variability of the wild cranes will provide important ref-
erence data to assist in the effective genetic management of
the captive cranes in Japan.
Materials and methods
Sampling and DNA analyses
Blood samples were collected from captured juvenile
cranes within the framework of the annual banding project
operated by the Ministry of the Environment normally
from June to July, when juveniles are flightless (at the age
of approximately 1.5–3.0 months) and remain with their
parents around the nests. The locations where the juveniles
were captured were recorded. In this study, we used 80
blood samples collected from 1995 to 2006 across the
entire breeding range in eastern Hokkaido (approximately
70 % of them were collected between 1999 and 2005).
Because an adult pair bond usually lasts for years until the
partner dies, and because a breeding pair shows strong
fidelity to the nesting territory (Masatomi 2000), all the
samples were derived from different nest sites to avoid the
inclusion of closely related individuals. The collected
samples were grouped to Nemuro (n = 42), Kushiro
(n = 24), and Tokachi (n = 14), according to the geo-
graphic locations of the juvenile capture sites (Fig. 1). This
allows us to assess the genetic differences between Kushiro
and the other regions where other genetically distinct
groups may have persisted when the Kushiro group was
rediscovered. A few nests were found in northern Hok-
kaido in recent years (Masatomi et al. 2004), but their
number is too small to be considered a functional popula-
tion; thus, we did not include them in this study.
The blood samples were preserved in 100 % ethanol and
stored at -20 C until DNA extraction. DNA was extrac-
ted using the QIAamp DNA mini kit (Qiagen, Tokyo,
Japan) following the manufacturer’s protocol. Eighteen
microsatellite loci were used for multilocus genotyping
(Gj-M8, Gj-M11a, Gj-M13, Gj-M15, Gj-M34, Gj-M40,
and Gj-M48b in Hasegawa et al. 2000; Gram6, Gram11,
Gram17, Gram20, Gram22, Gram24, Gram25, Gram32a,
Gram41, Gram42, and Gram45 in Jones et al. 2010). PCR
condition and cycling profile for each locus followed
Hasegawa et al. (2000) and Jones et al. (2010). The PCR
products were analyzed on an ABI PRISM
3100 genetic
analyzer (Applied Biosystems, Foster City, California) and
the genotyping data were collected using the program
GeneScan (Applied Biosystems). We sequenced a part of
the mtDNA control region (418 bp) to visualize the spatial
distribution of mtDNA haplotypes in Hokkaido. PCR
amplification and sequencing were performed following
Hasegawa et al. (1999).
Data analyses
The observed number of alleles per locus (A) and both
expected heterozygosity (H E ) and observed heterozygosity
(H O ) were calculated using the program GENEPOP 3.4
(Raymond and Rousset 1995). Allelic richness (AR), which
was corrected by the smallest sample size, was calculated
by the program FSTAT ver. 2.9.3.2 (Goudet 2001). Link-
age disequilibrium between all pairs of loci and Hardy–
Weinberg equilibrium for each locus in each group and
overall were assessed by the program GENEPOP 3.4,
where the sequential Bonferroni correction was used for
multiple tests (Rice 1989). The program MICRO-
CHECKER (Van Oosterhout et al. 2004) was used to check
the occurrence of null alleles and large allele dropout.
We assessed the genetic structure by several approaches.
First, the degree of genetic differentiation between each
pair of groups was evaluated by the fixation index, F ST (h;
Weir and Cockerham 1984), and tested by the log-likeli-
hood G-test using the program FSTAT ver. 2.9.3.2. Overall
F ST was estimated by the analysis of molecular variance
and tested for a significant difference from zero by 10,100
permutations using the program Arlequin ver. 3.11 (Ex-
coffier et al. 2005). Differences in the genetic diversity (i.e.
H E and AR) among the three groups were assessed by the
analysis of variance (ANOVA), where the loci served as
error. Prior to ANOVA, the data were confirmed not to
violate the assumption of normality and equality of vari-
ance by Shapilo–Wilk test and Bartlett’s test, respectively.
