Construction and expression of modi

Construction and expression of modified PRRSV GP5 encoding GP5 protein targeted to
different subcellular compartments
Pimfhun Pannacha1
, Phenjun Mekvichitsaeng2
, Yaowaluck Maprang Roshorm1,*
1
School of Bioresources and Technology, King Mongkut’s University of Technology Thonburi, Thailand
2Pilot plant Development and Training Institute, King Mongkut's University of Technology Thonburi (KMUTT),
Bangkok 10150 Thailand
*e-mail: [e-mail]
Abstract
Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) is the causative agent of
PRRS, the most economically important disease in swine industry worldwide including
Thailand. Due to problems associated with Modified Live Vaccine (MLV), recombinant
vaccine is being developed and tested as an alternative vaccine against PRRSV. However, the
recombinant vaccines developed so far have been relatively ineffective at inducing protective
immune responses and improvement is needed. In this study, we aim to improve the
immunogenicity of GP5-based PRRSV vaccine by employing subcellular-targeting strategy,
by which an antigen is redirected to the compartments involved in stimulation of B cells,
CD8 and CD4 T cells. The immunogen GP5, derived from ORF5 of genotype 2 PRRSV, is
designed to contain different signal sequences and thus is targeted to cytoplasm, ER,
endosome and MHC I pathway. The immunogen GP5 is vectored by DNA plasmid pTH.
Using western blot analysis, only the original GP5 and GP5 targeted to cytoplasm and ER
could be detected. Localization and immunogenicity will be next studied. This study
contributes knowledge and techniques of vaccine design and development to the vaccine
research area, which will be beneficial to further development of PRRSV vaccines.
Keywords: Subcellular targeting, PRRSV, GP5, DNA vaccine
Introduction
Porcine Respiratory and reproductive Syndrome Virus (PRRSV, PRRS
virus) is a single-stranded positive-sense RNA virus that is classified in the order
Nidovirales, family Arteriviridae and genus Arterivirus (Tummaruk, P et al. 2013;
Charerntantanakul, W 2012). PRRSV is divided into two genotypes: European (type 1) and
North American (type 2) genotype. PRRSV is the causative agent of PRRS in swine. PRRSV
infection leads to abortion in the sows and respiratory syndrome in the growing pigs (Nilubol,
D., et al. 2012; Tun, H. M et al. 2011). PRRS epidemic continuously has emerged and caused
huge economic losses worldwide including Thailand (Nilubol, D., et al. 2012; Tun, H. M et
al. 2011).
Modified live attenuated vaccine is widely used to control PRRSV infection.
However, MLV can possibly revert to virulent strain (Charerntantanakul, W 2012). Killed
viral vaccine is the safe vaccine, but it has poor immunogenicity and poor protective efficacy
against either homologous or heterologous PRRSV (Charerntantanakul, W 2012).
Recombinant vaccines against PRRSV are now being developed with the ultimate goal of
developing a safer and more effective vaccines against PRRSV. However, the recombinant
vaccines developed so far have been shown to be relatively inefficient in inducing protective
immune responses. Hence, new approaches and new technology are required to help develop
a new vaccine.
