Experiment 2: nest hygieneSixty wea

Experiment 2: nest hygiene
Sixty weaver ants (30 ants per colony) were collected from
within the nest. Half of the ants from each colony had their
venom gland blocked with nail varnish and half had a control
treatment on the pronotal spines, for a total of 30 replicates per
treatment. One hundred twenty leaf-cutting ant workers (40
ants per colony) were collected from the outer surface of the
fungal crop. The ants from each colony were divided evenly
into the four blockage treatments as follows: (1) varnish
applied to the pronotal spines as a control, (2) metapleural
gland blocked, (3) venom gland blocked, or (4) both venom
and metapleural glands blocked, with a total of 30 replicates
per treatment. Each ant was placed in a pot with a 10-mm2
section of either the silk nest material of weaver ants or the
fungal garden of leaf-cutting ants, fromtheir original nest, and
balls of cotton wool moistened with water and sucrose solution
at 26 °C and 80 % RH. Thirty further 10 mm2 sections of
nest material were set up identically for each species, except
no ant was placed in the pot (Fig. S2). The nest substrate was
monitored for 15 days for the appearance of any foreign
fungus and death of the fungal crop. If a worker died during
the experiment, then it was replaced with an identically treated
worker.
To identify the fungi that developed in the leaf-cutting ant
trials, three representative samples of each fungal morphotype
(based on external morphology, spore structure, and color)
were isolated on malt extract agar plates at 30 °C until the
fungi produced conidia, and then stored at 4 °C. DNA was
extracted from the samples by adding 200 μl of 5 % Chelex
solution (in 10 mM Tris buffer) and 0.05 g of 0.1 mm silica
beads to approximately 0.05 g of the sample fungus and
placed in a QIAGEN TissueLyser BeadBeater for 4 min at
50 oscillations/s. Samples were then incubated at 90 °C before
being centrifuged for 30 min at 4 °C. Supernatant from the
samples was cleaned with OneStep-96 Polymerase Chain
Reaction (PCR) Inhibitor Removal Kit (Zymo Research) prior
to PCR amplification of the internal transcribed spacer regions
1 and 2 with the primers ITS1 and ITS4 (Henry et al. 2000;
Foley et al. 2012). PCR products were sequenced and fungi
were identified by BLASTn searches of the resulting

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดลองที่ 2: รังสุขอนามัยนกจาบอกหกมด (มด 30 ต่ออาณานิคม) ได้รวบรวมจากภายในรัง ครึ่งหนึ่งของมดจากแต่ละโคโลนีมีการต่อมพิษถูกบล็อก ด้วยเล็บวานิช และครึ่งหนึ่งมีการควบคุมบำบัด spines pronotal จำนวน 30 เหมือนกับต่อรักษา หนึ่งร้อยยี่สิบใบตัดมดงาน (40มดต่ออาณานิคม) ได้รวบรวมจากผิวภายนอกพืชเชื้อรา มดจากแต่ละโคโลนีได้แบ่งเท่า ๆ กันในการรักษาอุดตันสี่ดัง: วานิช (1)ใช้กับ pronotal spines เป็นตัวควบคุม metapleural (2)ต่อมที่ถูกบล็อก บล็อกต่อมพิษ (3) หรือ (4) พิษทั้งและต่อม metapleural ถูกบล็อค มีทั้งหมดเหมือนกับ 30ต่อการรักษา มดแต่ละถูกวางลงในหม้อพร้อมกับ 10-มม 2 ได้ภายส่วนใดวัสดุรังไหมของช่างทอผ้ามดหรือสวนใบไม้ตัดมด รังเดิม fromtheir เชื้อรา และลูกผ้าขนสัตว์ผ้าฝ้าย moistened ด้วยโซลูชั่นน้ำและซูโครสที่ 26 ° C และ 80% RH สามสิบเพิ่มเติม 10 มม 2 ได้ภายส่วนของวัสดุรังตั้งเหมือนกันสำหรับแต่ละชนิด ยกเว้นมดไม่ถูกวางลงในหม้อ (ฟิก S2) มีพื้นผิวรังตรวจสอบวันที่ 15 สำหรับการปรากฏของต่างชาติเชื้อราและตายของพืชเชื้อรา ถ้าผู้ปฏิบัติงานที่เสียชีวิตในระหว่างการทดลอง แล้วก็ถูกแทนที่ ด้วยการบำบัดเหมือนกันผู้ปฏิบัติงานการระบุเชื้อราที่พัฒนาในมดตัดใบไม้ทดลอง ตัวอย่างตัวแทนสามของ morphotype แต่ละเชื้อรา(ตามสัณฐานวิทยาภายนอก โครงสร้างสปอร์ และสี)ได้แยกต่างหากบนแผ่น agar ของมอลต์สกัดที่ 30 ° C จนถึงการเชื้อราผลิต conidia และจัดเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ดีเอ็นเอได้สกัดจากตัวอย่าง โดยการเพิ่ม μl 200% 5 Chelexโซลูชั่น (ใน 10 มม.ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์) และ 0.05 g ของซิลิก้า 0.1 มม.ลูกปัดกับเชื้อราตัวอย่างประมาณ 0.05 กรัม และวางใน TissueLyser BeadBeater QIAGEN ใน 4 นาทีที่ตัวอย่าง 50 แกว่ง/s ได้ถูก incubated ที่ 90 ° C ก่อนแล้วการ centrifuged ใน 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatant จากการตัวอย่างทำความสะอาด ด้วยโซ่พอลิเมอเรส OneStep 96ก่อนชุดกำจัดสารยับยั้ง (Zymo วิจัย) ปฏิกิริยา (PCR)การขยาย PCR ของภูมิภาคเป็นตัวเว้นวรรคทับภายใน1 และ 2 กับไพรเมอร์ ITS1 และ ITS4 (เฮนรี่ et al. 2000Foley et al. 2012) มีการเรียงลำดับผลิตภัณฑ์ PCR และเชื้อราด้วยผลการค้นหา BLASTn

