The present work showed that teeth

The present work showed that teeth samples of dolphins preserved in collections were a good source of mitochondrial DNA for population genetics and taxonomic studies. The positive results in obtaining DNA showed that the pre-treatment of samples chosen for decontamination from exogenous sources was efficient and did not damage totally the DNA, leaving enough DNA for the amplification of the region of interest. Rosenbaum et al. (1997) did not succeed in obtaining DNA from Baleen plates after soaking them overnight in absolute ethanol, as was done in the present work. They were able to obtain DNA only when submitted them to a surface cleaning with this component. In the case of teeth the DNA is localised internally surrounding the pulp cavity, therefore, it may be less exposed to the ethanol. The demineralization process was necessary because it was expected that mineral compounds were likely to inibit the PCR, which were also responsible for the higher preservation of DNA at this regions. Kiesslich et al. (2002) described an efficient and quick method of DNA purification by the use of dialysis using nitrocellulose membranes. The silica-GUSCN protocol for DNA extraction was efficient for the present purpose of extracting DNA from grained teeth, showing that it was a good protocol for difficult templates as was stated previously by Hoelzel (1998). More recently, other authors have used other extraction protocols for preserved part of specimens from collections, such as Proteinase-k for lisis, Phenol/Chloroform for purification, and absolute ethanol for precipitation (Rosenbaum et al., 1997; Sweet and Hildebrand, 1998) and alternatively using nitrocelulose-mediated dialysis for purification (Kiesslich et al., 2002). The sílica-GUSCN protocole has the advantage of providing highly pure DNA, eliminating known and unknown PCR inibitors (Höss and Pääbo, 1993; Yang, 1997).

The primers used for amplifying the 16S rRNA mitochondrial gene described by Palumbi et al. (1991) were not useful for obtaining part of this gene in T. truncatus. Therefore, it seemed that they were not useful for vertebrates. These primers have proven to be very useful in a variety of invertebrates (Palumbi et al., 1991; Rawson and Hilbish, 1995; pers. obs.). In the case of the BDR region of the Cytochrome-b gene, the primers tested, described by Unseld et al. (1995) for a very conservative region of vertebrate species, were useful for amplifying this gene in T. truncatus. The fragment obtained for this species was close to 123 bp, the size observed for tunnids (Fig.1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

