Figure 1. Treatment of curcumin red

Figure 1. Treatment of curcumin reduces infectivity of enveloped viruses. (A) 4 HA units of Newcastle disease viruses (NDV) were incubated with 2-fold serially diluted curcumin or DMSO (vehicle control) and the hemagglutination inhibitory activity of curcumin was tested by incubation with chicken RBC at room temperature for 30 minutes. (B) time-of-drug addition test: 10 mM of curcumin or DMSO (as solvent control) was included into culture medium at various time points of Japanese encephalitis virus (JEV) or Dengue virus (DV-II) infection (200 pfu), for instance: (1) full time treatment: curcumin was added to vero cells at 8-hour prior to infection and included throughout the time of infection, (2) co-treatment: curcumin mixed with virus in the infection medium was added simultaneously to the cells and left on the cells throughout; (3) after-entry: curcumin was added to cells at 2 hpi and remained throughout the time of infection. Small-sized plaque of DV-II was indicated by arrowhead. Consistent results were observed from at least three independent experiments.
doi:10.1371/journal.pone.0062482.g001
JEV, and DV-II viruses, pretreatment of PRV, with 30 mM of curcumin strongly inhibited plaque formation.
To determine whether the effects on the infectivity is specific to viruses with envelop, a nonenveloped virus, enterovirus 71 (EV71) was then included in the same set of test. For comparative analysis, 2000 PFU of EV71, influenza virus and JEV were incubated with different concentrations of curcumin and viral viability was evaluated using plaque assay. In contrast to the observations in the IAV and other enveloped viruses (PRV, JEV, and DV-II), EV71 plaque formation remained unaffected by curcumin at all analyzed concentrations (Fig. 2B) and similar inhibition effect was observed in IAV and JEV (Fig. 2C).
Curcumin Disrupts the Integrity of Liposomes
Because curcumin had significant effects on HA protein function in 3 enveloped viruses (2 IAV subtypes and NDV) and also on the viability of 4 enveloped viruses, we further evaluated the effects of curcumin pretreatment on the integrity of the viral envelope using liposomes, a simple lipid structure that mimics the viral envelope. This was performed using a commercially available liposome-based transfection reagent and a sulforhodamine B
(SRB)-loaded liposome. In transfection-based system, the trans- fection efficiency and reporter gene (green fluorescence protein; GFP) expression level in cells would indicate the function of liposome that reflects the integrity of liposome structure under curcumin treatment. As shown in Fig. 3A, incubation of the liposome/DNA mixture with curcumin (30 mM) markedly de- creased the overall transfection efficiency and reduced the GFP signal in transfected cells compared with the DMSO solvent- control cells. Consistent results were observed in fluorescent SRB- loaded liposomes. We observed minimal fluorescence when the SRB was encapsulated in the liposomes. However, following membrane disruption and the subsequent release of SRB from the liposomes, fluorescence emission (590 nm wavelength) was detect- able. Liposomes treated with 30 mM curcumin displayed higher levels of SRB fluorescence than DMSO-treated liposomes, in- dicating that curcumin induces leakage of the fluorescent dye (Fig. 3B). We observed a higher level of SRB leakage from the liposomes treated with 60 mM curcumin than from those treated with 30 mm curcumin.
Liposome, as a simpler membrane structure, was used to mimic envelop structure (Fig. 3A, and B). We then further conducted

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รูปที่ 1 รักษาของเคอร์คูมินลด infectivity ไวรัสขัด (A) 4 หน่วยฮาไวรัสโรคนิวคาสเซิล (NDV) มี incubated กับ 2-fold แตกออก serially เคอร์ หรือ DMSO (รถควบคุม) และลิปกลอสไขกิจกรรม hemagglutination ของเคอร์คูมินได้รับการทดสอบ โดยคณะทันตแพทยศาสตร์กับไก่ RBC ที่อุณหภูมิห้อง 30 นาที (ข) การทดสอบเวลาของยาเพิ่ม: 10 มม.ของเคอร์คูมินหรือ DMSO เป็นตัวทำละลายควบคุม) ถูกรวมไว้ในสื่อวัฒนธรรม ณจุดเวลาต่าง ๆ ของไวรัสโรคไข้สมองอักเสบญี่ปุ่น (JEV) หรือติดเชื้อไวรัส (DV-II) ไข้เลือดออก (200 pfu), ตัวอย่าง: (1) เต็มเวลารักษา: เคอร์ถูกเพิ่มเซลล์ vero 8 ชั่วโมงก่อนที่จะติดเชื้อ และรวมตลอดเวลาติดเชื้อ, (2) ร่วมรักษา: เพิ่มเซลล์พร้อมกัน และทิ้งเซลล์ตลอด เคอร์คูมินผสมกับไวรัสในการติดเชื้อ (3) รายการหลัง: เคอร์เพิ่มเซลล์ที่ 2 hpi และยังคงอยู่ตลอดเวลาของการติดเชื้อ หินปูนขนาดเล็กของ DV II ถูกบ่งชี้ โดยแอร์โรว์เฮด ผลลัพธ์ที่สอดคล้องกันถูกสังเกตจาก experiments.
