam มี oxyimino กลุ่มและมีการยับยั้งโดย ยับยั้งβ-lactamase เอนไซม์เหล่านี้เป็นผู้รับผิดชอบในการต้านทานต่อ penicillins, monobactams, รุ่นที่สามและในบางกรณีที่สี่ cephalosporins รุ่น ESBLs จะถูกเข้ารหัสโดยพลาสมิด conjugative โอนเปลี่ยนมือที่มักรหัสสำหรับความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะอื่น ๆ เช่นกัน วัตถุประสงค์: การศึกษานี้ในอนาคตมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการผลิตเชื้อในแบคทีเรียแกรมลบในผู้ป่วยที่เข้าร่วมโรงพยาบาลระดับตติยภูมิในภาคตะวันออกของแคว้นมคธ วิธีการ: ทั้งหมด 556 ตัวอย่างจากผู้ป่วยที่เข้าร่วมแผนกผู้ป่วยในและผู้ป่วยนอกตั้งแต่เดือนพฤษภาคม 2009 ถึงเมษายน 2010 ถูกรวมอยู่ในการศึกษา ตัวอย่างที่ถูกประมวลผลตามโปรโตคอลมาตรฐานและการทดสอบความไวต่อยาปฏิชีวนะได้กระทำโดยการปรับเปลี่ยนวิธี Kirby-Bauer แยกการแสดงความต้านทานต่อ cephalosporin รุ่นที่สามใด ๆ ที่ถูกยัดเยียดให้ดิสก์คู่ Synergy การทดสอบ (DDST), ฟีโนไทป์ยืนยัน Disc แพร่ทดสอบ (PCDDT) และการทดสอบการลด MIC สำหรับการผลิตเชื้อ ผลการศึกษา: 42.62% ของแบคทีเรียแกรมเชิงลบเป็นผู้ผลิตเชื้อ 56.3% ของสายพันธุ์ Klebsiella pneumoniae พบว่ามีการผลิตเชื้อขณะที่มีเพียง 40.5% ของ Escherichia coli ผลิตเชื้อ PCDDT และการทดสอบการลด MIC มีความสัมพันธ์ 100% ในขณะที่ DDST ล้มเหลวในการตรวจสอบ 13.5% ของผู้ผลิตเชื้อ ผู้ผลิตเชื้อทุกคนไวต่อ imipenem และ cefoperazone / ซัลแบคแท สรุป: การศึกษาครั้งนี้จะช่วยให้เราบ่งชี้เกี่ยวกับการเกิดขึ้นของเชื้อแบคทีเรียแกรมการผลิตเชิงลบในภาคตะวันออกของแคว้นมคธ จำนวนของผู้ผลิตเชื้อในภูมิภาคนี้ที่มีขนาดใหญ่อย่างน่าตกใจ ดังนั้นจึงขอแนะนำให้ PCDDT จะรวมในห้องปฏิบัติการทั้งหมดเป็นส่วนหนึ่งของขั้นตอนการทดสอบความไวต่อยาปฏิชีวนะตามปกติในขณะที่มันเป็นเรื่องง่ายที่การทดสอบที่เชื่อถือได้และทำซ้ำในการตรวจหา ESBLs. ที่มา: สเปกตรัมขยายβ-lactamases, เชื้อ, DDST, PCDDT. บทนำ: สเปกตรัมขยายβ-lactamases (เชื้อ) เป็นเอนไซม์ที่มีความสามารถในการย่อยสลายยาปฏิชีวนะβ-lactam มีกลุ่ม oxyimino (cephalosporin รุ่นที่สามและ aztreonam) และมีการยับยั้งโดยยับยั้งβ-lactamase clavulanic เช่นกรดซัลแบคแทและ tazobactam1 การผลิต ESBLs นำไปสู่ความต้านทานต่อ penicillins, monobactams, cephalosporins รุ่นที่สามเช่น cefotaxime, Ceftriaxone, ceftazidime และในบางกรณีที่สี่ cephalosporins รุ่น