2.3. SamplingThe fermentation exper

2.3. Sampling

The fermentation experiment was carried out in 30 parallel pots, opening 3 pots at each sampling time. Sampling was done at Days 0, 2, 5, 7, 9, 14, 21, 28, 42 and 56; pH was measured immediately after opening the fermentation pots. Thereafter, fresh samples (containing cabbage strips with fermentation liquid) were taken for microbiological analysis and for extraction of volatiles and ABG content. Remaining samples were frozen with liquid nitrogen, dried in a freeze dryer, milled to fine powder and stored in a dessicator in the dark until glucosinolate analyses.

2.4. pH measurement and microbial analysis

The pH was measured directly from the fermentation pot containing shredded cabbage and juice by a pH meter (WTW Inolab IDS Multi 9420). Three fermentation pots were opened at each time point and each pot was measured three times.

For microbial analysis, five different media were applied for measuring growth by enumeration of colony-forming units (cfu) per g sauerkraut (drained weight). Total mesophilic, aerobic bacteria were determined on plate count (PC) agar, total lactic acid bacteria (LAB) on DeMan–Rogosa–Sharp (MRS) agar (De Man et al., 1960), peroxide-producing LAB on MRS agar supplemented with Prussian Blue (MRS-P) (Saito, Seki, Iida, Nakayama, & Yoshida, 2007), Enterobacteriaceae on violet red bile dextrose (VRBD) agar ( Mossel, Mengerink, & Scholts, 1962), and yeasts on yeast extract glucose chloramphenicol (YGC) agar. For each sample, 10 g of sauerkraut were filled into sterile stomacher bags and after mixing with 90 mL sterile Ringer’s solution homogenised for 1 min in a stomacher (Bagmixer 400; Interscience, St Nom, France) set at level 4. Appropriate decimal dilutions in ¼ strength Ringer’s solution were made and 0.1 mL of the dilutions were plated onto agar plates in duplicates. After aerobic incubation at 30 °C for 72 h (PC), 25 °C for 72 h (YGC), 37 °C for 24 h (VRBD), and anaerobic incubation at 30 °C for 72 h (MRS and MRS-PB), respectively, cfu were counted.

