Methods
Sampling sites
All sampling sites were located on King George Island
(62°020S 58°210W/62.033°S 58.35°W), the major island of
the Shetland South Archipelago (Figure 1). A total of 34
soil and 14 water samples were collected in January of
2009. The temperature and altitude of the sampling sites
varied from 0 to 11.9°C and from 0 to 182 m, respectively.
For soil samples, sterile 50 ml tubes were filled
with soil, sealed and stored at −20°C. For water samples,
200–500 ml of water were collected from terrestrial
sources and processed in situ using the 55-PLUS™
MONITOR system (Millipore, Billerica, MA, USA,) with
cellulose filter for yeasts and molds, as specified by the
manufacturer. The dishes were then stored at 4°C until
processing.
Sample processing, yeast cultivation and isolation
Five grams of each soil sample was suspended in 5 ml
of sterile water by vigorous agitation on a vortex for
10 min. Following decantation of the coarse particulate
material, 200 μl of the suspension was seeded onto
plates containing YM medium (0.3% yeast extract,
0.3% malt extract, 0.5% peptone) supplemented with
2% glucose and 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm).
The plates were incubated at 4, 10, 15 and 22°C. Duplicate
of water sampling dishes were incubated at 4
and 10°C. The plates were incubated for 3 months and
periodically inspected for colony development. Once a
colony became visible, it was immediately transferred
to fresh YM-cm plates and incubated at the same
temperature as the source-plate. The procedure was
repeated for each soil sample to maximize the number
of isolates.
วิธี
ฝีมืออเมริกา
ไซต์สุ่มตัวอย่างทั้งหมดที่อยู่บนเกาะคิงจอร์จ
(62 ° 020S 58 ° 210W/62.033 ° S 58.35 ° W), เกาะหลักของ
เชทแลนด์ใต้หมู่เกาะ (รูปที่ 1) จำนวน 34
14 ตัวอย่างน้ำและดินถูกเก็บรวบรวมในเดือนมกราคมของ
2009 อุณหภูมิและระดับความสูงของอเมริกาสุ่ม
แตกต่างจาก 0 ถึง 11.9° C และ 0 เมตร 182 ตามลำดับ.
ตัวอย่างดิน 50 ml ใส่หลอดเต็มไป
กับดิน ปิดสนิท และเก็บไว้ที่ −20 องศาเซลเซียส สำหรับตัวอย่างน้ำ,
200-500 ml ของน้ำที่ถูกเก็บรวบรวมจากภาคพื้นดิน
แหล่ง และประมวลผลในซิใช้ 55 - PLUS ™
ตรวจสอบระบบ (มาก Billerica, MA สหรัฐอเมริกา,) ด้วย
กรองเซลลูโลส yeasts และแม่พิมพ์ งาน
ผู้ผลิต อาหารถูกเก็บไว้ที่ 4° C จนถึงแล้ว
ประมวลผล
ตัวอย่างประมวลผล ยีสต์และการแยก
5 กรัมของตัวอย่างดินแต่ละถูกระงับใน 5 ml
น้ำผ่านการฆ่าเชื้อโดยอาการกังวลต่อคึกคักใน vortex สำหรับ
10 นาที ต่อ decantation ของหยาบฝุ่น
วัสดุ μl 200 ของการระงับได้ seeded บน
ประกอบด้วย YM ปานกลาง (0.3% ยีสต์ extract,
0.3% มอลต์สกัด peptone 0.5%) เสริมด้วยแผ่น
2% กลูโคสและ 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm)
แผ่นถูก incubated ที่ 4, 10, 15 และ 22 องศาเซลเซียส ซ้ำ
น้ำ อาหารสุ่มตัวอย่างที่ incubated ที่ 4
และ 10 องศาเซลเซียส แผ่นก็ incubated 3 เดือน และ
เป็นระยะ ๆ ตรวจสอบพัฒนาอาณานิคม ครั้ง
อาณานิคมกลายเป็นมองเห็นได้ ถูกโอนย้ายทันที
สด YM-ซม.แผ่น และ incubated ที่เดียว
อุณหภูมิเป็นแผ่นต้นฉบับ ขั้นตอนถูก
ทำซ้ำสำหรับแต่ละตัวอย่างดินเพื่อเพิ่มหมายเลข
ของแยก
การแปล กรุณารอสักครู่..