also2. การเกิดขึ้นของความต้านทานต่อβ-lactam ยาปฏิชีวนะเริ่มแม้กระทั่งก่อนที่ยาปฏิชีวนะยาปฏิชีวนะβ-lactam แรกคือ developed3 พลาสมิดแรกพึ่งβ-lactamase, TEM-1 มีรายงานในปี 1965 จากการแยกเชื้อ Escherichia coli ที่อยู่ในประเภทผู้ป่วยในเอเธนส์, กรีซชื่อ Temoniera [กำหนดจึง TEM] 4 กว่าปีที่ยาปฏิชีวนะβ-lactam ใหม่ ๆ ได้รับการพัฒนา; แต่การที่มีระดับใหม่แต่ละยาปฏิชีวนะβ-lactamase ใหม่โผล่ออกมาว่าเกิดจากความต้านทานต่อการเรียนของยาเสพติดที่ สันนิษฐานความดันเลือกที่กำหนดโดยการใช้งานและการใช้มากเกินไปของผลยาปฏิชีวนะใหม่ในการเกิดขึ้นของสายพันธุ์ใหม่ของβ-lactamases5 รายงานครั้งแรกของพลาสมิดที่เข้ารหัสβ-lactamase ความสามารถในการย่อย cephalosporins สเปกตรัมขยายรับการตีพิมพ์ในปี 1983 จาก Germany6 ดังนั้นเหล่านี้ lactamases β-ใหม่ถูกประกาศเกียรติคุณเป็นสเปกตรัมขยายβ-lactamases7 ในช่วงไม่กี่ทศวรรษที่ผ่านมาจำนวนของ lactamases β-ใหม่ในเชื้อทางคลินิกของสมาชิกในครอบครัว Enterobacteriaceae ได้โผล่ออกมา จำนวนรวมของ ESBLs โดดเด่นเกิน 200 today8 ESBLs จะถูกเข้ารหัสโดยพลาสมิด conjugative เปลี่ยนมือได้ซึ่งมักรหัสสำหรับความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะอื่น ๆ เช่น well7 ถูกพลาสมิดพึ่งพวกเขาจะถูกส่งได้อย่างง่ายดายในหมู่สมาชิกของครอบครัว Enterobacteriaceae จึงอำนวยความสะดวกการเผยแพร่ความต้านทานไม่เพียง แต่จะ lactams β- แต่ยังรวมถึงยาปฏิชีวนะที่ใช้กันทั่วไปอื่น ๆ เช่น quinolones และ aminoglycosides9 ปัจจัยเสี่ยงที่สำคัญสำหรับการล่าอาณานิคมหรือการติดเชื้อที่มีการผลิตเชื้อมีชีวิตสัมผัสเป็นเวลานานต่อยาปฏิชีวนะพักห้องไอซียูเป็นเวลานาน, ถิ่นที่อยู่บ้านพักคนชราเจ็บป่วยรุนแรงสวนแทรกแซงสื่อและถิ่นที่อยู่ในสถาบันการศึกษาที่มีอัตราที่สูงของการใช้ cephalosporins.5 รุ่นที่สามนี้ในอนาคต การศึกษาที่มุ่งเป้าไปที่การพิจารณาการผลิตเชื้อแบคทีเรียแกรมในเชิงลบในโรงพยาบาลระดับตติยภูมิในภาคตะวันออกของแคว้นมคธ การตรวจหาเชื้อการผลิตเป็นสิ่งสำคัญเพราะในที่สุดจะกำหนดผลทางคลินิกในผู้ป่วยที่ติดเชื้อที่มีสายพันธุ์ดังกล่าว การศึกษาเกี่ยวกับการผลิตเชื้อแบคทีเรียแกรมเชิงลบที่ได้รับรายงานจากทุกส่วนของประเทศอินเดีย แต่ที่ดีที่สุดของความรู้ของเรา; ไม่มีการศึกษาดังกล่าวจนถึงวันที่ได้รับรายงานจากแคว้นมคธและจาร์. วัสดุและวิธีการ: โปรโมชั่นจากสถาบันคณะกรรมการจริยธรรมที่ได้รับก่อนที่จะมีการดำเนินการศึกษาครั้งนี้ รวมของ 556 (556) ตัวอย่าง