To test for a pattern of isolation by distance as a potential
cause of the genetic structure, we conducted spatial auto-
correlation analysis. We used Nason’s estimator of kinship
coefficient (F ij ; Loiselle et al. 1995) as a measure of pair-
wise genetic similarity between individuals. Negative val-
ues are possible and are interpreted as individuals being
less similar than expected by chance. We calculated the
average F ij between pairs of individuals, whose geographic
separation falls within a specified distance interval, by the
program SPAGeDi ver. 1.4 (Hardy and Vekemans 2002).
The seven distance intervals were defined by maintaining
similar numbers of pairwise comparisons. The significance
of the average kinship coefficients in each distance interval
was tested by permuting the spatial locations of individuals
10,000 times, which is equivalent to a Mantel test (Hardy
and Vekemans 2002), using the program SPAGeDi ver.
1.4. We repeated the analysis using another two distance
intervals (five and ten intervals) to ensure consistency of
the results. If a pattern of isolation by distance is present,
the average kinship coefficient will decrease as the distance
interval increases. Finally, Bayesian clustering analysis
implemented in the program STRUCTURE ver. 2.3.3
(Pritchard et al. 2000; Falush et al. 2003) was used to infer
the genetic structure without an a priori definition ofgroups. We used the admixture model with correlated
allele frequencies. Five independent runs were performed
for each K value (number of clusters) from 1 to 6 with
200,000 MCMC steps and 100,000 burn-in steps. We
determined the most likely number of clusters based on the
average log-likelihood value across the 5 runs.
จะทำให้ความแปรผันของเครนป่าสำคัญอ้างอิง-erence ข้อมูลเพื่อช่วยในการจัดการทางพันธุกรรมที่มีประสิทธิภาพของเชลยเครนในญี่ปุ่นวัสดุและวิธีการวิเคราะห์ดีเอ็นเอและการสุ่มตัวอย่างตัวอย่างเลือดที่เก็บจากเยาวชนจับเครนภายในกรอบของโครงการ banding ประจำปีดำเนินการ โดยกระทรวงสิ่งแวดล้อมปกติเดือนมิถุนายน-กรกฎาคม เมื่อ juveniles flightless (อายุประมาณ 1.5 – 3.0 เดือน) และยังคงอยู่กับพวกเขาผู้ปกครองสถานรัง สถานที่ juvenilesถูกจับถูกบันทึก ในการศึกษานี้ เราใช้ 80เลือดตัวอย่างที่เก็บรวบรวมจาก 1995 2006 ระหว่างการพันธุ์ทั้งช่วงในฮอกไกโดตะวันออก (โดยประมาณ70% ของพวกเขาถูกเก็บรวบรวมระหว่าง 1999 และ 2005)เนื่องจากมีพันธะคู่ผู้ใหญ่ปกติเวลาปีจนการหุ้นส่วนตาย และคู่ผสมพันธุ์แสดงแข็งแรงfidelity อาณาเขตซ้อน (Masatomi 