To construct a system in which the

To construct a system in which the genes present on these constructs would be expressed in
an E. coli strain in the absence of the λDE3 lysogen, a native E. coli promoter (uvrA) was cloned
into each of these constructs using preexisting BglII and XbaI restriction enzyme sites from
their respective pET28b multicloning regions. The cloned promoter DNA was engineered with
these restriction enzyme sites, and was constructed from two synthetic oligonucleotides that
were annealed and digested accordingly (Table 2). This strategy directly added the native
E. coli promoter, displacing the existing T7 promoter region. The newly constructed vectors
were named pCRC01UVRA, pCRC02UVRA, and pCRC03UVRA, according to the notation
introduced in the above paragraph. Verification of expression was performed by SDS-PAGE
analysis of the protein from EPI300 E. coli containing pCRC03UVRA as well as
phenotypic assays.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สร้างระบบจะแสดงยีนที่อยู่ในโครงสร้างเหล่านี้ในสายพันธุ์ใน lysogen λDE3 โปรโมเตอร์ภาษา E. coli (uvrA) ของ E. coli ถูกโคลนในแต่ละโครงสร้างเหล่านี้ใช้ไซต์การเอนไซม์จำกัดอิง BglII และ XbaI จากขอบเขตของตนตามลำดับ pET28b multicloning ดีเอ็นเอโคลนโปรโมเตอร์ถูกออกแบบทางวิศวกรรมด้วยเว็บไซต์เหล่านี้เอนไซม์จำกัด และถูกสร้างขึ้นจากสอง oligonucleotides สังเคราะห์ที่annealed และเจ่าตามลำดับ (ตารางที่ 2) กลยุทธ์นี้เพิ่มพื้นเมืองโดยตรงโปรโมเตอร์ e. coli ฎพยัคฆ์ภูมิภาคโปรโมเตอร์ T7 อยู่ เวกเตอร์เพิ่งสร้างใหม่มีชื่อว่า pCRC01UVRA, pCRC02UVRA และ pCRC03UVRA ตามสัญลักษณ์แนะนำในย่อหน้าข้างต้น ทำการตรวจสอบนิพจน์ โดย SDS-หน้าการวิเคราะห์โปรตีนจาก EPI300 E. coli ที่ประกอบด้วย pCRC03UVRA เป็นassays ไทป์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อสร้างระบบที่ยีนอยู่บนโครงสร้างเหล่านี้จะได้รับการแสดงใน
สายพันธุ์เชื้อ E. coli ในกรณีที่ไม่มีλDE3 lysogen พื้นเมือง E. coli ก่อการ (uvrA) เป็นโคลน
ในแต่ละโครงสร้างเหล่านี้โดยใช้มาก่อนและ BglII XbaI เว็บไซต์เอนไซม์ จำกัด จาก
ภูมิภาค multicloning pET28b ของตน ดีเอ็นเอก่อการโคลนถูกออกแบบมากับ
เว็บไซต์เอนไซม์ จำกัด เหล่านี้และถูกสร้างขึ้นจากสอง oligonucleotides สังเคราะห์ที่
ได้รับการอบและย่อยตาม (ตารางที่ 2) กลยุทธ์นี้โดยตรงเพิ่มพื้นเมือง
อี โปรโมเตอร์ coli แทนที่ภูมิภาคโปรโมเตอร์ T7 ที่มีอยู่ เวกเตอร์ที่เพิ่งสร้าง
ชื่อ pCRC01UVRA, pCRC02UVRA และ pCRC03UVRA ตามสัญกรณ์
นำมาใช้ในย่อหน้าข้างต้น การตรวจสอบในการแสดงออกได้ดำเนินการโดยวิธี SDS-PAGE
วิเคราะห์โปรตีนจากเชื้อ E. coli EPI300 มี pCRC03UVRA เช่นเดียวกับ
การตรวจฟีโนไทป์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สร้างระบบซึ่งในยีนที่อยู่บนโครงสร้างเหล่านี้จะแสดงออกใน E . coli
เป็นสายพันธุ์ในการขาดงานของλ DE3 lysogen การพื้นเมือง , E . coli ( uvra ) ถูกโคลน
ในแต่ละโครงสร้างเหล่านี้ใช้อยู่ bglii xbai เอนไซม์ และเว็บไซต์ของตนจาก
pet28b multicloning ภูมิภาค การโคลนดีเอ็นเอถูกออกแบบด้วย
เอนไซม์เหล่านี้เว็บไซต์และถูกสร้างขึ้นจากสองที่คือ โอลิโกนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์
อบและย่อยตามลําดับ ( ตารางที่ 2 ) กลยุทธ์นี้โดยตรงเพิ่มพื้นเมือง
E . coli ที่โปรโมเตอร์แทนที่ที่มีอยู่การ * * 3 ) การสร้างใหม่เวกเตอร์
ชื่อ pcrc01uvra pcrc02uvra , และ pcrc03uvra ตามสัญลักษณ์
แนะนำในย่อหน้าข้างต้นการตรวจสอบการแสดงออกโดยใช้การวิเคราะห์เอนไซม์
ของโปรตีนจาก epi300 E . coli ที่มี pcrc03uvra เช่นเดียวกับ
ฟีโนไทป์ ) .