ได้แก่ ปัสสาวะหนองอุจจาระและน้ำเยื่อหุ้มปอดจากผู้ป่วยที่เข้าร่วมการประชุมผู้ป่วยที่แตกต่างกันและหน่วยงานผู้ป่วยนอกได้รวมอยู่ในการศึกษา ประวัติโดยย่อของคลินิกผู้ป่วยเกี่ยวกับการรับประทานยาปฏิชีวนะวัดและระยะเวลาในการเข้าพักที่โรงพยาบาลถูกนำ ตัวอย่างที่เก็บถูกเชื้อเมื่อวันที่ 5% วุ้นเลือดแกะและวุ้น MacConkey ของ พวกเขาถูกระบุ tests.10 มาตรฐานทางชีวเคมียาปฏิชีวนะไวเซส (AST) แล้วเสร็จใน Mueller-Hinton agar (หมา) แผ่นโดยการปรับเปลี่ยนแผ่นดิสก์ Kirby-Bauer เทคนิคการแพร่กระจายโดยใช้แผ่นยาปฏิชีวนะที่ใช้ในเชิงพาณิชย์ (HIMEDIA มุมไบ) เมื่อโซนของการยับยั้งการแยกสำหรับคนใดคนหนึ่งหรือมากกว่าของ cephalosporin รุ่นที่สาม (cefotaxime, Ceftriaxone, ceftazidime และ cefoperazone) น้อยกว่าหรือเท่ากับขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางโซนที่แนะนำโดย CLSI (คลินิกและสถาบันห้องปฏิบัติการ) แยกเป็น การทดสอบต่อไปโดย PCDDT ทดสอบลด MIC และ DDST สำหรับเชื้อ production.11 DDST: ระงับแบคทีเรียที่จะทดสอบได้รับการจัดทำขึ้น Mueller-Hinton น้ำซุป (MHB) หลังจากที่จับคู่ความขุ่นมาตรฐาน 0.5 McFarland ของสิ่งมีชีวิตที่ถูกเชื้อในเลดตามแนวทางสำหรับเทคนิคการแพร่แผ่นดิสก์ Amoxycillin / clavulanic แผ่นกรดถูกวางไว้ตรงกลางจาน สี่แผ่นยาปฏิชีวนะเช่น cefotaxime, ceftazidime, Ceftriaxone และ cefoperazone ถูกวางไว้ที่ระยะ 20 มิลลิเมตร (ศูนย์ศูนย์) จากแผ่นดิสก์กรด Amoxycillin / clavulanic และที่ 90 °จากกันและกัน แผ่นมีการตรวจสอบหลังจากที่บ่มในชั่วข้ามคืน การเพิ่มประสิทธิภาพของบริเวณยับยั้งใด ๆ ของสี่แผ่นยาปฏิชีวนะต่อแผ่นกรด Amoxycillin / clavulanic ชี้ให้เห็นการผลิตของเชื้อโดยสายพันธุ์. PCDDT: แผ่นเลดถูกเชื้อในลักษณะเดียวกับ DDST สี่แผ่น ได้แก่ ยาปฏิชีวนะ cefotaxime, cefotaxime / กรด clavulanic, ceftazidime และ ceftazidime / กรด clavulanic ถูกวางไว้ที่ระยะ 30 มิลลิเมตร (ศูนย์ศูนย์) จากกันและกัน แผ่นมีการตรวจสอบหลังจากบ่มค้างคืนที่ 37 องศาเซลเซียส การผลิตเชื้อได้รับการยืนยันเมื่อมีการเพิ่มขึ้นในโซนเส้นผ่าศูนย์กลาง 5 มิลลิเมตรขึ้นเมื่อกรด clavulanic ถูกบันทึกอยู่ในยาปฏิชีวนะที่เกี่ยวข้อง [รูป 1] การทดสอบ MIC ลด: ระงับแบคทีเรียที่จะทดสอบได้รับการจัดทำขึ้น MHB และตรงกับมาตรฐาน 0.5 McFarland ของ ในฐานะที่เป็นความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 x 105 CFU / ml ถูกต้องเทียบเท่าระงับแบคทีเรียถึง 