Assay for AGEs formation inhibitory

Assay for AGEs formation inhibitory activity
The assay for the ability of the fractions and
flavonoids to inhibit the glucose-mediated protein
glycation and the development of fluorescent AGEs was
performed [21]. Each fraction or flavonoid was dissolved
in DMSO. The reaction mixtures, containing 400 µg bovine
serum albumin (BSA; Waco Pure Chemical Industries,
Osaka, Japan), 200 mM glucose, 10 µl of test sample
solution or DMSO and 50 mM phosphate buffer (pH
7.4) to a total volume of 500 µl, were incubated at
60 ÌC for 30 h. A blank, which contained the protein
and glucose but no test sample, was kept at 4 ÌC
until measurement. After cooling, aliquots of 250 µl
were transferred to 1.5 ml plastic tubes, then, 25 µl of
100% (w/v) trichloroacetic acid (Waco Pure Chemical
Industries, Osaka, Japan) were added to each tube and
stirred. The supernatant was removed after centrifugation
(15,000 rpm) at 4 ÌC for 4 min and the AGEs-BSA
precipitate was dissolved with 1 ml of alkaline phosphatebuffered
saline (pH 10). Fluorescence of these solutions
was measured on a spectrophotometer at the excitation
and emission maxima of 360 and 460 nm, respectively,
against the unincubated blank. Percent inhibition of
AGEs formation by each sample was calculated as
[1-(fluorescence of the sample solution/fluorescence of
the control solution)] x 100%. Measurements were
performed in triplicate, and the concentration required
for a 50% inhibition (IC50) of the fluorescence intensity
was determined graphically

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบสำหรับวัยผู้แต่งลิปกลอสไขกิจกรรมทดสอบสำหรับความสามารถของส่วนตัว และflavonoids ยับยั้งโปรตีนกลูโคส mediatedglycation และพัฒนาวัยเรืองแสงดำเนินการ [21] แต่ละส่วนหรือ flavonoid เป็นส่วนยุบใน DMSO น้ำยาผสมปฏิกิริยา ประกอบด้วยวัว 400 ไมโครกรัมเป็นเครื่องserum albumin (บีเอสเอ Waco เพียวเคมีอุตสาหกรรมโอซาก้า ญี่ปุ่น), กลูโคส 200 mM, 10 µl ของตัวอย่างทดสอบโซลูชัน หรือ DMSO และ 50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.4) กับปริมาตรรวมของ 500 µl ถูก incubated ที่ÌC 60 สำหรับ 30 h ช่องว่าง ซึ่งประกอบด้วยโปรตีนและกลูโคสแต่ตัวอย่างทดสอบ ถูกเก็บไว้ที่ ÌC ที่ 4จนวัด หลังจากทำความเย็น aliquots 250 µlได้โอนย้ายไป 1.5 ml พลาสติกหลอด แล้ว 25 µl ของ(Waco เพียวเคมีกรด trichloroacetic 100% (w/v)อุตสาหกรรม โอซาก้า ญี่ปุ่น) ถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละหลอด และกวน Supernatant ถูกเอาออกหลังจาก centrifugation(15000 rpm) ที่ ÌC 4 4 นาทีและวัยบีเอสเอprecipitate ได้ส่วนยุบ ด้วย 1 ml ของด่าง phosphatebufferedน้ำเกลือ (pH 10) Fluorescence โซลูชั่นเหล่านี้มีวัดบนเครื่องทดสอบกรดด่างที่การในการกระตุ้นและมลพิษแมกของ 360 และ 460 nm ตามลำดับกับว่างเปล่า unincubated เปอร์เซ็นต์ยับยั้งยุคการก่อตัว โดยแต่ละตัวอย่างคำนวณเป็น[1- (fluorescence ของ โซลูชัน/fluorescence ตัวอย่างของควบคุมโซลูชัน)] x 100% วัดได้ดำเนินการใน triplicate และความเข้มข้นที่ต้องการในการยับยั้ง 50% (IC50) ความเข้ม fluorescenceกำหนดภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Assay กิจกรรม AGEs ยับยั้งการก่อตัว
