the sequence “GGACTACNVGGGTWTCTAATC

the sequence “GGACTACNVGGGTWTCTAATCC”. The V4 and V5 regions
were amplified using forward primers containing the sequence”
GTGYCAGCMGCCGCGGTAA” and reverse primers containing the
sequence “CTTGTGCGGKCCCCCGYCAATTC”. In addition to the 16S
target-specific sequence, the primers also contained adaptor sequences
to allow for uniform amplification of the library with high complexity
and compatibility with downstream NGS sequencing on an Illumina
Miseq. Indexed adapters were added to the ends of the 16S rDNA
amplicons by limited cycle PCR. DNA libraries were validated using an
Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA),
and quantified by Qubit and real-time PCR (Applied Biosystems, Carlsbad,
CA, USA). The DNA libraries were multiplexed and loaded on an
Illumina MiSeq instrument according to the instructions of the manufacturer
(Illumina, San Diego, CA, USA). Sequencing was performed
using a 2 × 250 paired-end (PE) configuration; image analysis and
base calling were conducted by the MiSeq Control Software (MCS) on
MiSeq instrument. Initial taxonomy analysis was carried out on the
Illumina base space cloud computing platform.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ลำดับที่ "GGACTACNVGGGTWTCTAATCC" ภูมิภาค V4 และ V5ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ไปข้างหน้าประกอบด้วยลำดับ"GTGYCAGCMGCCGCGGTAA" และย้อนกลับไพรเมอร์ที่ประกอบด้วยการลำดับที่ "CTTGTGCGGKCCCCCGYCAATTC" นอกจากนี้ 16Sเป้าหมายเฉพาะลำดับ ลำดับที่อะแดปเตอร์ของไพรเมอร์ที่ยัง มีอยู่เพื่อให้รูปขยายของไลบรารี มีความซับซ้อนสูงและเข้ากันได้กับ NGS ปลาย sequencing บน Illumina การMiseq ดัชนีอะแดปเตอร์เพิ่มปลายของ 16S rDNAamplicons โดยจำกัดรอบการ PCR ไลบรารีของดีเอ็นเอที่ถูกตรวจสอบโดยใช้การBioanalyzer Agilent 2100 (Agilent เทคโนโลยี คาร์ลอส CA สหรัฐอเมริกา),และวัด โดย Qubit และ PCR แบบเรียลไทม์ (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ คาร์ลบาดCA สหรัฐอเมริกา) Multiplexed และโหลดในไลบรารีดีเอ็นเอเครื่อง Illumina MiSeq ตามคำแนะนำของผู้ผลิต(Illumina, San Diego, CA สหรัฐอเมริกา) ดำเนินการจัดลำดับใช้การกำหนดค่าการจับคู่ส่วน (PE) 2 × 250 ภาพการวิเคราะห์ และโทรศัพท์พื้นฐานได้ดำเนินการโดยซอฟต์แวร์ควบคุม MiSeq (MCS)เครื่องมือ MiSeq การวิเคราะห์จำแนกประเภทเริ่มต้นดำเนินการในการพื้นที่ฐาน Illumina เมฆระบบประมวลผล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ลำดับ " ggactacnvgggtwtctaatcc " / V5 ภูมิภาคและกำลังขยายใช้ไพรเมอร์ที่มีลำดับ " ไปข้างหน้าไพรเมอร์ที่มี gtgycagcmgccgcggtaa " และย้อนกลับลำดับ " cttgtgcggkcccccgycaattc " นอกจากการใช้เป้าหมายลำดับเฉพาะ ด้วยยังมีอะแดปเตอร์ลำดับเพื่อให้สามารถขยายชุดของห้องสมุดที่มีความซับซ้อนสูงและเข้ากันได้กับภาพหลุดที่ Illumina ลำดับท้ายmiseq . อะแดปเตอร์ดัชนีถูกเพิ่มไปยังปลายของ 16S rDNAamplicons ซึ่งเป็นวงจรจำกัด ห้องสมุดดีเอ็นเอถูกตรวจสอบโดยใช้Agilent 2100 bioanalyzer ( Agilent Technologies , พาโลอัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา )และ quantified โดย qubit และเรียลไทม์พีซีอาร์ ( Applied Biosystems Carlsbad , ,แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ดีเอ็นเอห้องสมุดและโหลดในการมัลติเพลกซ์Illumina miseq อุปกรณ์ตามคำแนะนำของผู้ผลิต( Illumina , San Diego , CA , USA ) การกระทำใช้ 2 × 250 คู่สุดท้าย ( PE ) และการ วิเคราะห์ภาพฐานเรียกเป็นซอฟต์แวร์การควบคุมโดย miseq ( MCS )miseq เครื่องดนตรี การวิเคราะห์อนุกรมวิธานเบื้องต้นได้ดำเนินการในแพลตฟอร์มคอมพิวเตอร์ Illumina ฐานพื้นที่เมฆ