5IF
UI
"OOVBM
.FFUJOH
PG
UIF
5IBJ
4PDJFUZ
GPS
#JPUFDIOPMPHZ
BOE
*OUFSOBUJPOBM

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ก่อสร้างและการแสดงของ GP5 PRRSV แก้ไขรหัส GP5 โปรตีนช่อง subcellular ต่าง ๆPimfhun Pannacha1, Phenjun Mekvichitsaeng2, Yaowaluck Maprang Roshorm1, *1โรงเรียนทรัพยากรชีวภาพและเทคโนโลยี คิงมหาวิทยาลัยเทคโนโลยีจอมเกล้าธนบุรี ประเทศไทย2Pilot โรงงานพัฒนาและฝึกอบรม สถาบัน มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี (พระจอมฯ สำหรับ),กรุงเทพฯ 10150 ประเทศไทย* อีเมล์: [e-mail]บทคัดย่อระบบสืบพันธุ์และไวรัสโรคทางเดินหายใจ (PRRSV) porcine เป็นตัวแทนของสาเหตุการลูกดก โรคสำคัญทางเศรษฐกิจในสุกรรวมทั้งอุตสาหกรรมทั่วโลกไทย เนื่องจากปัญหาที่เกี่ยวข้องกับแก้ไข Live วัคซีน (MLV), ควบรวมวัคซีนมีการพัฒนา และทดสอบเป็นวัคซีนทางเลือกกับ PRRSV อย่างไรก็ตาม การวัคซีน recombinant ที่พัฒนาจนได้ผลค่อนข้างที่กระตุ้นให้เกิดการป้องกันการตอบสนองของภูมิคุ้มกันและการปรับปรุงจำเป็น ในการศึกษานี้ เรามุ่งมั่นที่จะปรับปรุงการimmunogenicity ขึ้น GP5 PRRSV วัคซีนโดย subcellular มีการกำหนดเป้าหมายกลยุทธ์ซึ่งมี antigen ถูกเปลี่ยนไปช่องที่เกี่ยวข้องในการกระตุ้นเซลล์ Bเซลล์ CD8 และ CD4 T Immunogen GP5 มาจาก ORF5 ของลักษณะทางพันธุกรรม 2 คือ PRRSVออกแบบให้ประกอบด้วยสัญญาณลำดับ และจึง มีการกำหนดเป้าหมายไปยังไซโทพลาซึม ERเอนโดโซม และเอ็มเอชซีฉันเดิน มี vectored immunogen GP5 โดย DNA plasmid pTHใช้ในการวิเคราะห์รอยเปื้อนตะวันตก เฉพาะเดิม GP5 และกำหนดเป้าหมายไปยังไซโทพลาซึมและ ER GP5ไม่สามารถตรวจพบ แปลและ immunogenicity จะสามารถถัดไปศึกษา การศึกษานี้ความรู้และเทคนิคการออกแบบวัคซีนและการพัฒนาวัคซีนพื้นที่ที่ทำวิจัย ซึ่งจะเป็นประโยชน์ต่อการพัฒนาในอนาคตของ PRRSV วัคซีนคำสำคัญ: Subcellular กำหนดเป้าหมาย PRRSV, GP5 วัคซีนดีเอ็นเอแนะนำPorcine ทางเดินหายใจและไวรัสอาการสืบพันธุ์ (PRRSV ลูกดกเดียวที่ควั่นบวกอย่างอาร์เอ็นเอไวรัสที่จัดตามลำดับคือไวรัส)Nidovirales ครอบครัว Arteriviridae และสกุล Arterivirus (Tummaruk, P ร้อยเอ็ด 2013Charerntantanakul, W 2012) PRRSV จะแบ่งออกเป็นสองไทป์: ยุโรป (ประเภท 1) และอเมริกาเหนือ (ประเภท 2) ลักษณะทางพันธุกรรม PRRSV เป็นตัวแทนของสาเหตุการของลูกดกในสุกร PRRSVติดเชื้อนำไปสู่การทำแท้งในลักษณะและโรคทางเดินหายใจในสุกรเจริญเติบโต (นิลุบลD. ร้อยเอ็ด 2012 ทูน H. M et al. 2011) ลูกดกระบาดอย่างต่อเนื่องมีโผล่ออกมา และเกิดทั่วโลกรวมถึงประเทศไทย (นิลุบล D. ร้อยเอ็ด 2012 สูญเสียทางเศรษฐกิจ ถุน H. M etal. 2011)อย่างกว้างขวางมีใช้วัคซีน attenuated