SL-biofilms and colony biofilms wer

SL-biofilms and colony biofilms were incubated and
allowed to grow for 7 days, during which a biofilm developed
(see Additional file 1: Figure S2). Static biofilms
were then harvested by mechanical disruption through
repetitive pipetting to detach the biofilm, followed by
vortexing within a conical tube. Colony biofilms were
placed into 1.5-ml tubes with 1 ml of Hv-starve medium
with sterile forceps, vortexed and then shaken at 180 rpm
for 1 h at 42°C to release cells for plating. An identical mixture
of H53 and H98 liquid culture was also left shaking at
180 rpm for 7 days as a negative control. Samples for each
condition were washed three times with Hv-starve medium,
resuspended in Hv-starve and plated on Hv-Ca with uracil
as selective screen forH53 andH98 prototrophic revertants
and Hv-YPC + thy for total viable counts. Pure culturesof H53 and H98 were included for each condition as a
negative control for mating. Plating on Hv-Ca medium
without uracil was also included in the experiment to
control for spontaneous reversion to uracil prototrophy
(although this was not likely as the pyrE2 gene is not mutated
in H53/H98, but is completely deleted) or the presence
of any ura + strain; no colonies were observed for any
of these conditions. The transfer frequency was calculated
by dividing the average number of colony-forming units
(CFU) per ml on selective medium (Hv-Ca with uracil) for
each replicate set by the corresponding averaged total CFU
count (CFU/ml on Hv-YPC + thy medium).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Biofilms SL biofilms และอาณานิคมถูก incubated และสามารถเจริญเติบโตสำหรับวัน ซึ่ง biofilm การพัฒนา(ดูเพิ่มเติมแฟ้ม 1: S2 รูป) Biofilms คงแล้วเก็บเกี่ยวผลผลิต โดยทรัพยกลผ่านซ้ำ pipetting กับ biofilm ตามด้วยvortexing ภายในท่อทรงกรวย Biofilms อาณานิคมได้อยู่ในหลอด 1.5 มิลลิลิตรกับ ml 1 ของกลางอด Hvด้วยการใส่คีม vortexed และเขย่าแล้ว ที่ 180 รอบต่อนาทีสำหรับ h 1 ที่ 42 องศาเซลเซียสจะปล่อยเซลล์สำหรับชุบ มีส่วนผสมเหมือนกันH53 และ H98 วัฒนธรรมของเหลวยังเหลือสั่นที่180 รอบต่อนาที 7 วันเป็นตัวควบคุมค่าลบ ตัวอย่างสำหรับแต่ละสภาพถูกล้างสามครั้งกับ Hv อดกลางresuspended อด Hv และชุบบน Hv-Ca กับ uracilเป็นหน้าจอเลือก forH53 andH98 prototrophic revertantsและ Hv YPC + พระองค์สำหรับตรวจนับได้รวม Culturesof บริสุทธิ์ H53 และ H98 ถูกรวมไว้สำหรับแต่ละเงื่อนไขเป็นการควบคุมค่าลบสำหรับผสมพันธุ์ ชุบบนกลาง Hv-Caโดย uracil ยังรวมอยู่ในการทดลองควบคุมสำหรับ reversion อยู่กับ uracil prototrophy(แม้ว่าไม่น่าจะเป็นยีน pyrE2 จะไม่กลายใน H53/H98 แต่จะถูกลบทั้งหมด) หรือการura +ต้องใช้ ใด ๆ อาณานิคมไม่ได้ตรวจสอบใด ๆเงื่อนไขเหล่านี้ คำนวณความถี่ของการโอนย้ายโดยแบ่งจำนวนเฉลี่ยของอาณานิคมขึ้นหน่วย(CFU) ต่อ ml ในการเลือกปานกลาง (Hv-Ca กับ uracil)แต่ละซ้ำโดยให้สอดคล้องกับ averaged CFU รวมจำนวน (CFU/ml Hv YPC +กลางพระองค์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