ทดสอบสำหรับความสามารถของเศษส่วนและ
flavonoids ในการยับยั้งโปรตีนกลูโคสพึ่ง
glycation และการพัฒนาทุกวัยเรืองแสงได้รับการ
ดำเนินการ [21] แต่ละส่วนหรือ flavonoid ถูกกลืนหายไป
ใน DMSO ผสมปฏิกิริยาที่มี 400 ไมโครกรัมวัว
อัลบูมิซีรั่ม (BSA; วาโกบริสุทธิ์อุตสาหกรรมเคมี,
โอซาก้า, ญี่ปุ่น), กลูโคส 200 มม, 10 ไมโครลิตรของตัวอย่างทดสอบ
วิธีการแก้ปัญหาหรือ DMSO และ 50 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH
7.4) จะมีปริมาณรวม 500 ไมโครลิตรถูกบ่มที่อุณหภูมิ
60 IC 30 ชั่วโมง ที่ว่างเปล่าที่มีโปรตีน
และน้ำตาลกลูโคส แต่ไม่มีตัวอย่างการทดสอบได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 4 IC
จนกระทั่งวัด หลังจากที่ระบายความร้อนส่วนลงตัว 250 ไมโครลิตร
ถูกย้ายไป 1.5 มลหลอดพลาสติกแล้ว 25 ไมโครลิตรของ
100% (w / v) กรดไตรคลอโร (วาโกเพียวเคมี
อุตสาหกรรม, โอซาก้า, ญี่ปุ่น) ถูกเพิ่มเข้าไปในท่อแต่ละคนและ
กวน ใสถูกลบออกหลังจากการหมุนเหวี่ยง
(15,000 รอบต่อนาที) ที่ 4 IC 4 นาทีและยุค-BSA
ตะกอนถูกกลืนหายไปกับ 1 มิลลิลิตรของอัลคาไลน์ phosphatebuffered
น้ำเกลือ (pH 10) การเรืองแสงของการแก้ปัญหาเหล่านี้
ได้รับการวัดการดูดกลืนแสงที่กระตุ้น
และสูงสุดปล่อย 360 และ 460 นาโนเมตรตามลำดับ
กับว่างเปล่า unincubated ร้อยละของการยับยั้ง
การก่อตัว AGEs โดยแต่ละตัวอย่างที่คำนวณได้เป็น
[1 (เรืองแสงของสารละลายตัวอย่าง / การเรืองแสงของ
โซลูชั่นการควบคุม)] x 100% วัดได้รับการ
ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าและความเข้มข้นที่จำเป็น
สำหรับการยับยั้ง 50% (IC50) ของเรืองแสงความเข้ม
ก็ตัดสินใจที่ชัดเจน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับอายุการใช้ยับยั้งการท
( สำหรับความสามารถของเศษส่วนและ
flavonoids ยับยั้งกลูโคสระดับโปรตีนไกลเคชั่น
และการพัฒนาของวัยเรืองแสง
) [ 21 ] แต่ละส่วนหรือฟลาโวนอยด์ถูกละลาย
ใน DMSO . ปฏิกิริยาผสมบรรจุ 400 กรัมโปรตีนอัลบูมินµ
เอ ; Waco เพียว เคมีอุตสาหกรรม
โอซาก้า , ญี่ปุ่น ) , กลูโคส 200 มม.10 µ l ตัวอย่างทดสอบหรือ DMSO
สารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4 50 mm
) ปริมาณรวม 500 µลิตรอุณหภูมิ
60 Ìเป็นเวลา 30 ชั่วโมง ว่าง ซึ่งมีโปรตีนและกลูโคส แต่ไม่มีตัวอย่างทดสอบ
ถูกเก็บไว้ที่ 4 Ì C
จนถึงวัด หลังจากเย็นเฉยๆ 250 µ L
โอน 1.5 ml พลาสติกหลอดแล้ว 25 µ l
100 % ( w / v ) กรดไตรคลอโรอะซิติก ( Waco เพียว
เคมีอุตสาหกรรมโอซาก้า , ญี่ปุ่น ) ถูกเพิ่มไปยังแต่ละหลอด
กวน . และน่านถูกลบออกหลังจากปั่น
( 15 , 000 รอบต่อนาที ) ที่ 4 Ì C เป็นเวลา 4 นาที และอายุตะกอนละลาย BSA
1 มิลลิลิตร phosphatebuffered ด่าง ( pH
( 10 ) การเรืองแสงของโซลูชั่นเหล่านี้
วัดบนวัสดุที่กระตุ้น
และการปล่อยแม็กซิม่าของ 360 และ 460 nm ตามลำดับ
กับช่องว่าง unincubated . เปอร์เซนต์ของการก่อตัว
วัย โดยแต่ละตัวอย่างคํานวณ
[ 1 - ( เรืองแสงของโซลูชันตัวอย่างของโซลูชั่นควบคุมการ /
) ] X 100% การวัดกำลัง
ดำเนินการทั้งสามใบ และต้องใช้สมาธิ
เป็น 50% ( ic50 การยับยั้ง ) ของการกำหนดความเข้ม
กราฟิก