สดแก้ไขการควบคุมติดเชื้อ PRRSVอย่างไรก็ตาม MLV สามารถอาจแปลงกลับเป็น virulent พันธุ์ (Charerntantanakul, W 2012) ฆ่าตายไวรัสวัคซีนวัคซีนปลอดภัย แต่มัน immunogenicity ต่ำและประสิทธิภาพการป้องกันดีกับเซทจะมีโครโมโซม หรือ heterologous PRRSV (Charerntantanakul, W 2012)ขณะนี้กำลังพัฒนาวัคซีน recombinant กับ PRRSV ด้วยเป้าหมายสูงสุดของการพัฒนาวัคซีนปลอดภัย และมีประสิทธิภาพมากขึ้นกับ PRRSV อย่างไรก็ตาม การควบรวมวัคซีนที่ได้รับการพัฒนาจนได้รับการแสดงจะค่อนข้างต่ำในการกระตุ้นให้เกิดการป้องกันการตอบสนองภูมิคุ้มกัน ดังนั้น ใหม่ ๆ และเทคโนโลยีจำเป็นต้องช่วยพัฒนาวัคซีนใหม่5IF UI "OOVBM FFUJOH PG UIF 5IBJ 4PDJFUZ GPS #JPUFDIOPMPHZ BOE * OUFSOBUJPOBM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การก่อสร้างและการแสดงออกของการแก้ไข PRRSV GP5 โปรตีนเข้ารหัส GP5 กำหนดเป้าหมายไปยัง
ช่อง subcellular ที่แตกต่างกัน
Pimfhun Pannacha1
, Phenjun Mekvichitsaeng2
, เยาวลักษณ์มะปราง Roshorm1 *
1
คณะทรัพยากรชีวภาพและเทคโนโลยีมหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี, ไทย
พัฒนาโรงงาน 2Pilot และสถาบันฝึกอบรมพระจอมเกล้าเจ้าคุณทหารลาดกระบัง มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี (มจ ธ )
กรุงเทพฯ 10150 ประเทศไทย
* E-mail: [e-mail]
บทคัดย่อ
Porcine เจริญพันธุ์และโรคทางเดินหายใจไวรัส (PRRSV) เป็นตัวแทนสาเหตุของ
PRRs, โรคความสำคัญทางเศรษฐกิจมากที่สุดในอุตสาหกรรมสุกร ทั่วโลกรวมทั้ง
ประเทศไทย เนื่องจากปัญหาที่เกี่ยวข้องกับการแก้ไขสดวัคซีน (MLV) recombinant
วัคซีนได้รับการพัฒนาและทดสอบเป็นวัคซีนทางเลือกกับ PRRSV อย่างไรก็ตาม
วัคซีน recombinant พัฒนาเพื่อให้ห่างไกลได้รับผลค่อนข้างที่กระตุ้นให้เกิดการป้องกัน
การตอบสนองภูมิคุ้มกันและการปรับปรุงเป็นสิ่งจำเป็น ในการศึกษานี้เรามุ่งมั่นที่จะปรับปรุง
ภูมิคุ้มกันของ GP5 ตามวัคซีน PRRSV โดยการใช้กลยุทธ์การกำหนดเป้าหมาย subcellular,
โดยที่แอนติเจนถูกเปลี่ยนเส้นทางไปช่องที่เกี่ยวข้องในการกระตุ้นของเซลล์ B,
CD8 และ CD4 T เซลล์ GP5 แอนติเจนมาจาก ORF5 ของจีโนไทป์ 2 PRRSV ถูก
ออกแบบมาเพื่อให้มีลำดับสัญญาณที่แตกต่างกันจึงมีการกำหนดเป้าหมายการพลาสซึมเอ่อ
endosome และ MHC ฉันเดิน GP5 แอนติเจนเป็นเวกเตอร์โดยดีเอ็นเอพลาสมิด PTH.
โดยใช้การวิเคราะห์ดวงตะวันเพียง GP5 เดิมและ GP5 กำหนดเป้าหมายไปยังพลาสซึมและ ER
สามารถตรวจพบได้ แปลและภูมิคุ้มกันจะมีการศึกษาต่อไป การศึกษาครั้งนี้
ก่อให้เกิดความรู้และเทคนิคของการออกแบบและพัฒนาวัคซีนที่จะฉีดวัคซีนป้องกัน
พื้นที่การวิจัยซึ่งจะเป็นประโยชน์ต่อการพัฒนาต่อไปของวัคซีน PRRSV.
คำสำคัญ: การกำหนดเป้าหมาย subcellular, PRRSV, GP5 ดีเอ็นเอวัคซีน
บทนำ
Porcine ระบบทางเดินหายใจและเชื้อไวรัสสืบพันธุ์ (PRRSV, PRRs
ไวรัส) เป็นบวกความรู้สึกไวรัส RNA สายเดี่ยวสายที่ถูกจัดให้อยู่ในลำดับที่
Nidovirales ครอบครัว Arteriviridae และสกุล Arterivirus (Tummaruk, P et al, 2013;.
Charerntantanakul, W 2012) PRRSV แบ่งออกเป็นสองสายพันธุ์: ยุโรป (ประเภท 1) และ
นอร์ทอเมริกัน (ประเภท 2) จีโนไทป์ PRRSV เป็นตัวแทนสาเหตุของ PRRs ในสุกร PRRSV
ติดเชื้อนำไปสู่การทำแท้งในแม่สุกรและโรคทางเดินหายใจในสุกร (Nilubol,
D. , et al, 2012;.. Tun เอชเอ็ม et al, 2011) PRRs การแพร่ระบาดอย่างต่อเนื่องได้โผล่ออกมาและก่อให้เกิด
ความเสียหายทางเศรษฐกิจขนาดใหญ่ทั่วโลกรวมทั้งประเทศไทย (Nilubol, D. , et al 2012;. Tun เอชเอ็มเอ
. อัล 2011).
Modified วัคซีนจางสดถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อควบคุมการติดเชื้อ PRRSV.
อย่างไรก็ตาม MLV อาจจะสามารถกลับไปใช้สายพันธุ์รุนแรง (Charerntantanakul, W 2012) ฆ่า
วัคซีนไวรัสวัคซีนที่ปลอดภัย แต่ก็มีภูมิคุ้มกันไม่ดีและความมีประสิทธิภาพในการป้องกันไม่ดี
กับทั้ง PRRSV คล้ายคลึงกันหรือ heterologous (Charerntantanakul, W 2012).
วัคซีน Recombinant กับ PRRSV อยู่ในขณะนี้ได้รับการพัฒนาโดยมีเป้าหมายสูงสุดของ
การพัฒนาวัคซีนที่ปลอดภัยและมีประสิทธิภาพมากขึ้น กับ PRRSV อย่างไรก็ตาม recombinant
วัคซีนที่พัฒนาเพื่อให้ห่างไกลได้รับการแสดงจะค่อนข้างไม่มีประสิทธิภาพในการกระตุ้นให้เกิดการป้องกัน
การตอบสนองภูมิคุ้มกัน ดังนั้นวิธีการและเทคโนโลยีใหม่ ๆ จะต้องช่วยพัฒนา
วัคซีนใหม่.
5IF ??? UI? "OOVBM? .FFUJOH? PG? UIF? 5IBJ? 4PDJFUZ? GPS? #JPUFDIOPMPHZ? BOE? * OUFSOBUJPOBM?

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โครงสร้างและการแสดงออกของโปรตีนไวรัสดัดแปลง gp5 การเข้ารหัส gp5 เป้าหมายช่องตําแหน่งภายในเซลล์ต่าง ๆpimfhun pannacha1mekvichitsaeng2 เพ็ญ ,yaowaluck มะปราง roshorm1 * , ,1คณะทรัพยากรชีวภาพและเทคโนโลยี มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี , ไทย2pilot พืชสถาบันพัฒนาและฝึกอบรม มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี ( มจธ. )กรุงเทพฯ 10150 ประเทศไทย[e-mail] * E-mail :บทคัดย่อระบบสืบพันธุ์และระบบทางเดินหายใจโรคจากไวรัส ( ไวรัส ) เป็นสาเหตุ ตัวแทนของprrs สําคัญที่สุดของโรคในสุกรอุตสาหกรรมทั่วโลกรวมถึงประเทศไทย เนื่องจากปัญหาที่เกี่ยวข้องกับวัคซีนเชื้อเป็น ( mlv ) รีคอมบิแนนท์วัคซีนที่กำลังพัฒนาและทดสอบเป็นทางเลือกวัคซีนต่อต้านไวรัส . อย่างไรก็ตามวัคซีน recombinant พัฒนาจนมีค่อนข้างไม่ได้ผลที่กระตุ้นป้องกันระบบภูมิคุ้มกันและการปรับปรุงที่จำเป็น การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อปรับปรุงสามารถ gp5 วัคซีนไวรัส โดยอาศัยพื้นฐานของตําแหน่งภายในเซลล์เป้าหมายกลยุทธ์ซึ่งแอนติเจนจะเปลี่ยนเส้นทางไปยังช่องที่เกี่ยวข้องกับการกระตุ้นของ B เซลล์และเซลล์ CD4 CD8 T . รวมทั้ง gp5 ที่ได้มาจาก orf5 ของจีโนทัยป์ 2 อาร์ คือออกแบบให้มีลำดับสัญญาณที่แตกต่างกัน จึงมีเป้าหมายเพื่อไซโตปลาสม เอ่อโครโมโซม และ MHC ฉันเดิน รวมทั้ง gp5 เป็นเวกเตอร์โดยดีเอ็นเอพลาส PTH .การวิเคราะห์โดยใช้วิธี Western blot เฉพาะ gp5 เดิมและเป้าหมาย gp5 cytoplasm เอร์สามารถตรวจพบ จำกัดและสามารถจะต่อไป ) การศึกษานี้ก่อให้เกิดความรู้และเทคนิคการออกแบบและพัฒนาวัคซีน วัคซีนพื้นที่วิจัย ซึ่งจะเป็นประโยชน์ต่อการพัฒนาวัคซีนไวรัส .คำสำคัญ : ตําแหน่งภายในเซลล์เป้าหมาย gp5 ไวรัส , วัคซีน , ดีเอ็นเอแนะนำทางเดินหายใจและการเจริญพันธุ์โรคไวรัส ( ไวรัส prrs ,ไวรัสเป็นไวรัสที่ติดทางเดียวความรู้สึก RNA จัดอยู่ในใบสั่งnidovirales arteriviridae , ครอบครัวและสกุล arterivirus ( ปัตย์ , P et al . 2013 ;charerntantanakul W 2012 ) ไวรัสจะแบ่งออกเป็นสองชนิด : ยุโรป ( แบบที่ 1 ) และอเมริกาเหนือ ( ประเภท 2 ) 24 . เป็นตัวแทนของโรงเรียน prrs ไวรัสในสุกร ไวรัสการติดเชื้อและนำไปสู่การทำแท้งในแม่สุกรต่อโรคในสุกรระยะเจริญเติบโต ( นิลอุบล ,D . , et al . 2012 ; ทุน , H . m et al . 2011 ) prrs ระบาดอย่างต่อเนื่อง และเกิดได้เกิดขึ้นเศรษฐกิจทั่วโลกรวมทั้งไทย ( ขนาดใหญ่ ) นิลอุบล , D . , et al . 2012 ; ทุน , H . M และอัล 2011 )โดยวัคซีนชนิดเชื้อเป็นใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อควบคุมการติดเชื้อไวรัส .อย่างไรก็ตาม mlv จะกลับไปเลี้ยงสายพันธุ์ ( charerntantanakul W 2012 ) ฆ่าไวรัส วัคซีน เป็นวัคซีนที่ปลอดภัย แต่ก็ยังสามารถป้องกันยากจนและประสิทธิภาพไม่ดีความคล้ายคลึงกับไวรัสหรือชนิด ( charerntantanakul W 2012 )วัคซีนต่อต้านไวรัสคอมตอนนี้ถูกพัฒนาด้วยเป้าหมายสูงสุดของการพัฒนาวัคซีนต่อต้านไวรัสที่ปลอดภัย และมีประสิทธิภาพมากขึ้น . อย่างไรก็ตาม รีคอมบิแนนท์วัคซีนที่พัฒนาขึ้นเพื่อให้ห่างไกลได้รับการแสดงที่จะค่อนข้างไม่มีประสิทธิภาพในการเหนี่ยวนำป้องกันการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน ดังนั้น แนวทางใหม่ และต้องช่วยพัฒนาเทคโนโลยีใหม่วัคซีนใหม่5ifui " oovbm ffujohpguif5ibj4pdjfuzgps # oufsobujpobm jpufdiopmphzboe * .