doi:10.1371/journal.pone.0062482.g001
อิสระน้อยสามJEV และไวรัส DV II, pretreatment ของ PRV กับ 30 มม.ของเคอร์คูมินขอห้ามก่อหินปูน.
เพื่อตรวจสอบว่าผลการ infectivity ที่เฉพาะไวรัสกับ envelop ไวรัส nonenveloped เอนเทอโรไวรัส 71 (EV71) แล้วรวมอยู่ในชุดเดียวกันทดสอบ การวิเคราะห์เปรียบเทียบ 2000 PFU ของ EV71 ไวรัสไข้หวัดใหญ่และ JEV ถูก incubated กับความเข้มข้นแตกต่างกันของเคอร์คูมิน และไวรัสนี้ถูกประเมินโดยใช้การวิเคราะห์หินปูน ตรงข้ามสังเกต IAV และอื่น ๆ enveloped ไวรัส (PRV, JEV และ DV II), EV71 หินปูนก่อตัวยังคงไม่ถูกกระทบ โดยเคอร์คูมินที่วิเคราะห์ความเข้มข้น (Fig. 2B) และมีผลยับยั้งการคล้ายถูกสังเกต IAV และ JEV (Fig. 2C) .
เคอร์คูมิน Disrupts สมบูรณ์ Liposomes
เนื่องจากเคอร์คูมินมีผลอย่างมีนัยสำคัญกับการทำงานของโปรตีน HA ใน 3 ขัดไวรัส (2 IAV subtypes และ NDV) และ ในชีวิตของไวรัสขัด 4 เราเพิ่มเติมประเมินผลของเคอร์คูมิน pretreatment ในความสมบูรณ์ของไวรัสซองจดหมายใช้ liposomes โครงสร้างไขมันอย่างที่เลียนแบบซองไวรัส นี้ทำโดยใช้รีเอเจนต์ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ใช้ liposome transfection และ sulforhodamine B
(SRB) -liposome ที่โหลด Transfection ที่ใช้ระบบ ทรานส์ fection ประสิทธิภาพ และโปรแกรมรายงานยีน (fluorescence สีเขียวโปรตีน ระดับ GFP) นิพจน์ในเซลล์จะระบุฟังก์ชันของ liposome ที่สะท้อนให้เห็นถึงความสมบูรณ์ของโครงสร้างรักษาเคอร์ liposome ตามที่แสดงใน Fig. 3A บ่มส่วนผสมของ liposome/ดี เอ็นเอกับเคอร์คูมิน (30 mM) อย่างเด่นชัด เด - ผ้าเป็นรอยย่นประสิทธิภาพ transfection โดยรวม แล้วลดสัญญาณ GFP ในเซลล์ transfected เปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุมตัวทำละลาย DMSO ผลลัพธ์สอดคล้องสุภัคฟลูออเรส SRB-โหลด liposomes เราสังเกต fluorescence น้อยเมื่อ SRB ถูกนึ้ใน liposomes อย่างไรก็ตาม ต่อเยื่อทรัพยและรุ่นต่อมาของ SRB จาก liposomes, fluorescence มลพิษ (590 nm ความยาวคลื่น) ได้ตรวจสอบ - สามารถ Liposomes รับเคอร์ 30 มม.แสดงระดับสูงของ SRB fluorescence กว่าถือ DMSO liposomes ใน dicating เคอร์คูมินที่ก่อให้เกิดการรั่วไหลของย้อมฟลูออเรส (Fig. 3B) เราสังเกตระดับความสูงของ SRB รั่วจาก liposomes เคอร์ 60 มม.มากกว่ารับจากผู้รับการรักษา ด้วยเคอร์คูมิน 30 mm.