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดลองที่ 2:
สุขอนามัยรังหกสิบมดทอผ้า(30 มดต่ออาณานิคม)
ที่ถูกเก็บรวบรวมจากภายในรัง ครึ่งหนึ่งของมดจากแต่ละกลุ่มได้ของพวกเขาต่อมพิษที่ถูกปิดกั้นด้วยน้ำมันเคลือบเงาเล็บและอีกครึ่งหนึ่งมีการควบคุมการรักษาในเงี่ยงpronotal สำหรับจำนวน 30 ซ้ำต่อการรักษา หนึ่งร้อยยี่สิบใบตัดแรงงานมด (40 มดต่ออาณานิคม) ที่ถูกเก็บรวบรวมจากพื้นผิวด้านนอกของพืชจากเชื้อรา มดที่ได้จากแต่ละกลุ่มถูกแบ่งออกเท่า ๆ กันเข้าไปในสี่การรักษาอุดตันดังต่อไปนี้(1) วานิชนำไปใช้กับเงี่ยงpronotal เป็นตัวควบคุม (2) metapleural ต่อมบล็อก (3) ต่อมพิษที่ถูกปิดกั้นหรือ (4) ทั้งพิษและต่อม metapleural บล็อกที่มีจำนวน 30 ซ้ำต่อการรักษา มดแต่ละถูกวางไว้ในหม้อที่มี 10 mm2 ส่วนของทั้งวัสดุรังไหมของมดผู้ประกอบหรือสวนเชื้อรามดใบตัด fromtheir รังเดิมและลูกสำลีชุบน้ำและการแก้ไขปัญหาน้ำตาลซูโครส26 ° ซีและ 80% RH สามสิบอีก 10 mm2 ในส่วนของวัสดุรังถูกตั้งขึ้นเหมือนกันสำหรับแต่ละชนิดยกเว้นมดไม่ถูกนำมาวางในหม้อ(รูป. S2) สารตั้งต้นรังได้รับการตรวจสอบเป็นเวลา 15 วันสำหรับการปรากฏตัวของต่างประเทศใด ๆ เชื้อราและการตายของพืชจากเชื้อรา หากคนงานเสียชีวิตในระหว่างการทดลองแล้วมันถูกแทนที่ด้วยการได้รับการปฏิบัติเหมือนคนงาน. เพื่อระบุเชื้อราที่พัฒนาในใบตัดมดทดลองสามตัวอย่างที่เป็นตัวแทนของแต่ละ morphotype เชื้อรา (ขึ้นอยู่กับลักษณะทางสัณฐานวิทยาภายนอกโครงสร้างสปอร์และสี ) ที่แยกบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อสารสกัดจากมอลต์ที่ 30 ° C จนเชื้อราสปอร์ที่ผลิตและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ4 องศาเซลเซียส ดีเอ็นเอที่สกัดจากตัวอย่างโดยการเพิ่ม 200 ไมโครลิตร 5% Chelex การแก้ปัญหา (10 บัฟเฟอร์มิลลิทริส) และ 0.05 กรัม 0.1 มมซิลิกาลูกปัดประมาณ0.05 กรัมของเชื้อราตัวอย่างและวางไว้ในQIAGEN TissueLyser BeadBeater 4 นาทีที่50 แนบแน่น / วินาที ตัวอย่างถูกบ่มแล้วที่ 90 ° C ก่อนที่จะถูกปั่นเป็นเวลา30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ใสจากกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการทำความสะอาดด้วย OneStep-96 ลูกโซ่โพลิเมอร์ปฏิกิริยา(PCR) ยับยั้งการกำจัด Kit (Zymo วิจัย) ก่อนที่จะขยายPCR ของคัดลอกภายในภูมิภาค spacer 1 และ 2 ด้วยไพรเมอร์ ITS1 และ ITS4 (เฮนรี่ et al, 2000;. โฟลลี่ย์ et al. 2012) ผลิตภัณฑ์ PCR มีลำดับขั้นตอนและเชื้อราโดยระบุว่าการค้นหาที่กล่าวหาของที่เกิดขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทดลองที่ 2 : รังสุขอนามัย
หกสิบ วีเวอร์ มด ( 30 มดต่ออาณานิคม ) จากการสัมภาษณ์
ภายในรัง ครึ่งหนึ่งของมดจากแต่ละกลุ่มมี
พิษต่อมถูกปิดกั้นด้วยการทาเล็บ และครึ่งหนึ่งมีการควบคุม
รักษาบนหนาม pronotal รวมทั้งหมด 30 นาทีต่อ
รักษา หนึ่งร้อยยี่สิบใบตัดคนงานมด ( 40
มดต่ออาณานิคม ) ถูกเก็บจากพื้นผิวด้านนอกของ
เชื้อราในพืช มดจากแต่ละกลุ่มถูกแบ่งอย่างเท่าเทียมกัน
เข้าสี่จุก การรักษา ( 1 ) ทา
ใช้หนาม pronotal เป็นตัวควบคุม ( 2 ) metapleural
ต่อมบล็อก ( 3 ) พิษต่อมบล็อก หรือ ( 4 ) และต่อมพิษ
metapleural บล็อก มีทั้งหมด 30 นาที
ต่อ การรักษา แต่ละมดถูกวางไว้ในหม้อที่มี 10-mm2
ส่วนของผ้าไหมทอรังวัสดุของมดหรือ
สวนราของใบตัดมด จากเดิมรังและ
ลูกสำลีชุ่มด้วยน้ำและสารละลายซูโครส
ที่ 26 ° C และความชื้นสัมพัทธ์ 80 เปอร์เซ็นต์ . 30 ต่อ 10 แน่นส่วน
รังวัสดุตั้งเหมือนกันสำหรับแต่ละชนิด ยกเว้น
ไม่มีมดถูกวางในหม้อ ( รูป S2 ) รัง ( คือ
การตรวจสอบ 15 วัน สำหรับการปรากฏตัวของ ต่างประเทศ
เชื้อราและความตายของพืช เชื้อรา ถ้าคนงานเสียชีวิตระหว่าง
การทดลอง แล้วมันถูกแทนที่ด้วยเหมือนกัน

