AbstractAnti-Mullerian hormone (AMH

Abstract
Anti-Mullerian hormone (AMH) is involved in the regression of the Mullerian ducts in mammalian and avian male embryos as well as the right oviduct in avian female embryos. AMH is expressed by granulosa cells of adult hens and mammals and is thought to be involved in the recruitment of follicles from the primordial pool as well as in regulating follicle-stimulating hormone (FSH) sensitivity. We have shown that AMH expression by the granulosa layer of hens is high in the small follicles but decreased in the larger hierarchical follicles. The decline in expression of AMH with increasing follicle size is associated with an increase in expression of the receptor for FSH (FSHR) in the granulosa layer, although the mechanism is not known. In this study, we tested whether vitamin D (1,25-dihydroxyvitamin D3) regulates expression of AMH mRNA in granulosa cells of the hen. Granulosa cell layers were removed from follicles 3-5 mm and 6-8 mm in size, dispersed, and cultured for 24 h in Medium 199 + 5% fetal bovine serum (n = 7). The medium was removed and replaced with Medium 199 + 0.1% bovine serum albumin and vitamin D (at doses of 0, 10, and 100 nM) and cultured for 24 h. Cells were harvested and RNA was extracted for use in quantitative PCR. Parallel 96-well plates were set up to examine cell proliferation. AMH and FSHR mRNA expressions were evaluated, and all values were standardized to 18S reactions. There was a significant (P < 0.05) dose-related decrease in the expression of AMH mRNA in granulosa cells of 3- to 5-mm and 6- to 8-mm follicles in response to vitamin D. Additionally, FSHR mRNA and cell proliferation were significantly (P < 0.05) increased by vitamin D in both groups. Western blot analysis for the vitamin D receptor (VDR) showed doublet bands at the expected sizes (58 and 60 kDa) in protein isolated from the chicken granulosa layer. Immunohistochemistry was used to identify VDR within the follicle, and it predominantly localized to the nucleus of granulosa cells. VDR mRNA expression in the granulosa layer, relative to follicle development, was increased (n = 4; P < 0.05) with follicle development, with greatest expression in the F1 follicle. There was no evidence for expression (mRNA or protein) of the calcium-binding protein, calbindin (CALB1), in the ovary or granulosa layer. Overall, these results suggest that vitamin D regulates AMH expression, and thereby may influence follicle selection in the hen.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อฮอร์โมนต่อต้าน mullerian (AMH) มีส่วนร่วมในการถดถอยของท่อMüllerianในตัวอ่อนชายเลี้ยงลูกด้วยนมและนกเช่นเดียวกับท่อนำไข่ที่ถูกต้องในตัวอ่อนเพศหญิงนก
AMH จะแสดงโดย granulosa เซลล์ของผู้ใหญ่และไก่เลี้ยงลูกด้วยนมและคิดว่าจะมีส่วนร่วมในการจัดหาของรูขุมขนจากสระว่ายน้ำดั่งเดิมเช่นเดียวกับในการควบคุมรูขุมขนกระตุ้นฮอร์โมน (FSH) ความไว เราได้แสดงให้เห็นว่าการแสดงออก AMH โดยชั้น granulosa ของไก่สูงในรูขุมขนเล็ก ๆ แต่ลดลงในรูขุมขนที่มีขนาดใหญ่เป็นลำดับชั้น การลดลงของการแสดงออกของ AMH กับการเพิ่มขนาดรูขุมขนมีความเกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของตัวรับสำหรับ FSH (FSHR) ในชั้น granulosa แม้ว่ากลไกที่ไม่เป็นที่รู้จัก ในการศึกษานี้เราได้ทดสอบว่าวิตามินดี (1,25-dihydroxyvitamin D3) ควบคุมการแสดงออกของยีนในเซลล์ AMH granulosa ของไก่ ชั้นเซลล์ granulosa ออกจากรูขุม 3-5 มมมม 6-8 ในขนาดที่แพร่ระบาดและการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในการขนาดกลาง 199 + 5% ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ (n = 7) สื่อที่ถูกลบออกไปและแทนที่ด้วยขนาดกลาง 