2.4. Digestive gland (DG) and muscl

2.4. Digestive gland (DG) and muscle metabolites
Before sampling, octopuses (24 h fasting animals) were anaesthetised in a cold seawater bath (15 °C) for 1 to 2 min (Moltschaniwskyj et al., 2007). Once anaesthetised the brain of octopus was cute and after samples of DG and arms were obtained. DG samples and two arms of each sampled animal were frozen in liquid nitrogen and then stored at − 80 °C until analysis. From these samples, soluble protein, acyglycerides, cholesterol, glucose and glycogen were measured in the DG. Muscle glycogen was evaluated in the octopus arms. Total soluble protein was evaluated with the Coomassie blue dye method according to the Bradford (1976) technique adapted to a microplate method using a commercial chromogen reagent (BioRad, Cat. 500–0006) and bovine serum albumin as the standard. Commercial kits were used for glucose (Bayer Sera Pak Plus B01 4509–01), acylglycerol (Bayer Sera Pak Plus B01 455101) and cholesterol (Bayer Sera Pak Plus B01 4507–01) measurements. Determinations were adapted to a microplate using 10 mL DG extract and gastric juice (GJ) (dilution 1:10) and 200 μL chromogen reagent. Absorbance was recorded in a microplate reader (BioRad 550) and the concentrations were calculated from a standard substrate solution.

Glycogen was determined using the method described by Carroll et al. (1956). Glycogen in the DG and arms were extracted with trichloroacetic acid 5% (TCA) and determined through the reaction with sulphuric acid and phenol. Sections of DG and arms were weighed (20–30 mg) and homogenized in TCA for 2 min at 4550 g. One hundred microlitres of supernatant was pipetted into a tube and mixed with 500 μL ethanol 95%. Tubes were placed in an oven at 37 °C for 3 h. After precipitation, the tubes were centrifuged at 4550 g for 15 min. The supernatant was discarded leaving the glycogen as a pellet. By adding 1 mL concentrated sulphuric acid and 200 μL phenol 5%, glycogen was dissolved. From the mix, 200 μL was transferred to a microplate and read at 490 nm in an ELISA reader (BioRad 550). Total weight of the digestive gland was also recorded.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. ต่อมย่อยอาหาร (กิจ) และ metabolites ของกล้ามเนื้อก่อนสุ่มตัวอย่าง octopuses (24 h สัตว์ถือศีลอด) ถูกจัด anaesthetised ในน้ำทะเลเย็น (15 ° C) สำหรับ 1-2 นาที (Moltschaniwskyj et al., 2007) เมื่อ anaesthetised สมองของปลาหมึก น่ารักและหลัง จากตัวอย่างของกิจ และแผ่นดินได้รับ ตัวอย่างกิจและสองแขนของสัตว์แต่ละตัวอย่างถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และเก็บที่− 80 ° C จนถึงการวิเคราะห์ จากนี้ตัวอย่างโปรตีนที่ละลายน้ำ acyglycerides ไขมัน น้ำตาลกลูโคสและไกลโคเจนถูกวัดในกิจ กล้ามเนื้อไกลโคเจนถูกประเมินในแผ่นดินปลาหมึก ละลายโปรตีนรวมที่ประเมิน ด้วยวิธีการย้อมสี Coomassie ตามเทคนิคแบรดฟอร์ด (1976) ที่ดัดแปลงกับวิธี microplate ใช้รีเอเจนต์ chromogen พาณิชย์ (BioRad, Cat. 500 – 0006) และวัว serum albumin เป็นมาตรฐาน ชุดเชิงพาณิชย์ใช้สำหรับกลูโคส (ไบเออร์จะปากพร้อม B01 4509-01) acylglycerol (ไบเออร์จะปากพร้อม B01 455101) และไขมัน (ไบเออร์จะปากพร้อม B01 4507 – 01) วัด Determinations ได้ปรับ microplate ใช้สารสกัด 10 มลกิจ และ gastric น้ำ (GJ) (เจือจาง 1:10) และ 200 μL chromogen รีเอเจนต์ บันทึก absorbance ในอ่าน microplate (BioRad 550) และความเข้มข้นที่คำนวณได้จากโซลูชันมาตรฐานพื้นผิวไกลโคเจนที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีอธิบายโดยคาร์ et al. (1956) ไกลโคเจนในกิจและแขนถูกสกัด trichloroacetic กรด 5% (TCA) และถูกกำหนด โดยปฏิกิริยากับกรดซัลฟุริกและวาง ส่วนของกิจและแขนมีชั่งน้ำหนัก (20 – 30 มิลลิกรัม) และ homogenized เป็นกลุ่มใน TCA สำหรับ 2 นาทีที่ 4550 g Microlitres หนึ่งร้อยของ supernatant pipetted ลงในหลอด และผสม ด้วย 500 μL เอทานอล 95% หลอดถูกวางในเตาอบที่ 37 ° C สำหรับ 3 h หลังฝน หลอดถูก centrifuged ที่ 4550 g สำหรับ 15 นาที Supernatant ถูกละทิ้งปล่อยไกลโคเจนเป็นเม็ดแบบ ไกลโคเจนถูกส่วนยุบเพิ่ม 1 mL เข้มข้นกรดซัลฟุริกและ 200 μL วาง 5% จากผสม 200 μL ถูกโอนย้ายไป microplate และอ่านที่ 490 nm ในการ ELISA อ่าน (BioRad 550) นอกจากนี้ยังมีบันทึกน้ำหนักรวมของต่อมย่อยอาหาร

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ต่อมย่อยอาหาร (DG) และสารกล้ามเนื้อ
ก่อนการสุ่มตัวอย่างหมึก (24 ชั่วโมงการอดอาหารสัตว์) ได้รับการวางยาสลบในอ่างน้ำทะเลเย็น (15 ° C) สำหรับ 1-2 นาที (Moltschaniwskyj et al., 2007) เมื่ออสัญญีสมองของปลาหมึกน่ารักและหลังตัวอย่าง DG และแขนได้รับ ตัวอย่าง DG และสองแขนของสัตว์แต่ละตัวอย่างถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้แล้ว - 80 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ จากตัวอย่างเหล่านี้โปรตีนที่ละลายน้ำได้ acyglycerides คอเลสเตอรอลน้ำตาลกลูโคสและไกลโคเจนอยู่ในวัด DG ไกลโคเจนกล้ามเนื้อได้รับการประเมินในอ้อมแขนของปลาหมึก โปรตีนที่ละลายน้ำทั้งหมดได้รับการประเมินด้วยวิธีการย้อมสีฟ้า Coomassie ตาม Bradford (1976) เทคนิคการปรับให้เข้ากับวิธี microplate ใช้น้ำยาพาณิชย์ chromogen (BioRad แมว. 500-0006) และอัลบูมิซีรั่มวัวเป็นมาตรฐาน ชุดพาณิชย์ถูกนำมาใช้สำหรับกลูโคส (ไบเออร์เซราปากพลัส B01 4509-01), acylglycerol (ไบเออร์เซราปากพลัส B01 455101) และคอเลสเตอรอล (ไบเออร์เซราปากพลัส B01 4507-01) วัด การหาความถูกปรับให้เข้ากับการใช้ microplate 10 มลสารสกัดจาก DG และน้ำย่อย (GJ) (เจือจาง 1:10) และ 200 ไมโครลิตรน้ำยา Chromogen การดูดกลืนแสงที่ถูกบันทึกไว้ในเครื่องอ่าน microplate (BioRad 550) และความเข้มข้นจะถูกคำนวณจากวิธีการแก้ปัญหาพื้นผิวมาตรฐาน. ไกลโคเจนถูกกำหนดโดยใช้วิธีการอธิบายโดยแครอลและคณะ (1956) ไกลโคเจนใน DG และแขนถูกสกัดด้วยกรดไตรคลอโร 5% (TCA) และการพิจารณาผ่านปฏิกิริยากับกรดซัลฟูริกและฟีนอล