The reaction was performedin 20 μL,

The reaction was performed
in 20 μL, containing 10 μL of SsoAdvanced SYBR Green Supermix
(Bio-Rad), 1 μL of each primer (10 μM), 2 μL of cDNA (2.5 ng/μL) and 6 μL
of RNase/DNase-free H2O. The thermal cycling parameters were as
follows: 95 °C for 30 s, followed by 40 cycles at 95 °C for 3 s and 60 °C
for 30 s. The specificity of amplification was determined by melting
curve analysis at the end, over a temperature range between 65 and
95 °C in 0.5 °C increments. The relative fold change was calculated
using the 2−ΔΔCt calculation (Schmittgen & Livak, 2008). The expression
level for each steer was obtained from the mean of three independent
experiments.
2.3. SNP genotyping
The NCBI_ss1388116468 SNP was genotyped by the PCR-restriction
fragment length polymorphism method as described previously (Tong
et al., 2012). Using this method, 186-bp PCR fragments containing the
SNP site were amplified and HpaII-digested into 57- and 129-bp fragments
at the G allele, but not the C allele: the GG homozygotes, the CC
homozygotes and the GC heterozygotes yielded two bands (57 and
129 bp), one band (186 bp) and three bands (57, 129 and 186 bp),
respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำปฏิกิริยาใน 20 μL ประกอบด้วย 10 μL ของ SsoAdvanced SYBR Green Supermix(ไบโอ-Rad), μL 1 ของรองพื้นแต่ละ (10 ไมครอน), μL 2 ของ cDNA (2.5 ฉบับ μL) และ 6 μLของ H2O RNase DNase-ฟรี / พารามิเตอร์ความร้อนขี่จักรยานได้เป็นต่อไปนี้: 95 ° C 30 s ตาม ด้วย 40 รอบที่ 95 ° C สำหรับ 3 s และ 60 ° C30 s ความของขยายถูกกำหนด โดยการหลอมเส้นโค้งวิเคราะห์ปลาย ช่วงอุณหภูมิระหว่าง 65 และ95 ° C ทีละ 0.5 ° C คำนวณการเปลี่ยนแปลงสัมพัทธ์พับใช้การคำนวณ 2−ΔΔCt (Schmittgen & Livak, 2008) การแสดงออกมาจากความหมายของอิสระสามระดับสำหรับแต่ละคัดท้ายการทดลอง2.3. SNP genotypingNCBI_ss1388116468 SNP เป็น genotyped โดย PCR-จำกัดส่วนความยาวโพลิมอร์ฟิซึมวิธีตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ตองet al. 2012) ใช้วิธีการนี้ 186 bp บางส่วนของ PCR ที่ประกอบด้วยการเว็บไซต์ SNP ถูกขยาย และ ย่อย HpaII เป็นชิ้น ๆ bp 57 และ 129ที่อัลลีล G แต่ไม่ลสามารถ C: homozygotes GG, CChomozygotes และ GC heterozygotes ตอนสองวง (57 และ129 bp), วงหนึ่ง (186 bp) และสาม (57, 129 และ 186 bp),ตามลาดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการ
ใน 20 ไมโครลิตรมี 10 ไมโครลิตรของ SsoAdvanced SYBR สีเขียว SUPERMIX
(Bio-Rad) 1 ไมโครลิตรของแต่ละไพรเมอร์ (10 ไมครอน) 2 ไมโครลิตรของยีน (2.5 ng / ไมโครลิตร) และ 6 ไมโครลิตร
ของ RNase / DNase- ฟรี H2O พารามิเตอร์ความร้อนมีดัง
ต่อไปนี้: 95 ° C เป็นเวลา 30 วินาทีตามด้วย 40 รอบที่ 95 ° C เป็นเวลา 3 และ 60 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 30 วินาที ความจำเพาะของการขยายถูกกำหนดโดยการละลาย
วิเคราะห์เส้นโค้งที่สิ้นสุดในช่วงอุณหภูมิระหว่าง 65 และ
95 องศาเซลเซียสใน 0.5 ° C เพิ่มขึ้นทีละ การเปลี่ยนแปลงเท่าญาติที่คำนวณ
โดยใช้การคำนวณ 2 ΔΔCt (Schmittgen & Livak 2008) การแสดงออก
ระดับสำหรับแต่ละยืดที่ได้รับจากค่าเฉลี่ยของสามอิสระ
ทดลอง.
2.3 SNP genotyping
NCBI_ss1388116468 SNP ถูก genotyped โดย PCR-ข้อ จำกัด
วิธียาวชิ้นส่วนหลายรูปแบบตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tong
et al., 2012) ใช้วิธีนี้ 186 bp เศษ PCR ที่มี
เว็บไซต์ SNP ถูกขยายและ HpaII ย่อยลงไปใน 57- และเศษ 129-BP
ที่อัลลีลจี แต่ไม่ C อัลลีลที่: homozygotes GG, ซีซี
homozygotes และ heterozygotes GC ให้ผล สองวง (57 และ
129 bp) หนึ่งในวงดนตรี (186 BP) และสามวงดนตรี (57, 129 และ 186 bp)
ตามลำดับ