รับคนงาน ระบุเชื้อราที่พัฒนาขึ้นในการตัดใบทดลองมด
3 ตัวแทน ตัวอย่างของแต่ละชนิด morphotype
( ขึ้นอยู่กับลักษณะโครงสร้างภายนอก สปอร์ และ สี )
แยก malt extract agar ในจานที่ 30 ° C จนกระทั่ง
เชื้อราผลิต conidia และเก็บที่อุณหภูมิ 4 องศา สกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่าง
โดยเพิ่ม 200 μผมของโซลูชั่น chelex
5 % ( ในบัฟเฟอร์โดย 10 มม. ) และ 0.05 กรัม 0.1 มิลลิเมตรซิลิกา
ลูกปัดประมาณ 0.05 กรัม ตัวอย่างเชื้อรา
วางไว้ใน beadbeater tissuelyser เร็ง 4 นาทีที่ 50 วัด
/ Sตัวอย่างที่บ่มที่อุณหภูมิ 90 องศา C ก่อนแล้ว
ถูกระดับ 30 นาที ที่อุณหภูมิ 4 องศา สูงจากตัวอย่างสะอาดด้วย

onestep-96 Polymerase Chain reaction ( PCR ) ชุดกำจัดการใช้ zymo วิจัยก่อน
PCR เพื่อการสื่อสารภายในภูมิภาคและ spacer
1 และ 2 ด้วยไพรเมอร์ its1 its4 ( และ เฮนรี่ et al . 2000 ;
Foley et al . 2012 ) ผลิตภัณฑ์ PCR เป็นลำดับและเชื้อรา
กลุ่ม blastn ค้นหาของที่เกิดขึ้น