199 + 0.1% ในซีรั่มอัลบูมิวัวและวิตามินดี (ในปริมาณ 0, 10, และ 100 นาโนเมตร) และเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมง เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวและ RNA ถูกสกัดเพื่อใช้ในการ PCR เชิงปริมาณ แผ่น 96 หลุมขนานถูกตั้งขึ้นเพื่อตรวจสอบการเพิ่มจำนวนเซลล์ AMH และการแสดงออกของ mRNA FSHR ได้รับการประเมินและค่ามาตรฐานอยู่ที่ปฏิกิริยา 18S มีอย่างมีนัยสำคัญ (P <0.05) ลดลงในการแสดงออกของ AMH ของ mRNA ยาที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ granulosa ของ 3 ถึง 5 มิลลิเมตรและ 6 เพื่อรูขุม 8 มมในการตอบสนองวิตามินดีนอกจากนี้ FSHR mRNA และการเพิ่มจำนวนเซลล์ อย่างมีนัยสำคัญ (P <0.05) เพิ่มขึ้นวิตามินดีในทั้งสองกลุ่ม การวิเคราะห์ดวงตะวันสำหรับรับวิตามินดี (VDR) พบคู่วงดนตรีที่มีขนาดที่คาดหวัง (58 และ 60 กิโลดาลตัน) โปรตีนที่แยกได้จากชั้น granulosa ไก่ immunohistochemistry ถูกใช้ในการระบุ VDR ภายในรูขุมขนและภาษาท้องถิ่นส่วนใหญ่จะนิวเคลียสของเซลล์ granulosa การแสดงออก VDR mRNA ในชั้น granulosa ที่สัมพันธ์กับการพัฒนารูขุมขนได้รับการเพิ่มขึ้น (n = 4; P <0.05) กับการพัฒนารูขุมขนด้วยการแสดงออกที่ยิ่งใหญ่ที่สุดในรูขุมขน F1 มีหลักฐานในการแสดงออกไม่ได้ (mRNA หรือโปรตีน) ของโปรตีนแคลเซียมผูกพัน calbindin (CALB1) ในชั้นรังไข่หรือ granulosa โดยรวม, ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าวิตามินดีควบคุมการแสดงออก AMH และจึงอาจมีผลต่อการเลือกในรูขุมขนไก่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม
ฮอร์โมนต่อต้าน mullerian ( AMH ) ที่เกี่ยวข้องกับการถดถอยของท่อและ mullerian ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมนกตัวอ่อนเพศชายเป็นท่อนำไข่ ในตัวหญิงนกAMH แสดงโดยธรรมชาติของนกและสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเซลล์ผู้ใหญ่ และเป็นความคิดที่จะมีส่วนร่วมในการสรรหาของรูขุมขนจากสระ ประถม รวมทั้งกำกับดูแลนานนม ( FSH ) ไว เราได้แสดงให้เห็นว่า AMH การแสดงออกโดยธรรมชาติชั้นของแม่ไก่ที่มีรูขุมขนขนาดเล็กแต่ขนาดใหญ่ลดลงในชั้นรูขุมขนลดลงในการแสดงออกของ AMH เพิ่มขนาดรูขุมขนมีความเกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของตัวรับ FSH ( สำหรับ fshr ) ในธรรมชาติชั้น แม้ว่ากลไกที่ไม่รู้จัก ในการศึกษาครั้งนี้ได้ทดสอบว่าวิตามิน D ( 1,25-dihydroxyvitamin D3 ) ควบคุมการแสดงออกของยีนในเซลล์ AMH ธรรมชาติของไก่ธรรมชาติของเซลล์ชั้นออกจากรูขุมขน 3-5 มม. และ 6-8 มม. ในขนาด การกระจายตัวและเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในกลาง 199 5% ทารกในครรภ์วัว เซรั่ม ( n = 7 ) สื่อถูกถอดออกและแทนที่ด้วยขนาดกลาง 199 0.1% อัลบูมิน ซีรั่มวัว และวิตามิน D ( ที่ปริมาณรังสี 0 , 10 และ 100 nm ) และเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงเก็บ RNA ถูกสกัดเพื่อใช้ในเทคนิคเชิงปริมาณขนาน 96 ดีจานตั้งเพื่อตรวจสอบเซลล์ proliferation . และการแสดงออกของ fshr AMH ประเมิน และค่าทั้งหมดเป็นมาตรฐานเพื่อปฏิกิริยาพบ . มีอย่างมีนัยสำคัญ ( p < 0.05 ) ปริมาณรังสีที่ลดลงในการแสดงออกของยีนในเซลล์ของ AMH ธรรมชาติ 3 - 5-mm และ 6 - 8-mm รูขุมขนในการตอบสนองกับวิตามินดี นอกจากนี้fshr mRNA และเซลล์ proliferation อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( P < 0.05 ) เพิ่มวิตามิน D ในทั้งสองกลุ่ม การวิเคราะห์ Western blot สำหรับวิตามินดีรีเซพเตอร์ ( ว่ายน้ำ ) พบแถบดับเลตที่คาดว่าขนาด 58 และ 60 กิโลดาลตัน ) โปรตีนที่แยกได้จากไก่ธรรมชาติชั้น หลอดที่ใช้เพื่อระบุ . ภายในรูขุมขน ,และมันเด่นถิ่นธรรมชาติกับนิวเคลียสของเซลล์ คํานํา การแสดงออกในธรรมชาติของชั้น เทียบกับการพัฒนา follicle เพิ่มขึ้น ( n = 4 ; p < 0.05 ) กับการพัฒนารูขุมขนด้วยการแสดงออกมากที่สุดใน F1 รูขุมขน . ไม่มีหลักฐานการแสดงออก ( ยีนหรือโปรตีน ) ของ แคลเซียม โปรตีน calbindin , ( calb1 ) ในรังไข่หรือชั้นธรรมชาติ . โดยรวมผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าวิตามินดีควบคุม AMH การแสดงออกและงบอาจจะมีอิทธิพลต่อการ follicle ในไก่