0.5 มาตรฐาน McFarland ถูกปรับลดต่อไป 1: 100 ใน MHB.12 ยาปฏิชีวนะในรูปแบบผงที่ได้รับจาก บริษัท Sigma-Aldrich Chemicals Pvt จำกัด , บังกาลอร์ เจือจางได้จัดทำขึ้นในช่วงต่อไปนี้: - ซิดีม: 0.25-256 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร- ceftazidime / กรด clavulanic: 0.25 / 4 - 256/4 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร- cefotaxime: 0.25-256 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร- cefotaxime / กรด clavulanic: 0.25 / 4 - 256/4 ไมโครกรัม / มลช่วงปฏิชีวนะได้จัดทำขั้นตอนหนึ่งที่สูงกว่าช่วงที่ทำให้เจือจางสุดท้ายที่จำเป็นในการชดเชยการเพิ่มขึ้นของปริมาณที่เท่ากันของเชื้อ 100 ไมโครลิตรของแต่ละเจือจางยาปฏิชีวนะที่ถูกจ่ายในบ่อที่มีข้อความของตน 100 ไมโครลิตรของการระงับแบคทีเรียเจือจางถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดี 200 ไมโครลิตรของน้ำซุปลำต้นและเชื้อได้รับการจ่ายยังอยู่ในหลุมในแต่ละแถวเป็นหมันและการควบคุมการเจริญเติบโต หลังจากการบ่มค้างคืนที่หลุม microtitre ถูกตรวจสอบ ความเข้มข้นต่ำสุดของยาปฏิชีวนะที่แสดงให้เห็นว่าไม่มีการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้เป็นตัวแทนของค่า MIC ของสิ่งมีชีวิต แยกได้รับการยืนยันในฐานะผู้ผลิตเชื้อถ้ามี≥ 3 สองเท่า (แปดครั้ง) ลดลงใน MIC ของ cephalosporin รุ่นที่สามเกี่ยวกับการเพิ่มขึ้นของกรด clavulanic เมื่อเทียบกับ cephalosporin รุ่นที่สามเมื่อใช้ alone12 [รูป 2] ผล: รวมของ 556 (556) กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับในห้องปฏิบัติการในช่วงระยะเวลาการศึกษาออกจากที่ 122 สายพันธุ์ของแบคทีเรียแกรมเชิงลบที่แยกได้ (21.9%) 62 สายพันธุ์มาจากน้ำในร่มในขณะที่ 60 มาจากผู้ป่วยที่กลางแจ้ง โดยรวม 52 (42.6%) ของเชื้อเหล่านี้พบว่ามีการผลิตเชื้อ; 56.3% ของ Klebsiella pneumoniae เป็นผู้ผลิตเชื้อตามด้วย 50.0% ของ Klebsiella oxytoca และ 40.5% ของเชื้อ Escherichia coli การผลิตเชื้อก็เห็นในเชื้อ Pseudomonas aeruginosa (35.7%) และ Proteus mirabilis (33.3%) [ตารางที่ 1] ส่วนใหญ่ของสายพันธุ์เชื้อที่แยกได้จากแผนกศัลยกรรม (38.5%) ตามมาด้วยภาควิชาสูติศาสตร์นรีเวชวิทยา (28.9%) และภาควิชาแพทยศาสตร์ (23.1%) เปรียบเทียบ DDST และ PCDDT กับการทดสอบการลด MIC แสดงให้เห็นว่า PCDDT จะดีกว่า DDST สำหรับการตรวจสอบของผู้ผลิตเชื้อ PCDDT มีความสัมพันธ์ 100% กับการทดสอบการลด MIC