Liposome เป็นโครงสร้างเมมเบรนง่ายกว่า ถูกใช้เพื่อเลียนแบบห่อโครงสร้าง (Fig. 3A และ B เราแล้วต่อไปดำเนินการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รูปที่ 1 การรักษาจะช่วยลดการติดเชื้อ curcumin ของไวรัสห่อหุ้ม (A) 4 หน่วย HA ของนิวคาสเซิไวรัสโรค (NDV) บ่มด้วยขมิ้นชันเจือจาง 2 เท่าเป็นลำดับหรือ DMSO (การควบคุมรถ) และ hemagglutination ยับยั้งขมิ้นชันได้รับการทดสอบโดยการบ่มด้วย RBC ไก่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที (B) เวลาของการทดสอบยาเสพติดนอกจากนี้: 10 มิลลิของ curcumin หรือ DMSO (ในขณะที่การควบคุมตัวทำละลาย) ถูกรวมเข้ากลางวัฒนธรรมที่จุดเวลาต่างๆของไวรัสสมองอักเสบญี่ปุ่น (jev) หรือการติดเชื้อไวรัสไข้เลือดออก (DV-II) (200 pfu ) ตัวอย่างเช่น (1) การรักษาเต็มเวลา: ขมิ้นชันถูกบันทึกอยู่ในเซลล์ vero ที่ 8 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการติดเชื้อและรวมตลอดระยะเวลาของการติดเชื้อ (2) ร่วมรักษา: ขมิ้นชันผสมกับไวรัสในสื่อการติดเชื้อเพิ่มขึ้น พร้อมกันไปยังเซลล์และที่เหลือในเซลล์ทั่ว (3) หลังรายการ: ขมิ้นชันถูกบันทึกอยู่ในเซลล์ที่ 2 HPI และยังคงอยู่ตลอดเวลาของการติดเชื้อ แผ่นโลหะขนาดเล็กของ DV-II ถูกระบุโดยหัวลูกศร ผลลัพธ์ที่สอดคล้องกันถูกตั้งข้อสังเกตจากอย่างน้อยสามทดลองที่เป็นอิสระ
ดอย: 10.1371/journal.pone.0062482.g001
jev และ DV-II ไวรัสปรับสภาพของ PRV กับ 30 มิลลิของขมิ้นชันยับยั้งการสะสมคราบจุลินทรีย์อย่างยิ่ง
การตรวจสอบว่าผลกระทบต่อ การติดเชื้อเป็นเฉพาะกับไวรัสด้วยซอง, ไวรัส nonenveloped, enterovirus 71 (EV71) จากนั้นก็รวมอยู่ในชุดเดียวกันของการทดสอบ สำหรับการวิเคราะห์เปรียบเทียบ, 2000 PFU EV71 ของไวรัสไข้หวัดใหญ่และ jev บ่มมีความเข้มข้นแตกต่างกันของขมิ้นชันและความมีชีวิตของเชื้อไวรัสได้รับการประเมินโดยใช้แผ่นทดสอบ ในทางตรงกันข้ามกับข้อสังเกตใน iav และไวรัสห่อหุ้มอื่น ๆ (PRV, jev และ DV-II), การสะสมคราบจุลินทรีย์ EV71 ยังคงได้รับผลกระทบโดยขมิ้นชันที่วิเคราะห์ความเข้มข้น (รูปที่ 2B) และผลกระทบที่คล้ายกันคือการยับยั้งการตั้งข้อสังเกตใน iav และ jev ( รูปที่ 2C.)
