Salivary glands extract (SGE) prepa

Salivary glands extract (SGE) preparation
Salivary glands were dissected from 100 adult cold anesthetized An. culicifacies female mosquitoes
(SF and BF each) under stereomicroscope (4X magnification) using fine needles and
pooled in Phosphate Buffered Saline (PBS; 10mM Na2SO4, 145mM NaCl (pH 7.2) containing
protease inhibitors (Complete, Roche Diagnostics, Germany). 100 pairs of pooled salivary
glandswere homogenised by ultrasonication (3 pulses of 20 sec each) on ice. Salivary gland
homogenate suspension was then centrifuged for 10 min at 5000 rpm at 4°C. Cell debris pellet
was discarded and supernatant containing salivary gland protein extract (SGE) was stored at
-80°C until further investigations. Protein concentration in the SGEs was quantified by Lowry’s
method (GeNeiTM Protein Estimation Kit) using BSA as a standard [22].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

(เป็นโปรแกรมแบบขนาน) เตรียมสารสกัดจากต่อมน้ำลายต่อมน้ำลายถูก dissected 100 ผู้ใหญ่เย็นด้วยในฐานะ culicifacies หญิงยุง(SF และ BF ละ) ภายใต้วิธี (กำลังขยาย 4 X) โดยใช้เข็มที่ดี และพูในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ Saline (PBS; 10 มม. Na2SO4, 145 มม. NaCl (pH 7.2) ที่ประกอบด้วยรตี (สมบูรณ์ โรชวินิจฉัย เยอรมนี) 100 คู่พูน้ำลายglandswere นี้ โดย ultrasonication (3 พัลส์ 20 วินาที) บนน้ำแข็ง ต่อมน้ำลายhomogenate ระงับแก้ไขแล้วจาก 10 นาทีที่ 5000 rpm ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เซลล์เศษเม็ดถูกละทิ้ง และ supernatant ที่ประกอบด้วยสารสกัดจากโปรตีนต่อมน้ำลาย (เป็นโปรแกรมแบบขนาน) ถูกเก็บไว้ที่-80° C จนกว่าจะสืบสวนเพิ่มเติม ความเข้มข้นของโปรตีนใน SGEs ถูกวัด โดยของ Lowryวิธีการ (GeNeiTM โปรตีนประมาณ Kit) โดยใช้บีเอสเอเป็นมาตรฐาน [22]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ต่อมน้ำลาย Extract (สาร SGE) การเตรียม
ต่อมน้ำลายถูกชำแหละจาก 100 ผู้ใหญ่เย็นดมยาสลบ culicifacies ยุงตัวเมีย
(เอสเอฟและ BF แต่ละ) ภายใต้สเตอริโอ (4X ขยาย) โดยใช้เข็มที่ดีและ
สำรองในฟอสเฟต Buffered Saline (พีบีเอส; 10 mM Na2SO4, 145mm โซเดียมคลอไรด์ (pH 7.2) ที่มี
น้ำย่อยโปรตีน (สมบูรณ์ Roche Diagnostics, เยอรมนี) 100 คู่. น้ำลาย pooled
glandswere homogenised โดย ultrasonication (3 พัลส์ 20 วินาทีในแต่ละ) บนน้ำแข็ง. ต่อมน้ำลาย
homogenate ระงับถูกปั่นแล้วเป็นเวลา 10 นาทีที่ 5000 รอบต่อนาทีที่ 4 เม็ด° C. มือถือเศษ
ทิ้งและสารละลายที่มีส่วนผสมของสารสกัดจากโปรตีนต่อมน้ำลาย (SGE ) ถูกเก็บไว้ที่
-80 องศาเซลเซียสจนกว่าจะสืบสวนต่อไป. โปรตีนเข้มข้นใน SGEs ถูกวัดโดยโลว์รีย์
วิธี (GeNeiTM โปรตีนประมาณค่าชุด) โดยใช้บีเอสเอเป็นมาตรฐาน [22]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ต่อมน้ำลาย ( SGE ) การเตรียมสารสกัดต่อมน้ำลายถูกตัดจากความเย็น ผู้ใหญ่ 100 ยาสลบ . culicifacies ยุงตัวเมีย( SF และ แฟนแต่ละ stereomicroscope ( 4x ) ภายใต้การขยาย ) การใช้เข็มและดีฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pooled ในน้ำเกลือ ( PBS ; na2so4 145mm 10mm , NaCl ( pH 7.2 ) ที่มีโปรตีเอสอินฮิบิเตอร์ ( สมบูรณ์ โรชวินิจฉัย , เยอรมัน ) 100 คู่ Pooled น้ำลายglandswere homogenised โดย ultrasonication ( 3 พัลส์ 20 วินาทีในแต่ละ ) บนน้ำแข็ง ต่อมน้ำลายอนถูกระงับแล้วระดับ 10 นาทีที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิ 4 องศา เศษเซลล์เม็ดถูกทิ้งและนำสารสกัดโปรตีนประกอบด้วยต่อมน้ำลาย ( SGE ) ถูกเก็บไว้ที่- 80 องศา C จนกว่าการสอบสวนเพิ่มเติม ความเข้มข้นของโปรตีนใน sges ถูก quantified โดยของโลว์รีย์วิธี geneitm โปรตีนประมาณ 6 ชุด ) ใช้เป็นมาตรฐาน [ 22 ]