งานปัจจุบันพบว่า ตัวอย่างฟันของปลาโลมาที่เก็บรักษาไว้ในคอลเลกชันเป็นแหล่งที่ดีของ mitochondrial DNA พันธุศาสตร์เชิงประชากรและการศึกษาอนุกรมวิธาน ผลบวกในการรับดีเอ็นเอพบว่า รักษาก่อนตัวอย่างสำหรับ decontamination จากแหล่งบ่อยมาก และไม่ได้เสียทั้งหมดดีเอ็นเอ ออกจากดีเอ็นเอเพียงพอสำหรับการขยายภาคน่าสนใจ ไม่ Rosenbaum et al. (1997) ได้ประสบความสำเร็จในการรับดีเอ็นเอจาก Baleen แผ่นหลังอย่างนั้นค้างคืนแน่นอนเอทานอล ที่ทำงานปัจจุบัน พวกเขาเคยได้รับดีเอ็นเอเฉพาะเมื่อส่งพวกเขาไปที่พื้นผิวทำความสะอาด ด้วยคอมโพเนนต์นี้ ในกรณีของดีเอ็นเอเป็นไหนรอบโพรงเยื่อภายในฟัน ดังนั้น มันได้น้อยสัมผัสกับเอทานอล การ demineralization ไม่จำเป็นเนื่องจากมันถูกคาดว่า สารแร่มีแนวโน้มที่จะ inibit PCR ซึ่งยังรับผิดชอบสูงในการบำรุงรักษาของดีเอ็นเอในภูมิภาคนี้ Kiesslich et al. (2002) กล่าวถึงวิธีการมีประสิทธิภาพ และรวดเร็วในการทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ โดยใช้หน่วยที่ใช้เยื่อหุ้ม nitrocellulose ซิลิก้า GUSCN โพรโทคอลการสกัดดีเอ็นเอถูกมีประสิทธิภาพสำหรับวัตถุประสงค์มีการสกัดดีเอ็นเอจากฟัน grained แสดงว่า มันเป็นโพรโทคอลที่ดีสำหรับแม่แบบยากตามที่ได้ระบุไว้ก่อนหน้านี้ โดย Hoelzel (1998) เมื่อเร็ว ๆ นี้ คนใช้โปรโตคอลอื่น ๆ สกัดสำหรับหนึ่งรักษาไว้เป็นตัวอย่างจากคอลเลกชัน เช่น Proteinase k สำหรับ lisis วาง/สำหรับฟอก คลอโรฟอร์มและเอทานอลนอนสำหรับฝน (Rosenbaum et al., 1997 หวานและ Hildebrand, 1998) และอีกวิธีหนึ่งคือ ใช้หน่วย nitrocelulose mediated ฟอก (Kiesslich et al., 2002) Protocole sílica GUSCN มีประโยชน์ให้ DNA บริสุทธิ์สูง ตัดรู้จัก และไม่รู้จัก PCR inibitors (Höss และ Pääbo, 1993 ยาง 1997)ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับมือ 16S rRNA mitochondrial ยีนอธิบายโดย Palumbi et al. (1991) ไม่มีประโยชน์สำหรับการได้รับส่วนหนึ่งของยีนนี้ในต. truncatus ดังนั้น มันดูเหมือนว่า พวกเขาไม่มีประโยชน์สำหรับ vertebrates ไพรเมอร์เหล่านี้ได้พิสูจน์ให้เป็นประโยชน์มากหลาย invertebrates (Palumbi et al., 1991 สอนศาสนาและ Hilbish, 1995 อาทิ obs.) ในกรณีที่ภูมิภาคลวิของยีน Cytochrome b ไพรเมอร์ที่ทดสอบ อธิบายโดย Unseld et al. (1995) สำหรับภูมิภาคหัวเก่ามากชนิดหลอด ได้ประโยชน์สำหรับมือนี้ยีนในต. truncatus ส่วนได้รับสำหรับนกชนิดนี้อยู่ใกล้ 123 bp ขนาดสังเกตสำหรับ tunnids (ภาพ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำงานในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่ากลุ่มตัวอย่างฟันของปลาโลมาเก็บรักษาไว้ในคอลเลกชันเป็นแหล่งที่ดีของยลดีเอ็นเอสำหรับพันธุศาสตร์ประชากรและการศึกษาอนุกรมวิธาน ผลบวกในการได้รับดีเอ็นเอแสดงให้เห็นว่าการรักษาก่อนของกลุ่มตัวอย่างเลือกสำหรับการปนเปื้อนจากแหล่งภายนอกมีประสิทธิภาพและไม่เกิดความเสียหายโดยสิ้นเชิงไม่ดีเอ็นเอออกจากดีเอ็นเอเพียงพอสำหรับการขยายของภูมิภาคที่น่าสนใจ Rosenbaum, et al (1997) ไม่ประสบความสำเร็จในการได้รับดีเอ็นเอจากแผ่นบาลีหลังจากแช่ค้างคืนในเอทานอลที่แน่นอนตามที่ได้ทำในการทำงานในปัจจุบัน พวกเขาก็สามารถที่จะได้รับดีเอ็นเอเฉพาะเมื่อส่งพวกเขาที่จะทำความสะอาดพื้นผิวที่มีส่วนนี้ ในกรณีที่ฟันดีเอ็นเอเป็นภาษาท้องถิ่นโดยรอบภายในโพรงเยื่อกระดาษดังนั้นมันอาจจะน้อยกว่าที่จะสัมผัสเอทานอล กระบวนการ demineralization เป็นสิ่งจำเป็นเพราะมันเป็นที่คาดว่าสารประกอบแร่มีแนวโน้มที่จะ inibit PCR ซึ่งยังเป็นผู้รับผิดชอบในการดูแลรักษาที่สูงขึ้นของดีเอ็นเอในภูมิภาคนี้ Kiesslich et al, (2002) อธิบายวิธีที่มีประสิทธิภาพและรวดเร็วของการทำให้บริสุทธิ์ดีเอ็นเอจากการใช้ของการฟอกเลือดโดยใช้เยื่อ nitrocellulose โปรโตคอลซิลิกา GUSCN สำหรับการสกัดดีเอ็นเอมีประสิทธิภาพเพื่อวัตถุประสงค์ในปัจจุบันในการสกัดดีเอ็นเอจากเนื้อฟันที่แสดงให้เห็นว่ามันเป็นโปรโตคอลที่ดีสำหรับแม่ยากอย่างที่ได้ระบุไว้ก่อนหน้านี้โดย Hoelzel (1998) เมื่อเร็ว ๆ นี้ผู้เขียนอื่น ๆ ได้ใช้โปรโตคอลสกัดอื่น ๆ เพื่อเป็นส่วนหนึ่งที่เก็บรักษาไว้ของตัวอย่างจากคอลเลกชันเช่นโปร-k สำหรับ lisis, ฟีนอล / คลอโรฟอร์มสำหรับการทำให้บริสุทธิ์และเอทานอลแน่นอนสำหรับการตกตะกอน (Rosenbaum, et al, 1997;. หวานและ Hildebrand 1998 ) และอีกทางเลือกหนึ่งที่ใช้ฟอกไต nitrocelulose สื่อกลางสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ (Kiesslich et al., 2002) ซิลิกา-GUSCN protocole มีความได้เปรียบในการให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์สูง, การขจัดรู้จักและไม่รู้จัก inibitors PCR (HössและPääbo 1993; ยาง, 1997). ไพรเมอร์ที่ใช้ในการขยายยีน 16S rRNA ยลอธิบายโดย Palumbi et al, (1991) ไม่ได้มีประโยชน์สำหรับการได้รับส่วนหนึ่งของยีนนี้ในที truncatus ดังนั้นมันดูเหมือนว่าพวกเขาไม่ได้มีประโยชน์สำหรับสัตว์ที่มีกระดูกสันหลัง ไพรเมอร์เหล่านี้ได้พิสูจน์แล้วว่าเป็นประโยชน์อย่างมากในความหลากหลายของสัตว์ไม่มีกระดูกสันหลัง (ที่ Palumbi et al, 1991;. รอว์และ Hilbish, 1995;. pers obs.) ในกรณีของภูมิภาค BDR ของยีน Cytochrome-B ที่ไพรเมอร์ที่ผ่านการทดสอบอธิบายโดย Unseld et al, (1995) สำหรับพื้นที่อนุรักษ์นิยมมากของสายพันธุ์ที่เลี้ยงลูกด้วยนมมีประโยชน์สำหรับการขยายยีนนี้ในที truncatus ส่วนที่ได้รับสำหรับสายพันธุ์นี้ได้ใกล้เคียงกับ 123 bp ขนาดสังเกต tunnids (รูปที่ 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