2000), ทั้งหมดตัวอย่างได้มาจากเว็บไซต์รังอื่นเพื่อหลีกเลี่ยงการรวมของบุคคลที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิด การรวบรวมตัวอย่างถูกจัดกลุ่มให้เนะมุโระ (n = 42), คุชิโร(n = 24), และโอะ (n = 14), ตาม geo -ตำแหน่งกราฟิกของอเมริกาจับเยาวชน (Fig. 1) นี้ช่วยให้เราสามารถประเมินความแตกต่างทางพันธุกรรมระหว่างคุชิโรและภูมิภาคอื่น ๆ ที่แปลงพันธุกรรมอื่น ๆ ทั้งหมดกลุ่มนี้อาจมี persisted เมื่อกลุ่มคุชิโรrediscovered บางรังพบในภาคเหนือหก-kaido ในปีที่ผ่านมา (Masatomi et al. 2004), แต่พวกเขาหมายเลขมีขนาดเล็กเกินไปจะถือว่าเป็นหน้าที่ popula-สเตรชัน ดังนั้น เราไม่มีพวกเขาในการศึกษานี้มีเก็บตัวอย่างเลือดในเอทานอล 100% และเก็บไว้ที่ -20 C จนสกัดดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอถูก extrac-เท็ดใช้ QIAamp ดีเอ็นเอขนาดเล็กชุดสินค้า (Qiagen โตเกียวญี่ปุ่น) ต่อไปนี้ของโพรโทคอลการ เอททีนใช้ชนิด microsatellite loci สำหรับ multilocus genotyping(Gj-M8, Gj M11a, Gj M13, Gj M15, Gj M34, Gj-บีเอ็ม M40และ Gj-M48b ใน Hasegawa et al. 2000 Gram6, Gram11Gram17, Gram20, Gram22, Gram24, Gram25, Gram32aGram41, Gram42 และ Gram45 ใน Jones et al. 2010) PCRตามเงื่อนไขและ profile ขี่จักรยานในแต่ละโลกัสโพลHasegawa et al. (2000) และ al. et โจนส์ (2010) การ PCRมีวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์บนปริซึมเป็นลักชัวรี่พันธุกรรม 3100วิเคราะห์ (Biosystems ใช้ ฟอสเตอร์ซิตี้ แคลิฟอร์เนีย) และการ genotyping ได้รวบรวมข้อมูลโดยใช้โปรแกรมGeneScan (Biosystems ใช้) เราเรียงลำดับเป็นส่วนหนึ่งของพื้นที่ควบคุม mtDNA (418 bp) เห็นภาพพื้นที่กระจายของ mtDNA haplotypes ในฮอกไกโด PCRamplification และจัดลำดับได้ดำเนินการดังต่อไปนี้Hasegawa et al. (1999)วิเคราะห์ข้อมูลสังเกตจำนวน alleles ต่อโลกัสโพล (A) และทั้งสองคาด heterozygosity (H E) และสังเกต heterozygosity(H O) คำนวณได้โดยใช้โปรแกรม GENEPOP 3.4(เรย์มอนด์และ Rousset 1995) ร่ำรวย allelic (AR), ซึ่งถูกแก้ไข โดยขนาดตัวอย่างเล็กที่สุด คำนวณโดยโปรแกรม FSTAT ไม่ 2.9.3.2 (Goudet 2001) เชื่อมโยง-disequilibrium อายุระหว่างคู่ของ loci Hardy –Weinberg สมดุลสำหรับแต่ละโลกัสโพลในแต่ละกลุ่ม และโดยรวม ที่ประเมิน โดยโปรแกรม GENEPOP 3.4ที่ใช้สำหรับการแก้ไข Bonferroni ตามลำดับหลายการทดสอบ (ข้าว 1989) โปรแกรม MICRO-ตัวตรวจสอบ (Van Oosterhout et al. 2004) ถูกใช้เพื่อตรวจสอบการเกิดขึ้นของ null alleles และ allele ใหญ่เป็นถอนเราประเมินโครงสร้างทางพันธุกรรม โดยวิธีการต่าง ๆแรก ระดับของการสร้างความแตกต่างทางพันธุกรรมระหว่างแต่ละคู่ของกลุ่มถูกประเมิน โดยดัชนี fixation เซนต์ F (hฝายและ Cockerham 1984), และทดสอบ โดยล็อก-likeli -ควันใช้ไม่ FSTAT ของโปรแกรม 2.9.3.2 ทดสอบ G โดยรวมเซนต์ F ถูกประเมิน