5.6. Analysis of cytosolic paramete

5.6. Analysis of cytosolic parameters in dying cells by immunoblotting
To distinguish between apoptosis and necroptosis, several biochemical
cytosolic events can be analyzed, such as activation of
caspases, proteolytic cleavage of Bid, PARP or ICAD, release of certain
mitochondrial proteins, or use of a new biochemical marker
such as RIPK1/3 phosphorylation. Typically, activation of executioner
caspases and cleavage of their substrates (such as PARP or
ICAD) is analyzed first. If caspase activation is observed, one can
subsequently analyze the mitochondrial contribution by checking
Bid proteolytic activation, tBid translocation, and release of mitochondrial
proteins such as cytochrome c, AIF, HTRA2/Omi and
Endonuclease G. To detect the release of mitochondrial proteins
in the cytosol, the organelle and cytosolic fractions should be
separated without causing release of cytochrome c from the mitochondria
during organelle preparation. It is advisable to use a mild
detergent, digitonin, which permeabilizes the plasma membrane
but leaves the mitochondria and lysosomes intact.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5.6 การวิเคราะห์พารามิเตอร์ cytosolic ในเซลล์ตายโดย immunoblottingแยกแยะ apoptosis และ necroptosis หลายชีวเคมีเหตุการณ์ cytosolic สามารถวิเคราะห์ได้ เช่นเรียกใช้caspases ปริ proteolytic ประมูล PARP หรือ ICAD ปล่อยของบางโปรตีน mitochondrial หรือการใช้เครื่องหมายชีวเคมีใหม่เช่น phosphorylation RIPK1/3 เปิดใช้งานโดยทั่วไป ของเพชฌฆาตcaspases และแนวแตกเรียบของพื้นผิวของพวกเขา (เช่น PARP หรือวิเคราะห์ ICAD) ก่อน ถ้าสังเกตเปิด caspase หนึ่งสามารถมาวิเคราะห์สัดส่วน mitochondrial โดยตรวจสอบเสนอราคาเปิด proteolytic การสับเปลี่ยน tBid และปล่อยของ mitochondrialโปรตีนเช่น cytochrome c, AIF, HTRA2/โอะ และEndonuclease กรัม การตรวจปล่อยของ mitochondrial โปรตีนในไซโตซอล ออร์แกเนลล์และเศษ cytosolic ควรแยกให้ออกของ cytochrome c จาก mitochondriaในระหว่างการเตรียมออร์แกเนลล์ จึงแนะนำให้ใช้ไมลด์ผงซักฟอก digitonin ที่ permeabilizes ในพลาสมาเมมเบรนแต่ใบ mitochondria และ lysosomes เหมือนเดิม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5.6 การวิเคราะห์พารามิเตอร์ cytosolic ในเซลล์ตายโดย immunoblotting
ในการแยกแยะความแตกต่างระหว่างการตายและ necroptosis หลายทางชีวเคมี
เหตุการณ์ cytosolic สามารถวิเคราะห์ได้เช่นกระตุ้นการทำงานของ
caspases แตกแยกย่อยโปรตีนของการเสนอราคา, PARP หรือ ICAD ปล่อยของบาง
โปรตีนยลหรือการใช้ใหม่ เครื่องหมายทางชีวเคมี
เช่น RIPK1 / 3 phosphorylation โดยปกติการทำงานของเพชฌฆาต
caspases และความแตกแยกของพื้นผิวของพวกเขา (เช่น PARP หรือ
ICAD) มีการวิเคราะห์ครั้งแรก หากยืนยันการใช้งาน caspase เป็นที่สังเกตหนึ่งสามารถ
วิเคราะห์ต่อมามีส่วนร่วมยลโดยการตรวจสอบ
ยืนยันการใช้งานโปรตีเอสเสนอราคาโยกย้าย tBid และปล่อยของยล
โปรตีนเช่น cytochrome C, AIF, HTRA2 / ลางร้ายและ
Endonuclease G. เพื่อตรวจสอบการเปิดตัวของโปรตีนยล
ใน เซลล์, เนลล์และเศษส่วน cytosolic ควรจะ
แยกออกจากกันได้โดยไม่ก่อให้เกิดการปล่อยของ cytochrome C จาก mitochondria
ในระหว่างการเตรียมเนลล์ จะแนะนำให้ใช้อ่อน
ผงซักฟอก digitonin ซึ่ง permeabilizes เยื่อหุ้ม
แต่ใบ mitochondria และ lysosomes เหมือนเดิม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5.6 . การวิเคราะห์ตัวแปร cytosolic ตายเซลล์โดยวิธี
ที่จะแยกแยะระหว่างการสนับสนุน necroptosis เหตุการณ์ cytosolic ชีวเคมี
หลายสามารถวิเคราะห์ได้ เช่นการเปิดใช้งาน
caspases ความแตกแยกระประมูล parp หรือ icad ปล่อยบาง
mitochondrial โปรตีน หรือใช้ใหม่ทางชีวเคมี เช่น เครื่องหมาย
ripk1 / 3 กรุงเทพมหานคร . โดยทั่วไปแล้ว การเปิดใช้งานของเพชฌฆาต
caspases และความแตกแยกของพื้นผิวของพวกเขา ( เช่น parp หรือ
icad ) มีการวิเคราะห์ก่อน ถ้าแคสเปสกระตุ้นเป็นที่สังเกตและวิเคราะห์ผลงานได้

ประมูลลโดยการตรวจสอบโปรตีนกระตุ้น tbid โยกย้าย และปลดปล่อยยล
โปรตีน เช่น ไซโตโครม ซี เกิด htra2 / , โอมิและ
เอนโดนิวคลีเอสกรัมเพื่อตรวจสอบรุ่นของโปรตีนในไซโตซอลยล
,ส่วนออร์แกเนลล์และเศษส่วน cytosolic ควรจะ
แยกกันโดยไม่ก่อให้เกิดการปล่อยมั่มจากไมโตคอนเดรีย
ในระหว่างการเตรียมออร์แกเนลล์ . ก็จะแนะนำให้ใช้อ่อน
ผงซักฟอก , ดิจิโทนิน ซึ่ง permeabilizes พลาสมาเมมเบรน
แต่ใบ และ lysosomes ) เหมือนเดิม