งานปัจจุบัน พบว่า ฟัน ตัวอย่างของปลาโลมาเก็บรักษาไว้ในคอลเลกชันเป็นแหล่งที่ดีของ mitochondrial DNA พันธุศาสตร์ประชากรและการศึกษาการศึกษา ผลในเชิงบวกในการได้รับดีเอ็นเอ พบว่า กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการบำบัดสารพิษจากแหล่งภายนอกมีประสิทธิภาพ และไม่ได้เสียหายโดยสิ้นเชิง ดีเอ็นเอออกจากดีเอ็นเอมากพอสำหรับการเพิ่มปริมาณของพื้นที่ที่สนใจ โรเซนบอม et al . ( 1997 ) ไม่ประสบความสำเร็จในการได้รับดีเอ็นเอจากบาลีนแผ่นหลังจากแช่ไว้ค้างคืนแน่นอน เอทานอล ดังที่ทำในงานปัจจุบัน พวกเขาสามารถได้รับ DNA เมื่อยื่นให้ทำความสะอาดผิวหน้าด้วยส่วนนี้เธอ in the ของ teeth the ดาวอังคาร is localised internally ห pulp cavity , therefore , it may : less exposed to the ขึ้นใน กระบวนการแร่ธาตุจำเป็น เพราะคาดว่าเป็นสารแร่ มีแนวโน้มที่จะ inibit pcr ที่ต้องรับผิดชอบสูงรักษาดีเอ็นเอในภูมิภาค kiesslich et al .( 2002 ) อธิบายที่มีประสิทธิภาพและรวดเร็ววิธีการบำบัดน้ำเสียโดยการใช้ดีเอ็นเอใช้ไนโตร ไต เยื่อ โปรโตคอล guscn ซิลิกาสำหรับการสกัดดีเอ็นเอให้มีประสิทธิภาพเพื่อสกัดดีเอ็นเอจากฟันปัจจุบันเม็ด แสดงว่า มันเป็นขั้นตอนที่ดีสำหรับแม่แบบยากตามที่ได้ระบุไว้ก่อนหน้านี้ โดย hoelzel ( 1998 ) เมื่อเร็วๆ นี้ผู้เขียนได้ใช้โปรโตคอลอื่น ๆสำหรับการรักษาส่วนของการสกัดตัวอย่างจากคอลเลกชัน เช่น proteinase-k สำหรับ lisis ล / คลอโรฟอร์มและเอทานอลที่บริสุทธิ์ แน่นอนสำหรับการตกตะกอน ( โรเซนบอม et al . , 1997 ; หวานและ ฮิลเดอแบรน , 1998 ) และอีกวิธีหนึ่งคือการใช้ nitrocelulose ) สำหรับฟอกไต ( kiesslich et al . , 2002 )s íไลก้า guscn โพรโทคอลที่มีประโยชน์ให้ดีเอ็นเอสูงบริสุทธิ์ , ขจัดรู้จักและไม่รู้จัก inibitors PCR ( H ö ss และ P ääโบ , 1993 ; ยัง , 1997 ) .

ไพรเมอร์ใช้ amplifying เบส 16S rRNA ยีนไมโทคอนเดรียลอธิบาย โดย palumbi et al . ( 1991 ) เป็นประโยชน์สำหรับการได้รับส่วนหนึ่งของยีนนี้มัก . ดังนั้น ดูเหมือนว่าพวกเขาไม่ได้มีประโยชน์กับกระดูกสันหลังไพรเมอร์เหล่านี้ได้พิสูจน์แล้วว่าเป็นประโยชน์อย่างมากในความหลากหลายของสัตว์ไม่มีกระดูกสันหลัง ( palumbi et al . , 1991 ; รอว์สัน และ hilbish , 1995 ; ข่าวสาร ทันอยู่แล้ว ) ในกรณีของ bdr ภูมิภาคของ cytochrome-b ยีน ด้วยการทดสอบที่อธิบายโดย unseld et al . ( 1995 ) สำหรับภูมิภาคอนุรักษ์นิยมมากของสัตว์มีกระดูกสันหลังชนิด มีประโยชน์สำหรับขยายยีนนี้มัก .ส่วนการศึกษาสำหรับชนิดนี้ใกล้เคียงกับ 123 / ขนาด ) tunnids ( ” )