โดยการวิเคราะห์ผลต่างของโมเลกุลและทดสอบสำหรับ significant แตกต่างจากศูนย์โดย 10,100ใช้ไม่ Arlequin ของโปรแกรม 3.11 (อดีต-สับcoffier et al. 2005) ส่วนต่างในความหลากหลายทางพันธุกรรม (เช่นH E และ AR) ระหว่างกลุ่ม 3 ถูกประเมินโดยการวิเคราะห์ของผลต่าง (การวิเคราะห์ความแปรปรวน), loci ทำหน้าที่เป็นที่ข้อผิดพลาด ก่อนการวิเคราะห์ความแปรปรวน ข้อมูลไม่ confirmed ไปขัดต่อสมมติฐานของ normality และความเท่าเทียมกันของวารี-ance Shapilo – Wilk ทดสอบและทดสอบในบาร์ตเลตของ ตามลำดับการทดสอบแบบแยกโดยระยะทางเป็นเป็นไปทำให้โครงสร้างทางพันธุกรรม เราดำเนินการพื้นที่อัตโนมัติ-การวิเคราะห์สหสัมพันธ์ เราใช้ประมาณของ Nason ของญาติcoefficient (ij แค F Loiselle et al. 1995) เป็นวัดคู่-ปัญญาคล้ายคลึงทางพันธุกรรมระหว่างบุคคล ค่าลบ-ues เป็นไปได้ และการแปลความหมายเป็นบุคคลน้อยเหมือนกันกว่าที่คาดไว้โดยบังเอิญ เราได้ij แค F ค่าเฉลี่ยระหว่างคู่ของบุคคล ที่ทางภูมิศาสตร์แยกอยู่ภายในช่วงระยะ specified โดยการโปรแกรมไม่ SPAGeDi 1.4 (Hardy และ Vekemans 2002)ช่วงระยะเจ็ดถูก defined โดยรักษาจำนวนเปรียบเทียบแพร์ไวส์คล้าย Significanceของ coefficients ญาติเฉลี่ยในแต่ละช่วงระยะทดสอบ โดย permuting ตำแหน่งพื้นที่ของแต่ละบุคคล10000 ครั้ง ซึ่งจะเท่ากับการทดสอบหิ้ง (Hardyและ Vekemans 2002), ใช้ไม่ SPAGeDi โปรแกรม1.4. เราซ้ำการวิเคราะห์ใช้อีกระยะที่สองช่วงเวลา (five และช่วงสิบ) เพื่อตรวจสอบความสอดคล้องของผลลัพธ์ ถ้ารูปแบบแยกโดยระยะทางอยู่coefficient ญาติเฉลี่ยจะลดลงเป็นระยะช่วงเพิ่มขึ้น สุดท้าย ทฤษฎีระบบคลัสเตอร์การวิเคราะห์ดำเนินการในการโปรแกรมโครงสร้างไม่ 2.3.3(Pritchard et al. 2000 Falush et al. 2003) ใช้ในการอนุมานโครงสร้างทางพันธุกรรม โดยมี ofgroups definition priori ความ เราใช้แบบผลิตมี correlatedคลื่นความถี่ของ allele ทำงานอิสระห้าดำเนินสำหรับ K แต่ละค่า (หมายเลขของคลัสเตอร์) จาก 1 ถึง 6 มีตอน MCMC 200000 และ 100000 เขียนในขั้นตอน เราdetermined the most likely number of clusters based on theaverage log-likelihood value across the 5 runs.
การแปล กรุณารอสักครู่..

ความแปรปรวนของเครนป่าจะให้ ref- สำคัญข้อมูลการตั้งเพื่อช่วยในการจัดการทางพันธุกรรมที่มีประสิทธิภาพของรถเครนเชลยในประเทศญี่ปุ่น. วัสดุและวิธีการชักตัวอย่างและวิเคราะห์ดีเอ็นเอเก็บตัวอย่างเลือดจากเด็กและเยาวชนที่ถูกจับรถเครนภายในกรอบของโครงการแถบประจำปีของการดำเนินการโดยกระทรวงสิ่งแวดล้อมได้ตามปกติตั้งแต่เดือนมิถุนายนถึงเดือนกรกฎาคมเมื่อหนุ่มสาวจะ fl ightless (อายุประมาณ1.5-3.0 เดือน) และพวกเขายังคงอยู่กับพ่อแม่ทั่วรัง สถานที่ที่หนุ่มสาวถูกจับถูกบันทึกไว้ ในการศึกษานี้เราใช้ 80 ตัวอย่างเลือดที่เก็บรวบรวม 1995-2006 ในช่วงผสมพันธุ์ทั้งในภาคตะวันออกของฮอกไกโด(ประมาณ70% ของพวกเขาได้ถูกเก็บรวบรวมระหว่างปี 1999 และ 