For 16S rDNA sequencing, genomic DNA was extracted from cell material of purified single colonies with the aid of the ZR Bacterial/Fungal DNA Mini Kit (ZymoResearch, Freiburg, Germany) following the protocol of the supplier. Using primers 16Suni_27F and 16Suni_1492R (Lane, 1991), 16S rDNA was amplified by polymerase chain reaction (PCR) as follows: (1) 98 °C for 3 min; (2) 98 °C for 10 s; (3) 53 °C for 30 s; (4) 72 °C for 90 s; (5) 72 °C for 10 min. After completion of the program, samples were stored at 4 °C. PCR products were purified by Nucleospin® gel and PCR clean-up (Macherey–Nagel, Düren, Germany) following the protocol of the supplier. DNA sequences were determined at Eurofins Genomics (Ebersberg, Germany) using the same primers as for PCR. DNA sequences were subjected to BlastN analyses at the NCBI web site for species identification (Altschul, Gish, Miller, Myers, & Lipman, 1990).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การสุ่มตัวอย่างทดลองหมักถูกดำเนินในหม้อขนาน 30 เปิดหม้อ 3 ในแต่ละครั้งสุ่มตัวอย่าง สุ่มตัวอย่างภายในวันที่ 0, 2, 5, 7, 9, 14, 21, 28, 42 และ 56 ค่า pH ที่วัดทันทีหลังจากเปิดหม้อหมัก หลัง ตัวอย่างสด (ประกอบด้วยแถบกะหล่ำปลีกับของเหลวหมัก) ได้นำ การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยา และสกัด volatiles และ ABG เนื้อหา ตัวอย่างที่เหลือถูกแช่แข็ง ด้วยไนโตรเจนเหลว แห้งในการหยุดการทำเป่า ปลายให้ฝุ่นละออง และเก็บไว้ใน dessicator ในมืดจนวิเคราะห์ glucosinolate2.4 การวัดค่า pH และวิเคราะห์จุลินทรีย์PH ที่วัดได้โดยตรงจากหม้อหมักประกอบด้วยกะหล่ำปลีหั่นและน้ำ ด้วยเครื่องวัด pH (หลายรหัส Inolab WTW 9420) เปิดหม้อหมัก 3 จุดแต่ละครั้ง และแต่ละหม้อมีวัดสามครั้งสำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ สื่อต่าง ๆ ห้าถูกนำไปใช้สำหรับวัดการเจริญเติบโต โดยการแจงนับโคโลนีขึ้นหน่วย (cfu) ต่อ g sauerkraut (บรรจุ) รวม mesophilic แบคทีเรียแอโรบิกถูกกำหนดบนแผ่น agar จำนวน (พีซี) แบคทีเรียกรดแลคติรวม (LAB) ใน agar DeMan – Rogosa – คม (นาง) (เดคนร้อยเอ็ด al., 1960), เพอร์ออกไซด์ผลิตแล็บบน MRS agar เสริม ด้วย Prussian Blue (MRS-P) (Saito กิ อิอิดะ นะกะยะมะ และ Yoshida, 2007), Enterobacteriaceae ในน้ำดีสีแดงอมม่วง agar ขึ้น (VRBD) (มอสเซล Mengerink, & Scholts, 1962), และ yeasts เชื้อยีสต์สกัด agar chloramphenicol (YGC) กลูโคส สำหรับแต่ละตัวอย่าง g 10 ของ sauerkraut เต็มไป เป็นถุงใส่แผงประดับหน้าอก และหลัง จากผสม ด้วยโซลูชั่น 90 mL กอซ Ringer ของ homogenised ใน 1 นาทีในแผงประดับหน้าอก (Bagmixer 400 Interscience เซนต์นม ฝรั่งเศส) ได้ระดับ 4 ทำ dilutions ทศนิยมที่เหมาะสมในโซลูชันของ Ringer ¼แรง และ 0.1 mL ของ dilutions ที่ถูกเคลือบบนแผ่น agar ในสำเนา หลังจากบ่มแอโรบิกที่ 30 ° C สำหรับ h 72 (พีซี), 25 ° C สำหรับ h 72 (YGC), 37 ° C ใน 24 ชม (VRBD), และคณะทันตแพทยศาสตร์ไม่ใช้ที่ 30 ° C สำหรับ h 72 (นางและนาง PB), ตามลำดับ cfu นับได้สำหรับ 16S rDNA ลำดับ genomic DNA ที่สกัดจากวัสดุเซลล์ของอาณานิคมเดียวบริสุทธิ์ด้วยความช่วยเหลือของ ZR แบคทีเรีย/Fungal DNA มินิชุดสินค้า (ZymoResearch, Freiburg เยอรมนี) ตามโพรโทคอลของซัพพลายเออร์ ใช้ไพรเมอร์ 16Suni_27F และ 16Suni_1492R (Lane, 1991), 16S rDNA ถูกขยาย โดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) เป็นดังนี้: (1) 98 ° C สำหรับ 3 นาที (2) 98 ° C 10 s (3) 53 ° C สำหรับ 30 s (4) 72 ° C สำหรับ 90 s (5) 72 ° C สำหรับ 10 นาที งานของโปรแกรม ตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ผลิตภัณฑ์ PCR ได้บริสุทธิ์ โดยเจ Nucleospin ®และ PCR ล้าง (Macherey – Nagel, Düren เยอรมนี) ตามโพรโทคอลของซัพพลายเออร์ ลำดับดีเอ็นเอถูกกำหนดที่ Eurofins Genomics (Ebersberg เยอรมนี) โดยใช้ไพรเมอร์แบบเดียวกับ PCR ลำดับดีเอ็นเออยู่ภายใต้การวิเคราะห์ BlastN NCBI เว็บไซต์สำหรับการระบุสายพันธุ์ (Altschul, Gish มิลเลอร์ ไมเออร์ และ Lipman, 1990)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การสุ่มตัวอย่างการทดลองหมักได้ดำเนินการในวันที่ 30 หม้อขนานเปิด 3 กระถางในแต่ละช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่าง การเก็บตัวอย่างที่ได้กระทำในวันที่ 0, 2, 5, 7, 9, 14, 21, 28, 42 และ 56; วัดค่า pH ทันทีหลังจากเปิดหม้อหมัก หลังจากนั้นกลุ่มตัวอย่างสด (ที่มีแถบกะหล่ำปลีด้วยของเหลวหมัก) ถูกนำสำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาและการสกัดสารระเหยและเนื้อหา ABG ตัวอย่างที่เหลือถูกแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลวแห้งในเครื่องแช่แข็ง, บดเป็นผงละเอียดและเก็บไว้ใน dessicator ในที่มืดจน glucosinolate วิเคราะห์. 