Curcumin ถ่วงสมบูรณ์ของ liposomes
เพราะขมิ้นชันมีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการทำงานของโปรตีน HA 3 ห่อหุ้มไวรัส (2 ชนิดย่อย iav และ NDV) และยังมีศักยภาพใน 4 ห่อหุ้มไวรัสเรายังประเมินผลกระทบของการปรับสภาพ curcumin ที่ ความสมบูรณ์ของซองจดหมายไวรัสโดยใช้ไลโปโซมโครงสร้างของไขมันง่ายที่เลียนแบบซองจดหมายไวรัส นี้ได้รับการดำเนินการโดยใช้ไลโปโซมที่ใช้สาร transfection ใช้ในเชิงพาณิชย์และ sulforhodamine B
(SRB) โหลดไลโปโซม ในระบบ transfection ตามประสิทธิภาพการทรานส์ fection และยีนนักข่าว (โปรตีนเรืองแสงสีเขียว GFP) ระดับการแสดงออกในเซลล์จะแสดงให้เห็นการทำงานของไลโปโซมที่สะท้อนให้เห็นถึงความสมบูรณ์ของโครงสร้างไลโปโซมภายใต้การรักษา curcumin ดังแสดงในรูปที่ 3A, บ่มผสมไลโปโซม / ดีเอ็นเอด้วยขมิ้นชัน (30 มม. ) ที่โดดเด่นยกเลิกการจีบประสิทธิภาพ transfection โดยรวมและลดสัญญาณ GFP ในเซลล์ transfected เมื่อเทียบกับตัวทำละลาย DMSO เซลล์ควบคุม ผลลัพธ์ที่สอดคล้องกันถูกตั้งข้อสังเกตในการเรืองแสง liposomes SRB โหลด เราสังเกตเห็นการเรืองแสงน้อยที่สุดเมื่อ SRB ถูกห่อหุ้มในไลโปโซม แต่ต่อไปนี้การหยุดชะงักเมมเบรนและรุ่นต่อมาของ SRB จากไลโปโซมปล่อยแสง (590 นาโนเมตรความยาวคลื่น) เป็นการตรวจสอบสามารถ liposomes รับการรักษาด้วย 30 มิลลิ curcumin แสดงระดับสูงของ SRB เรืองแสงกว่า liposomes DMSO รับการรักษาใน dicating ขมิ้นชันที่ก่อให้เกิดการรั่วไหลของสีเรืองแสง (รูปที่ 3B) เราสังเกตเห็นระดับที่สูงขึ้นของการรั่วไหล SRB จากไลโปโซมรับการรักษาด้วย 60 มิลลิ curcumin กว่าจากผู้ที่รับการรักษาด้วย 30 มิลลิเมตร curcumin
ไลโปโซมเป็นโครงสร้างเมมเบรนที่เรียบง่ายถูกใช้ในการเลียนแบบโครงสร้างซอง (รูปที่ 3A, และ B) จากนั้นเราจะดำเนินการต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 1 การรักษาของขมิ้นชัน ช่วยลดการติดเชื้อของห่อหุ้มไวรัส ( ฮา ) 4 หน่วยของ นิวคาสเซิล โรคไวรัส ( ndv ) ถึงแยกเป็นเจือจางขมิ้นชันหรือ DMSO ( การควบคุมยานพาหนะ ) และ การทดสอบการเกาะกลุ่ม ของเม็ดเลือดแดงยับยั้งกิจกรรมของขมิ้นชันคือการทดสอบโดยบ่มเพาะกับไก่ RBC ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ( ข ) เวลาของการทดสอบ นอกจากนี้ยาเสพติด :10 มม. ของขมิ้นชันหรือ DMSO ( ควบคุมตัวทำละลาย ) คืออยู่ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่จุดเวลาต่าง ๆ ของไวรัสไข้สมองอักเสบ ( jev ) หรือไวรัสไข้เลือดออก ( dv-ii ) การติดเชื้อ ( 200 พีเอฟยู ) , เช่น : ( 1 ) การรักษาแบบเต็มเวลา : ขมิ้นชันคือเพิ่มเวโรเซลล์ที่ติดเชื้อและรวมการทำงานก่อนตลอด เวลาของการติดเชื้อ ( 2 ) ร่วมการรักษา :ขมิ้นชันผสมกับการติดเชื้อไวรัสในอาหารเพิ่มพร้อมกันกับเซลล์ และซ้ายบนเซลล์ตลอด ; ( 3 ) หลังจากรายการ : ขมิ้นชันถูกเพิ่มไปยังเซลล์ที่ 2 HPI และยังคงอยู่ตลอดเวลาของการติดเชื้อ หินปูนขนาดเล็กของ dv-ii ถูกระบุโดยแอโรว์เฮด ผลลัพธ์ที่สอดคล้องกันคือ สังเกตได้จากอย่างน้อยสามการทดลองที่เป็นอิสระ