วิธีการ
สถานที่เก็บตัวอย่าง
ทุกตัวอย่างเว็บไซต์ที่ตั้งอยู่บนเกาะกษัตริย์จอร์จ
(62 ° 58 ° 020S 210W / 62.033 ° S 58.35 ° W) ซึ่งเป็นเกาะที่สำคัญของ
หมู่เกาะเช็ตใต้ (รูปที่ 1) ทั้งหมด 34
ดินและ 14 ตัวอย่างน้ำที่เก็บรวบรวมในเดือนมกราคม
2009 อุณหภูมิและระดับความสูงของเว็บไซต์การสุ่มตัวอย่าง
ที่แตกต่างกัน 0-11.9 องศาเซลเซียสและ 0-182 เมตรตามลำดับ
สำหรับตัวอย่างดินผ่านการฆ่าเชื้อขนาด 50 ml หลอดที่เต็มไป
ด้วยดินปิดผนึกและเก็บไว้ที่ -20 ° C สำหรับตัวอย่างน้ำ
200-500 มิลลิลิตรของน้ำที่ถูกเก็บรวบรวมมาจากทั่วโลก
แหล่งที่มาและการดำเนินการในแหล่งกำเนิดโดยใช้ 55-PLUS ™
System Monitor (คบิลเลริกา, MA, สหรัฐอเมริกา) ที่มี
ตัวกรองเซลลูโลสสำหรับยีสต์และเชื้อรา, ตามที่ระบุโดย
ผู้ผลิต . แล้วอาหารที่ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจน
การประมวลผลการประมวลผลตัวอย่างการเพาะปลูกและการแยกยีสต์ห้ากรัมของตัวอย่างดินแต่ละคนถูกระงับใน 5 ml ของน้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยความปั่นป่วนในพลังน้ำวนสำหรับ10 นาที ต่อไปนี้ decantation ของอนุภาคหยาบวัสดุ 200 ไมโครลิตรของระบบกันสะเทือนที่ได้รับเมล็ดลงบนแผ่นที่มีขนาดกลาง YM (สารสกัดจากยีสต์ 0.3% สารสกัดจากมอลต์ 0.3%, 0.5% เปปโตน) ที่เติมน้ำตาล 2% และ 100 ไมโครกรัม / chloramphenicol มล (YM-เซนติเมตร ) แผ่นถูกบ่มวันที่ 4, 10, 15 และ 22 องศาเซลเซียส ที่ซ้ำกันของอาหารที่เก็บตัวอย่างน้ำไปบ่มที่อุณหภูมิ 4 และ 10 ° C แผ่นถูกบ่มเป็นเวลา 3 เดือนและระยะการตรวจสอบสำหรับการพัฒนาอาณานิคม ครั้งหนึ่งเคยเป็นอาณานิคมกลายเป็นมองเห็นได้มันก็ถูกย้ายทันทีที่แผ่น YM ซมสดและบ่มที่อุณหภูมิเดียวกันอุณหภูมิเป็นแหล่งแผ่น ขั้นตอนที่ได้รับการทำซ้ำสำหรับตัวอย่างดินแต่ละคนที่จะเพิ่มจำนวนของเชื้อ
การแปล กรุณารอสักครู่..
วิธีการสุ่มตัวอย่างเว็บไซต์เว็บไซต์
ทั้งหมดตั้งอยู่บนเกาะคิงจอร์จ
( 62 / 020s 58 องศา 210w / 62.033 / s 58.35 ° W ) , เกาะหลักของหมู่เกาะเช็ตใต้
( รูปที่ 1 ) ทั้งหมด 34
ดินและ 14 เก็บตัวอย่างในเดือนมกราคม
2009 อุณหภูมิและความสูงของตัวอย่างเว็บไซต์
หลากหลายจาก 0 ถึง 11.9 องศา C และจาก 0 ถึง 182 เมตร ตามลำดับ
ตัวอย่างดินปลอดเชื้อ 50 มล. หลอดเต็ม
กับดิน , ปิดผนึกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 20 ° C −ตัวอย่างน้ำ
200 – 500 มิลลิลิตร น้ำที่เก็บจากแหล่งบก
และประมวลผลในแหล่งกำเนิดที่ใช้ 55-plus ™
ตรวจสอบระบบ ( มิลลิ , โตเกียว , MA , USA ) กับ
เซลลูโลสกรองยีสต์และรา ตามที่ระบุไว้โดย
ผู้ผลิต อาหาร แล้วเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C จนกระทั่ง
การประมวลผล การประมวลผล
ตัวอย่าง ,การแยกยีสต์
5 กรัมของดินแต่ละตัวอย่างถูกระงับใน 5 มล. ของน้ำหมัน โดยการกวน
เข้มแข็งใน Vortex สำหรับ 10 นาทีต่อไปนี้ decantation ของวัสดุอนุภาค
หยาบ , 200 μ L ของช่วงล่างได้เมล็ดลงบนจานที่มีขนาดกลาง (
) 0.3% ยีสต์สกัด , สารสกัดจากมอลต์
0.3 เปอร์เซ็นต์ 0.5 % ตามลำดับ ) ที่เติมกลูโคส 2
% และ 100 μ g / ml คลอแรมเฟนิคอล ( YM ซม. )
จานถูกบ่มที่ 4 , 10 , 15 และ 22 องศา ซ้ำ
น้ำตัวอย่างอาหารที่อุณหภูมิ 4
10 องศา จานถูกบ่มเป็นเวลา 3 เดือนและ
ตรวจสอบเป็นระยะ ๆเพื่อการพัฒนาประเทศอาณานิคม เมื่อ
อาณานิคมกลายเป็นมองเห็นได้ทันทีโอน
สด YM ซม. แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิเดียวกัน
เป็นแหล่งแผ่น ขั้นตอนคือ
ซ้ำสำหรับแต่ละตัวอย่างดินเพื่อเพิ่มจำนวนของสายพันธุ์
.
การแปล กรุณารอสักครู่..