2.4 วัดค่า pH จุลินทรีย์และการวิเคราะห์ค่าpH วัดโดยตรงจากหม้อหมักบรรจุหั่นกะหล่ำปลีและน้ำผลไม้ตามมิเตอร์ค่า pH (WTW Inolab หลาย IDS 9420) สามหม้อหมักถูกเปิดในแต่ละจุดแต่ละเวลาและหม้อวัดสามครั้ง. สำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ห้าสื่อที่แตกต่างถูกนำไปใช้ในการวัดการเจริญเติบโตโดยการแจงนับอาณานิคมของหน่วยงานขึ้นรูป (cfu) ต่อกรัมกะหล่ำปลีดอง (น้ำหนักสะเด็ดน้ำ) mesophilic รวม, แบคทีเรียแอโรบิกได้รับการพิจารณาในการนับจาน (PC) วุ้นรวมแบคทีเรียกรดแลคติก (LAB) บน Deman-Rogosa ชาร์ป (MRS) วุ้น (เดอแมน et al., 1960), เปอร์ออกไซด์ที่ผลิต LAB ในอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS เสริม ที่มีสีฟ้าปรัสเซีย (MRS-P) (ไซโตะเซกิอิดะ, ยามาและโยชิดะ, 2007) Enterobacteriaceae ในสีม่วงองุ่นน้ำดีสีแดง (VRBD) วุ้น (มอสเซล, Mengerink และ Scholts, 1962) และยีสต์ในกลูโคสสารสกัดจากยีสต์ chloramphenicol (YGC) วุ้น สำหรับตัวอย่างแต่ละ 10 กรัมกะหล่ำปลีดองที่เต็มไปลงในถุง Stomacher ผ่านการฆ่าเชื้อและหลังการผสมกับ 90 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อแก้ปัญหา Ringer ของ homogenised เวลา 1 นาทีใน Stomacher (ที่ Bagmixer 400; Interscience เซนต์ Nom ฝรั่งเศส) กำหนดไว้ที่ระดับ 4 เจือจางทศนิยมที่เหมาะสมใน ¼ความแข็งแรงของการแก้ปัญหา Ringer ถูกสร้างขึ้นมาและ 0.1 มิลลิลิตรเจือจางที่ถูกเคลือบลงบนแผ่นวุ้นในรายการที่ซ้ำกัน หลังจากการบ่มแอโรบิกที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง (PC) 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง (YGC) อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง (VRBD) และบ่มเพาะกายที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง (MRS- และ MRS-PB ) ตามลำดับนับ cfu. สำหรับลำดับ 16S rDNA ดีเอ็นเอจีโนมถูกสกัดจากวัสดุเซลล์เดียวอาณานิคมบริสุทธิ์ด้วยความช่วยเหลือของ ZR แบคทีเรีย / เชื้อราดีเอ็นเอ Mini Kit (ZymoResearch, Freiburg, เยอรมนี) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลของซัพพลายเออร์ การใช้ไพรเมอร์และ 16Suni_27F 16Suni_1492R (Lane, 1991), 16S rDNA ถูกขยายโดยวิธี Polymerase chain reaction (PCR) ดังต่อไปนี้ (1) 98 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาที; (2) 98 ° C เป็นเวลา 10 วินาที; (3) 53 ° C เป็นเวลา 30 วินาที; (4) 72 ° C เป็นเวลา 90 วินาที (5) 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที หลังจากเสร็จสิ้นการโปรแกรมตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วยเจลNucleospin® PCR และสะอาดขึ้น (Macherey-แจคกี้Düren, เยอรมนี) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลของซัพพลายเออร์ ลำดับดีเอ็นเอที่ได้รับการพิจารณา Eurofins ฟังก์ชั่น (Ebersberg, เยอรมนี) โดยใช้ไพรเมอร์เดียวกับวิธี PCR ลำดับดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้วิเคราะห์กล่าวหาได้ที่เว็บไซต์ NCBI สำหรับการระบุสายพันธุ์ (Altschul กิชมิลเลอร์ไมเออร์สและลิปแมน, 1990)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3
ระยะเวลาการทดลองในกระถาง 30 ขนาน )
, เปิด 3 กระถางที่แต่ละคนเวลา สุ่มตัวอย่างในวันที่ 0 , 2 , 5 , 7 , 9 , 14 , 21 , 28 , 42 และ 56 ; pH วัดทันทีหลังจากเปิดหมักหม้อ หลังจากนั้นตัวอย่างใหม่ ( ที่มีกะหล่ำปลีแถบกับน้ำหมัก ) นำมาวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาและการสกัดสารระเหยและ ABG ) ตัวอย่างที่เหลือถูกแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลว แห้งแช่แข็งไว้ในเครื่องอบแห้งบดผงละเอียดและไว้ในที่มืดจนกว่าเดสิ กเคเตอร์ในการวิเคราะห์กลูโคซิโนเลต