2005). เพราะพันธบัตรคู่ผู้ใหญ่มักจะเป็นเวลานานหลายปีจนพันธมิตรตายและเนื่องจากคู่ผสมพันธุ์แสดงให้เห็นถึงความแข็งแกร่งdelity สายไปยังดินแดนรัง (Masatomi 2000) ทั้งหมดที่กลุ่มตัวอย่างได้มาจากเว็บไซต์รังที่แตกต่างกันเพื่อหลีกเลี่ยงการรวมของบุคคลที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิด ที่เก็บรวบรวมตัวอย่างที่ถูกจัดกลุ่มเพื่อ Nemuro (n = 42) Kushiro (n = 24) และ Tokachi (n = 14) ตามภูมิศาสตร์สถานที่กราฟิกของเว็บไซต์จับเด็กและเยาวชน(รูปที่ 1). นี้ช่วยให้เราสามารถประเมินความแตกต่างทางพันธุกรรมระหว่าง Kushiro และภูมิภาคอื่น ๆ อื่น ๆ ที่แตกต่างทางพันธุกรรมกลุ่มอาจจะมีการยืนยันเมื่อกลุ่มKushiro ถูกค้นพบ รังไม่กี่ที่พบในภาคเหนือของ Hok- Kaido ในปีที่ผ่านมา แต่พวกเขา (Masatomi et al, 2004). จำนวนที่มีขนาดเล็กเกินไปที่จะได้รับการพิจารณาประชากรการทำงานการ; ดังนั้นเราไม่ได้รวมไว้ในการศึกษาครั้งนี้. กลุ่มตัวอย่างเลือดถูกเก็บรักษาไว้ในเอทานอล 100% และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ-20 องศาเซลเซียสจนถึงการสกัดดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอ extrac- เท็ดโดยใช้ดีเอ็นเอ QIAamp มินิชุด (Qiagen โตเกียวญี่ปุ่น) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลของผู้ผลิต สิบแปดตำแหน่งไมโครถูกนำมาใช้สำหรับ genotyping Multilocus (GJ-M8, GJ-M11a, GJ-M13, GJ-M15, GJ-M34, GJ-M40, และ GJ-M48b ในเซกาวา et al, 2000;. Gram6, Gram11, Gram17, Gram20, Gram22, Gram24, Gram25, Gram32a, Gram41, Gram42 และ Gram45 ในโจนส์ et al. 2010) PCR สภาพและขี่จักรยานโปรไฟเลอสำหรับแต่ละสถานที่ตามเซกาวา et al, (2000) และโจนส์และอัล (2010) PCR ผลิตภัณฑ์วิเคราะห์บน PRISM ABI? 3100 ทางพันธุกรรมวิเคราะห์(Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) และข้อมูลgenotyping ถูกเก็บรวบรวมโดยใช้โปรแกรมGenescan (Applied Biosystems) เราติดใจส่วนหนึ่งของภูมิภาคควบคุม mtDNA (418 bp) เพื่อเห็นภาพเชิงพื้นที่การกระจายของmtDNA haplotypes ในฮอกไกโด PCR ไอออนบวกและสาย ampli ลำดับได้ดำเนินการดังต่อไปนี้เซกาวาet al, (1999). ข้อมูลการวิเคราะห์จำนวนสังเกตของอัลลีลต่อสถานที่ (A) และทั้งสอง heterozygosity คาด (HE) และสังเกต heterozygosity (HO) ได้รับการคำนวณโดยใช้โปรแกรม GENEPOP 3.4 (เรย์มอนด์และ Rousset 1995) ความร่ำรวย allelic (AR) ซึ่งได้รับการแก้ไขโดยขนาดของกลุ่มตัวอย่างที่เล็กที่สุดที่คำนวณโดยโปรแกรมfstat เวอร์ชั่น 2.9.3.2 (Goudet 2001) Link- สมดุลอายุระหว่างคู่ทุกตำแหน่งและ Hardy- สมดุล Weinberg สำหรับแต่ละสถานที่ในแต่ละกลุ่มและโดยรวมได้รับการประเมินโดยโปรแกรมGENEPOP 3.4 ที่แก้ไขลำดับ Bonferroni ที่ใช้สำหรับการทดสอบหลายๆ (ข้าว 1989) โปรแกรมไมโครCHECKER (Van Oosterhout et al. 2004) ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบการเกิดขึ้นของอัลลีลโมฆะและการออกกลางคันอัลลีลที่มีขนาดใหญ่. เราประเมินโครงสร้างทางพันธุกรรมโดยหลายวิธี. ครั้งแรกที่ระดับของความแตกต่างทางพันธุกรรมระหว่างแต่ละคู่ของกลุ่มถูกประเมินโดยดัชนีไฟ xation ที่ F ST (h; เวียร์และคอร์เกอร์แฮม 1984) และการทดสอบโดยการเข้าสู่ระบบ likeli- เครื่องดูดควัน G-การทดสอบการใช้โปรแกรม fstat เวอร์ชั่น 2.9.3.2 โดยรวมF ST ได้รับการประเมินโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนโมเลกุลและทดสอบสำหรับความแตกต่างที่มีนัยสำคัญลาดเทจากศูนย์โดย10,100 พีชคณิตใช้โปรแกรม Arlequin เวอร์ชั่น 3.11 (อดีตCOF ไฟเอ้อ et al. 2005) ความแตกต่างในความหลากหลายทางพันธุกรรม (เช่นฯพณฯ และ AR) ในสามกลุ่มได้รับการประเมินโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน(ANOVA) ที่ตำแหน่งทำหน้าที่เป็นข้อผิดพลาด ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ข้อมูลเป็นนักโทษสาย rmed ที่จะไม่ละเมิดข้อสันนิษฐานของภาวะปกติและความเท่าเทียมกันของตัวแปรance ทดสอบ Shapilo-Wilk และทดสอบ Bartlett ตามลำดับ. ในการทดสอบสำหรับรูปแบบของการแยกของระยะเป็นศักยภาพสาเหตุของโครงสร้างทางพันธุกรรมเราดำเนินการเชิงพื้นที่อัตโนมัติการวิเคราะห์ความสัมพันธ์ เราใช้ประมาณการ Nason ของเครือญาติสายCOEF เพียงพอ (F เจ. Loiselle et al, 1995) เป็นตัวชี้วัดของ pair- คล้ายคลึงกันทางพันธุกรรมที่ชาญฉลาดระหว่างบุคคล val- เชิงลบUES ที่เป็นไปได้และมีการตีความว่าเป็นบุคคลที่เป็นที่คล้ายกันน้อยกว่าที่คาดโดยบังเอิญ เราคำนวณเจ F เฉลี่ยระหว่างคู่ของบุคคลที่มีทางภูมิศาสตร์แยกตกภายในระบุไว้เอ็ดช่วงระยะโดยโปรแกรมSPAGeDi เวอร์ชั่น 1.4 (ฮาร์ดี้และ Vekemans 2002). เจ็ดช่วงระยะถูกนิยามโดยการรักษาตัวเลขที่คล้ายกันของการเปรียบเทียบจากจำนวน นัยนัยสำคัญสายของเครือญาติ COEF เฉลี่ย cients ไฟในแต่ละช่วงระยะได้รับการทดสอบโดยpermuting สถานอวกาศของบุคคล10,000 ครั้งซึ่งจะเทียบเท่ากับการทดสอบ Mantel (ฮาร์ดี้และVekemans 2002) โดยใช้โปรแกรม SPAGeDi Ver. 1.4 เราซ้ำแล้วซ้ำอีกโดยใช้การวิเคราะห์อีกสองระยะช่วงเวลา (FI ได้สิบช่วงเวลา) เพื่อให้สอดคล้องของผลการค้นหา หากรูปแบบของการแยกจากระยะไกลเป็นปัจจุบันเครือญาติเฉลี่ย COEF เพียงพอไฟจะลดลงเป็นระยะทางช่วงเวลาที่เพิ่มขึ้น ในที่สุดการวิเคราะห์การจัดกลุ่มแบบเบย์ดำเนินการในโครงการโครงสร้างเวอร์ชั่น 2.3.3 (Pritchard et al, 2000;.. Falush et al, 2003) ถูกนำมาใช้เพื่อสรุปโครงสร้างทางพันธุกรรมโดยไม่ต้องเบื้องต้นเดอไฟnition ofgroups เราใช้รูปแบบผสมที่มีความสัมพันธ์ความถี่อัลลีล ห้าวิ่งอิสระได้ดำเนินการสำหรับแต่ละค่า K (จำนวนกลุ่ม) 1-6 กับ 200,000 ขั้นตอน MCMC และ 100,000 เผาไหม้ในขั้นตอน เรากำหนดจำนวนส่วนใหญ่ของกลุ่มขึ้นอยู่กับค่าความน่าจะเข้าสู่ระบบเฉลี่ยทั่ว5 วิ่ง
การแปล กรุณารอสักครู่..