ดอย : 10.1371 / วารสาร โผน . 0062482 g001
.jev และการ dv-ii ไวรัส PRV 30 มม. ของเคอร์คิวมินขอยับยั้งการเกิดจุลินทรีย์
เพื่อตรวจสอบว่าผลกระทบของการติดเชื้อเฉพาะไวรัสกับซอง , nonenveloped ไวรัสเอนเทอโรไวรัส 71 ( ev71 ) ถูกรวมอยู่ในชุดเดียวกันกับแบบทดสอบ ในการวิเคราะห์เปรียบเทียบของ ev71 พีเอฟยู , 2000 ,ไวรัสไข้หวัดใหญ่และ jev ถูกบ่มที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของเคอร์คิวมินและไวรัสสามารถถูกประเมินโดยใช้จุลินทรีย์ แบคทีเรีย ในทางตรงกันข้ามกับการสังเกตใน iav และอื่น ๆที่ห่อหุ้มไวรัส ( PRV jev และ dv-ii ) ev71 การสะสมคราบจุลินทรีย์ที่ยังคงได้รับผลกระทบจากขมิ้นชันที่วิเคราะห์ความเข้มข้น ( รูปที่ 2B ) และผลการยับยั้งที่คล้ายกันพบว่าใน iav และ jev ( รูป
2C )ที่สำคัญปัญหาความสมบูรณ์ของไลโปโซม
เนื่องจากขมิ้นชันมีความสัมพันธ์กับฟังก์ชันโปรตีนฮา 3 enveloped ไวรัส ( 2 iav ชนิดย่อย และ ndv ) และยังสามารถ 4 enveloped ไวรัส เรายังประเมินผลของเคอร์คิวมินทำบนความสมบูรณ์ของไวรัสซองใช้ไลโปโซม , ง่ายและโครงสร้างที่เลียนแบบซองจดหมายไวรัส .นี้มีการใช้ในเชิงพาณิชย์ของไลโปโซม นักลงทุนจากสารเคมีและซัลฟอร์โฮดามีนบี
( SRB ) - ไลโปโซมโหลด สำหรับใช้ในระบบ , trans - ประสิทธิภาพการเคลื่อนไหวย้ายโครงสร้างกระดูกเป็นชิ้นใหญ่และนักข่าว ( สีเขียวเรืองโปรตีน ; ยีน GFP ) ระดับการแสดงออกในเซลล์จะแสดงการทำงานของไลโปโซม ที่สะท้อนให้เห็นถึงความสมบูรณ์ของโครงสร้างของไลโปโซมในขมิ้นชันรักษาดังแสดงในรูปที่ 3A , บ่มส่วนผสมไลโปโซม / ดีเอ็นเอกับเคอร์คิวมิน ( 30 มม. ) อย่างเด่นชัด เดอ - ยับประสิทธิภาพสำหรับโดยรวมและลดสัญญาณ transfected GFP ในเซลล์เมื่อเทียบกับ DMSO สารละลายเซลล์คุม ผลลัพธ์ที่สอดคล้องกันที่พบในหลอดไป - โหลดตัว . เราพบเรืองแสงน้อยที่สุดเมื่อไปถูกบรรจุในไลโปโซม . อย่างไรก็ตามต่อไปนี้การเยื่อและต่อมาออกไปจากตัวเรืองแสงออก ( 590 nm ความยาวคลื่น ) คือตรวจสอบ - สามารถ ไลโปโซมได้รับขมิ้นชัน 30 มม. สามารถแสดงระดับที่สูงขึ้นของการรักษามากกว่า DMSO ไลโปโซมใน dicating ที่สำคัญก่อให้เกิดการรั่วไหลของสีย้อมเรืองแสง ( รูปที่ 3B )เราสังเกตระดับที่สูงขึ้นของ SRB รั่วจากไลโปโซมได้รับขมิ้นชัน 60 มม. กว่าจากผู้ปฏิบัติกับขมิ้นชัน 30 mm .
ไลโปโซม เป็นโครงสร้างเยื่อง่ายถูกใช้เพื่อเลียนแบบห่อหุ้มโครงสร้าง ( รูปที่ 3A , และ B ) จากนั้นเราก็ทำการเพิ่มเติม