2.4 . เครื่องวัดและ

การวิเคราะห์จุลินทรีย์วัด pH โดยตรงจากหม้อกะหล่ำปลีหั่นฝอย น้ำส้มที่หมักโดยเครื่องวัด ( wtw inolab รหัสหลาย 9420 ) หมักหม้อสามถูกเปิดในแต่ละจุดเวลา และแต่ละหม้อวัดสามครั้ง

สำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ 5 สื่อต่าง ๆที่ใช้สำหรับการวัดการเติบโต โดยการสร้างหน่วยอาณานิคม ( CFU ) / กรัมกะหล่ำปลีดอง ( เนื้อน้ำหนักทั้งหมดมีแอโรบิค แบคทีเรียซึ่งนับจาน ( PC ) วุ้นรวมแบคทีเรียผลิตกรดแลกติกใน rogosa –คมดีเมิน ) ( นาง ) ( de Man et al . , 1960 ) , เปอร์ออกไซด์ผลิตห้องแล็บ MRS agar ที่เติมยาสีน้ำเงิน ( mrs-p ) ( ไซโตะเซกิดะ นากายาม่าซัง , , &โยชิดะ , 2007 ) , สีม่วงแดงเดกซ์โทรสผิดเพี้ยนในน้ำดี ( vrbd ) วุ้น ( มอ ซล mengerink & , , scholts , 1962 )สารสกัดจากยีสต์และยีสต์ในกลูโคสคลอแรมเฟนิคอล ( ygc ) วุ้น สำหรับแต่ละตัวอย่าง 10 กรัมกะหล่ำปลีเต็มลงในถุงแผงประดับหน้าอกที่เป็นหมันและหลังจากที่ผสมกับ 90 ml เป็นหมันเป็นโซลูชั่น homogenised 1 นาทีในแผงประดับหน้าอก ( bagmixer 400 ; interscience เซนต์ชื่อ , ฝรั่งเศส ) ไว้ที่ระดับ 4 วิธีการที่เหมาะสมใน¼ทศนิยมแรงสั่นของโซลูชั่นที่เป็น 01 มิลลิลิตรของวิธีการชุบลงในวุ้นมีแผ่นซ้ำกัน หลังจากแอโรบิกบ่มที่ 30 °องศาเซลเซียส นาน 72 ชั่วโมง ( PC ) , 25 ° C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง ( ygc ) 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ( vrbd ) และถังบ่มที่ 30 องศา C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง ( นาง และ mrs-pb ) ตามลำดับ ปริมาณเชื้อก็นับ

สำหรับ 16S rDNA จัดลำดับสกัดดีเอ็นเอจากเซลล์วัสดุบริสุทธิ์ของอาณานิคมเดียวด้วยความช่วยเหลือของเชื้อแบคทีเรีย / เชื้อรา ZR ชุด mini DNA ( zymoresearch Freiburg , เยอรมนี ) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลของซัพพลายเออร์ ใช้ไพรเมอร์และ 16suni_27f 16suni_1492r ( Lane , 1991 ) , 16S rDNA ถูกขยายโดยวิธีพีซีอาร์ ( PCR ) ดังนี้ ( 1 ) 98 ° C เป็นเวลา 3 นาที ( 2 ) 98 ° C 10 s ; ( 3 ) 53 ° C 30 s ;( 4 ) 72 ° C 90 s ; ( 5 ) 72 ° C 10 นาทีหลังจากเสร็จสิ้นโปรแกรม ตัวอย่าง เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา ซึ่งผลิตภัณฑ์มีความบริสุทธิ์และความสะอาด โดย nucleospin ®เจล PCR ( macherey –นาเกล , D üเรน , เยอรมนี ) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลของซัพพลายเออร์ ลำดับดีเอ็นเอวิเคราะห์ที่ eurofins จีโนมิกส์ ( ebersberg , เยอรมนี ) โดยใช้ไพรเมอร์เช่นเดียวกับ PCRลำดับดีเอ็นเอจะถูก blastn วิเคราะห์ที่เว็บไซต์ ncbi สำหรับการระบุชนิด ( แอลเชิลกิช , มิลเลอร์ , ไมเออร์ , & Lipman , 2533 )