ในขณะที่ DDST ล้มเหลวในการตรวจสอบ 13.5% ของผู้ผลิตเชื้อ. ผลิตเชื้อที่แยกได้บ่อยในผู้ป่วยที่รักษาในโรงพยาบาลนานกว่า 14 วัน (44.8%) เมื่อเทียบกับ≤ 7 วันของการรักษาในโรงพยาบาล (20.7%) . [ตารางที่ 2] ทั้งหมดผลิตเชื้อมีความทนทานต่อการ cefuroxime และ piperacillin 90.0% ของสายพันธุ์ที่มีความทนทานต่อการ cefoperazone, 82.7% เป็น Ceftriaxone, 7

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ผู้เขียน ดร. krishan

นาน , ผู้ช่วยศาสตราจารย์ ภาควิชาจุลชีววิทยา คณะที่ตั้ง

, คาริม Bagh , ที่ตั้ง . แคว้นมคธ 854105
, E - mail : drknandan @ gmail . com
โทรศัพท์ : 91 9431259633

: : พื้นหลังนามธรรมขยายสเปกตรัมของบีตา - lactamases ( esbl ) เป็นเอนไซม์ที่สามารถย่อยบีตา - ชุดขนสัตว์ที่มี oxyimino กลุ่มและถูกยับยั้งโดยบีตา - แลคตาเมสตัวยับยั้ง เอนไซม์เหล่านี้จะรับผิดชอบสำหรับความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะ monobactams รุ่นที่สาม , , และในบางกรณียารุ่นที่ 4 .esbls มีการเข้ารหัสโดยโอน conjugative พลาสมิดที่ต้านทานยาปฏิชีวนะมักจะรหัสอื่น ๆเช่นกัน วัตถุประสงค์ : ผู้ป่วยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการผลิต esbl ในแบคทีเรียกรัมลบในผู้ป่วยโรงพยาบาลตติยภูมิในภาคตะวันออกของรัฐพิหาร วิธีการ :จำนวน 554 ตัวอย่าง จากผู้ป่วยแผนกผู้ป่วยในและผู้ป่วยนอกจากเดือนพฤษภาคม 2552 ถึงเดือนเมษายน 2553 ถูกรวมอยู่ในการศึกษา ตัวอย่างการประมวลผลตามมาตรฐานและการทดสอบโดยใช้ยาปฏิชีวนะ ทำได้โดยแก้ไขเคอร์บี้–บาวเออร์ด้วย สายพันธุ์ที่แสดงความต้านทาน cephalosporin รุ่นที่สามถูกทดสอบพลังแผ่นคู่ ( DDST )คุณสมบัติเชิงทดสอบแผ่นกระจาย ( pcddt ) และทดสอบไมค์ลดการผลิต esbl . ผลลัพธ์ : 42.62 % ของเชื้อแกรมลบเป็นผู้ผลิต esbl . Klebsiella pneumoniae สายพันธุ์ 56.3 % พบว่ามี esbl ผู้ผลิตในขณะที่เพียงร้อยละ 40.5 Escherichia coli ผลิต esbl . pcddt และทดสอบไมค์พบ 100% ลดความสัมพันธ์ในขณะที่ DDST ล้มเหลวในการตรวจสอบ 13.5% ของผู้ผลิต esbl .ผู้ผลิต esbl ทั้งหมดได้ไวและอิมิพีเนม Cefoperazone / ซัลแบคแทม . สรุป : การศึกษาให้ข้อบ่งชี้เกี่ยวกับการเกิดของ esbl การผลิตเชื้อกรัมลบในภาคตะวันออกของรัฐพิหาร หมายเลขของผู้ผลิต esbl ในภูมิภาคนี้มีสัตบุรุษจำนวนมากจึงเสนอแนะให้ pcddt รวมอยู่ในห้องปฏิบัติการเป็นส่วนหนึ่งของรูทีนยาปฏิชีวนะกลุ่มการทดสอบขั้นตอนมันง่ายและเชื่อถือได้ ) ทดสอบและตรวจหา esbls .