ในส่วนของ DG และแขนถูกชั่งน้ำหนัก (20-30 มก.) และหดหายใน TCA 2 นาทีที่ 4550 กรัม หนึ่งร้อย microlitres ของสารละลายถูกปิเปตลงในหลอดและผสมกับเอทานอล 500 ไมโครลิตร 95% ท่อถูกวางไว้ในเตาอบที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสนาน 3 ชั่วโมง หลังจากที่ฝนหลอดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4550 กรัมเป็นเวลา 15 นาที ใสถูกทิ้งออกจากไกลโคเจนเป็นเม็ด โดยการเพิ่ม 1 มิลลิลิตรกรดกำมะถันเข้มข้นและ 200 ไมโครลิตรฟีนอล 5% ไกลโคเจนก็เลือนหายไป จากผสม 200 ไมโครลิตรถูกย้ายไป microplate และอ่านที่ 490 นาโนเมตรอ่านวิธี ELISA (BioRad 550) น้ำหนักรวมของต่อมย่อยอาหารนอกจากนี้ยังได้รับการบันทึก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การย่อยอาหาร ต่อม ( DG ) และกล้ามเนื้อสาร
ก่อนตัวอย่าง ปลาหมึกยักษ์ ( 24 ชั่วโมงสัตว์อดอาหาร ) anaesthetised ในน้ำทะเลเย็นอาบน้ำ ( 15 ° C ) สำหรับ 1 ถึง 2 นาที ( moltschaniwskyj et al . , 2007 ) เมื่อ anaesthetised สมองของปลาหมึกน่ารักและหลังจากที่ตัวอย่างของ DG และแขนได้ตัวอย่าง DG และแขนทั้งสองของแต่ละตัวอย่างสัตว์ที่ถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิ 80 องศา และจากนั้น บริษัท เวสเทิร์น ซีจนถึงการวิเคราะห์ จากตัวอย่างเหล่านี้ ปริมาณโปรตีน acyglycerides , คอเลสเตอรอล , กลูโคสและไกลโคเจนจะถูกวัดใน DG . ไกลโคเจนกล้ามเนื้อถูกประเมินในปลาหมึกแขนปริมาณโปรตีนที่ละลายในน้ำจะถูกประเมินด้วยวิธีการเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสีตามที่แบรดฟอร์ด ( 1976 ) เทคนิคปรับให้เป็นพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยโดยใช้เป็นโครโมเจนพาณิชย์ 3 ( biorad , แมว 500 – 0006 ) และอัลบูมินเซรั่ม และเป็นมาตรฐาน ชุดพาณิชย์ใช้กลูโคส ( จากปากบวก ( A16 4509 ( 01 )บาซ่าร์ ( จากปากบวก 455101 ( A16 ) และคอเลสเตอรอล ( ไบเออร์ เซราปากบวกกระบวนการที่ ( 01 ) วัด รวมทั้งได้ปรับการใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย 10 ml DG สกัด และน้ำย่อยในกระเพาะอาหาร ( GJ ) ( เจือจาง 1 : 10 ) และ 200 μ l โครโมเจนเกิดปฏิกิริยา การดูดกลืนแสงที่ถูกบันทึกไว้ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน biorad 550 ) และความเข้มข้นได้จากโซลูชั่น

พื้นผิวมาตรฐานไกลโคเจน ตัดสินใจใช้วิธีอธิบายโดย Carroll et al . ( 1956 ) ไกลโคเจนใน DG และแขนถูกสกัดด้วย % trichloroacetic acid ( TCA ) และมุ่งมั่นที่ผ่านการทำปฏิกิริยากับกรด กำมะถัน และฟีนอล ส่วนของ DG และแขนเป็นหนัก ( 20 – 30 มก. ) และบดใน tca 2 นาทีที่ 4550 .หนึ่งร้อย microlitres ของน่านคือ pipetted เป็นหลอดและผสมกับ 500 μลิตรเอทานอล 95% หลอดถูกวางไว้ในเตาอบที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง หลังจากการตกตะกอน , ท่อ คือระดับที่ 4550 กรัมเป็นเวลา 15 นาที และน่านถูกทิ้งออกจากไกลโคเจนเป็นเม็ด โดยการเพิ่ม 1 มล. ความเข้มข้นกรดฟีนอลและ 200 μ L 5 % ไกลโคเจนละลาย . จากการผสม200 μฉันย้ายไปยังพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย และอ่านที่คุณ nm ในเครื่องอ่านอีไล ( biorad 550 ) น้ำหนักรวมของต่อมย่อยอาหาร ก็บันทึกไว้