SL-ไบโอฟิล์มและไบโอฟิล์มอาณานิคมถูกบ่มและ
ได้รับอนุญาตให้เติบโตเป็นเวลา 7 วันซึ่งในระหว่างการพัฒนาไบโอฟิล์ม
(ดูแฟ้มเพิ่มเติม 1: รูปที่ S2) ไบโอฟิล์มคง
ได้รับการเก็บเกี่ยวแล้วจากการหยุดชะงักกลผ่าน
ปิเปตซ้ำที่จะแยกออกไบโอฟิล์มตามด้วย
vortexing ภายในหลอดรูปกรวย อาณานิคมไบโอฟิล์มถูก
วางลงในหลอด 1.5 มิลลิลิตร 1 มิลลิลิตรของ HV-อดกลาง
กับคีมหมันการ vortex และเขย่าแล้วที่ 180 รอบต่อนาที
เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 42 ° C ถึงปล่อยเซลล์สำหรับชุบ ส่วนผสมที่เหมือนกัน
ของ H53 และวัฒนธรรมของเหลว H98 ก็ยังเหลือเขย่าที่
180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 7 วันเป็นตัวควบคุมเชิงลบ ตัวอย่างสำหรับแต่ละ
สภาพถูกล้างสามครั้งที่มีขนาดกลาง HV-อด,
resuspended ใน HV-อดอาหารและชุบใน HV-Ca กับ uracil
เป็นหน้าจอเลือก forH53 andH98 revertants prototrophic
และ HV-YPC + ของพระองค์นับจุลินทรีย์ทั้งหมด culturesof H53 H98 บริสุทธิ์และถูกรวมสำหรับแต่ละเงื่อนไขที่
ควบคุมเชิงลบสำหรับการผสมพันธุ์ ชุบบน HV-Ca กลาง
โดยไม่ต้อง uracil ก็รวมอยู่ในการทดลองการ
ควบคุมสำหรับการพลิกกลับที่เกิดขึ้นเองเพื่อ uracil prototrophy
(แม้ว่านี้ไม่น่าจะเป็นยีน pyrE2 ไม่ได้กลายพันธุ์
ใน H53 / H98 แต่จะถูกลบออกอย่างสมบูรณ์) หรือการปรากฏตัว
ของใด ๆ สายพันธุ์ยู +; อาณานิคมไม่ถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับการใด ๆ
ของเงื่อนไขเหล่านี้ ความถี่การโอนที่คำนวณ
โดยการหารค่าเฉลี่ยของจำนวนหน่วยอาณานิคมขึ้นรูป
(CFU) ต่อมิลลิลิตรในสื่อเลือก (HV-Ca กับ uracil) สำหรับ
แต่ละทำซ้ำที่กำหนดโดย CFU รวมเฉลี่ยที่สอดคล้อง
นับ (CFU / ml ใน HV-YPC + สื่อเจ้า)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไบโอฟิล์ม SL และอาณานิคมไบโอฟิล์มถูกบ่มและ
อนุญาตที่จะเติบโตเป็นเวลา 7 วัน ระหว่างที่ฟิล์มพัฒนา
( ดูรูปเพิ่มเติมไฟล์ 1 S2 ) ไฟฟ้าสถิตไบโอฟิล์ม
แล้วเก็บเกี่ยวโดยการหยุดชะงักทางผ่าน
ซ้ำ pipetting เพื่อถอดฟิล์ม ตามด้วย
vortexing ภายในหลอดรูปกรวย . อาณานิคมไบโอฟิล์มถูก
อยู่ใน 1.5-ml หลอด 1 มิลลิลิตรของ HV อดตายกลาง
กับคีมหมัน vortexed แล้วเขย่าที่ 180 rpm
1 H ที่ 42 ° C ปล่อยเซลล์สำหรับการชุบ ส่วนผสมของ h53 เหมือนกัน
h98 วัฒนธรรมและของเหลวยังเหลือที่ตัว
180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 7 วัน เป็นชุดควบคุมลบ ตัวอย่างสำหรับแต่ละ
สภาพถูกล้างสามครั้งกับ HV อดตายกลาง ,
resuspended ใน HV อดอาหารและชุบบน HV CA กับยูราซิล
เมื่อเลือกหน้าจอ forh53 andh98 prototrophic revertants
และ HV ypc ของท่านรวมได้นับ บริสุทธิ์และ culturesof h53 h98 รวมแต่ละเงื่อนไขเป็น
ควบคุมลบ ผสมพันธุ์ ชุบบน HV CA กลาง
โดยไม่ยูราซิลก็รวมอยู่ในการทดลองควบคุมธรรมชาติ

การยูราซิล prototrophy
( แม้ว่านี้อาจเป็นยีน pyre2 ไม่กลายพันธุ์
ใน h53 / h98 แต่ถูกลบหมด ) หรือการมี
ของอุราความเครียด ไม่พบโคโลนีใด
ของเงื่อนไขเหล่านี้ การโอนความถี่ คำนวณโดยการหารจำนวน

อาณานิคม ( CFU ) เป็นหน่วยต่อมิลลิลิตรใน selective medium ( HV CA กับยูราซิล ) แต่ละชุด โดยเลียนแบบ

นับโคโลนีที่เฉลี่ยรวม ( cfu / ml ใน HV ypc ของท่านปานกลาง )