คำสำคัญ : ขยายสเปกตรัมของบีตา - lactamases esbl DDST pcddt , , ,

บทนำ :ขยายสเปกตรัมของบีตา - lactamases ( esbl ) เป็นเอนไซม์ที่สามารถย่อยบีตา - ชุดขนสัตว์ที่มี oxyimino กลุ่ม cephalosporin รุ่นที่ 3 และแอซทรีโอนัม ) และถูกยับยั้งโดยบีตา - แลคตาเมสอินฮิบิเตอร์เหมือน clavulanic กรดซัลแบคแทม และ tazobactam1 . การผลิต esbls นำไปสู่ความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะเซฟาโลสปอรินส์ monobactams , , ชอบใส่ไคล้ที่สาม ,โอยา และในบางกรณีที่สี่เซฟาโลสปอรินส์ also2 .
การต้านทานบีตา - ชุดขนสัตว์เริ่มแม้กระทั่งก่อนที่บีตา - แรก lactam ยาปฏิชีวนะเพนนิซิลิน developed3 . สายพันธุ์แรกที่ผ่านการศึกษา tem-1 บีตา , รายงานในปี 1965 จากเชื้อ Escherichia coli ที่แยกได้เป็นผู้ป่วยใน เอเธนส์ , กรีซ ชื่อ temoniera [ ดังนั้นเขต TEM ] 4 .ปี บีตา - ใหม่หลายชุดขนสัตว์ได้ถูกพัฒนาขึ้น อย่างไรก็ตาม แต่ละชั้นเรียนใหม่ของยาปฏิชีวนะ บีตา - แลคตาเมสเกิดใหม่ที่เกิดจากความต้านทานที่ห้องยา สันนิษฐาน , ใช้ความดันที่กำหนดโดยการใช้ยาปฏิชีวนะและ overuse ของใหม่ผลลัพธ์ในการเกิดขึ้นของสายพันธุ์ใหม่ของบีตา - lactamases5 .รายงานแรกของสายพันธุ์บีตา - แลคตาเมสมีความสามารถในการย่อยที่ขยายสเปกตรัมด้วยยาถูกตีพิมพ์ในปี 1983 จาก germany6 . ดังนั้นเหล่านี้ใหม่ lactamases ถูก coined โดยบีตา - บีตา - สเปกตรัมขยาย lactamases7 . กว่าสามทศวรรษที่ผ่านมาหมายเลขใหม่ของบีตา - lactamases ในทางคลินิก พบว่า สมาชิกครอบครัวของผิดเพี้ยนเกิดขึ้นได้จำนวน esbls โดดเด่นเกิน 200 today8 . esbls มีการเข้ารหัสโดยโอน conjugative พลาสมิดต้านทานยาปฏิชีวนะซึ่งมักจะรหัสอื่น ๆที่ well7 . เป็นพลาสมิดโดยพวกเขาสามารถส่งผ่านระหว่างสมาชิกของครอบครัวผิดเพี้ยน ,ดังนั้นการส่งเสริมการเผยแพร่ของบีตา - lactams ต้านทานไม่เพียง แต่ยังอื่น ๆนิยมใช้ยาปฏิชีวนะ เช่น ควิโนโลน และ aminoglycosides9 . ปัจจัยเสี่ยงหลักสำหรับการล่าอาณานิคม หรือมีการติดเชื้อ esbl การผลิตสิ่งมีชีวิตมีการเปิดรับแสงนานยาปฏิชีวนะ นานอยู่ไอซียู พยาบาลบ้านทำเนียบ รุนแรง การเจ็บป่วย การใช้สายสวน