The lcc1 gene coding for the laccas

The lcc1 gene coding for the laccase from Trametes versicolor DSM11269 was cloned into the genome of
Yarrowia lipolytica using either single or multiple integration sites. The levels of the recombinant laccase
activity secreted in the culture media were 0.25 and 1 U ml1 for single and multiple integrations, respectively.
The strain with a single integration was successfully used to express variant libraries which were
screened on ABTS substrate. The strain encoding the double mutant L185P/Q214K (rM4A) showed a sixfold
enhancement in secreted enzyme activity. The catalytic efficiency of the purified rM-4A laccase was
respectively increased 2.4- and 2.8-fold towards ABTS and 2,6-dimethoxyphenol, compared to the rWT.
Culture supernatants containing either rWT or rM-4A catalyzed the almost complete decolorization of an
Amaranth solution (70 nM s1
). Taken together, our results open new perspectives for the use of Y. lipolytica
as a molecular evolution platform to engineer laccases with improved properties.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยีน lcc1 รหัสสำหรับ laccase จาก Trametes versicolor DSM11269 ถูกโคลนเข้าไปในกลุ่มของใช้ครั้งเดียวหรือหลายไซต์รวม lipolytica Yarrowia ระดับของ recombinant laccasesecreted สื่อวัฒนธรรมกิจกรรมได้ 1 U ml1 สำหรับเดี่ยว และหลายการรวม และ 0.25 ตามลำดับพันธุ์กับรวมเดียวสำเร็จใช้ไลบรารีย่อยที่ถูกแสดงฉายบนพื้นผิวรเรียน พันธุ์ mutant คู่เข้าพบ Q214K L185P (rM4A) sixfoldเพิ่มประสิทธิภาพในกิจกรรมของเอนไซม์ secreted มีประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยาของ laccase บริสุทธิ์ rM-4Aตามลำดับเพิ่มขึ้น 2.4 - และ 2.8 - fold รเรียนและ 2,6 dimethoxyphenol การเปรียบเทียบกับ rWTSupernatants วัฒนธรรมประกอบด้วย rWT หรือ rM-4A catalyzed บำบัดเกือบสมบูรณ์ของการอมาแรนท์โซลูชัน (70 nM s1). ปวง ผลของเราเปิดมุมมองใหม่ในการใช้งานของ Y. lipolyticaเป็นแพลตฟอร์มวิวัฒนาการระดับโมเลกุลเพื่อวิศวกร laccases มีคุณสมบัติดีขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เข้ารหัสยีน lcc1 สำหรับแลคเคสจาก Trametes versicolor DSM11269 เป็นโคลนเข้าไปในจีโนมของ
Yarrowia lipolytica โดยใช้เว็บไซต์บูรณาการเดียวหรือหลาย ระดับของแลคเคส recombinant
กิจกรรมหลั่งในสื่อวัฒนธรรมเป็น 0.25 และ 1 U ML1 สำหรับการผนวกรวมเดียวและหลายตามลำดับ.
สายพันธุ์ที่มีบูรณาการที่ได้รับการใช้ประสบความสำเร็จในการแสดงห้องสมุดตัวแปรที่ถูกฉายบนพื้นผิว ABTS
สายพันธุ์ที่กลายพันธุ์เข้ารหัสคู่ L185P / Q214K (rM4A)
แสดงให้เห็นว่าหกการเพิ่มประสิทธิภาพในการทำงานของเอนไซม์หลั่ง ประสิทธิภาพการเร่งปฏิกิริยาของแลคเคส RM-4A
บริสุทธิ์ได้รับการเพิ่มขึ้นตามลำดับและ2.4- 2.8 เท่าต่อ ABTS และ 2,6-dimethoxyphenol เมื่อเทียบกับ RWT.
supernatants วัฒนธรรมที่มีทั้ง RWT หรือ RM-4A
เร่งลดสีเกือบเสร็จสมบูรณ์ของแรนท์วิธีการแก้ปัญหา (70 นาโนเมตร
s1) ที่ร่วมกันผลของเราเปิดมุมมองใหม่ ๆ สำหรับการใช้ lipolytica
วายเป็นแพลตฟอร์มวิวัฒนาการโมเลกุลเอนไซม์แลคเคสวิศวกรที่มีคุณสมบัติที่ดีขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ lcc1 ยีนแลคเคสจาก trametes รหัสสำหรับโรค dsm11269 ถูกโคลนเข้าไปในจีโนมของ
yarrowia lipolytica ใช้เดียวหรือหลายเว็บไซต์รวม ระดับของกิจกรรม -
แบบหลั่งในวัฒนธรรมสื่อคือ 0.25 และ 1 u ml1 สำหรับเดียวและหลาย integrations
)ความเครียดกับการรวมเดียวได้ใช้แสดงรูปห้องสมุดที่
ฉายใน Abbr พื้นผิว สายพันธุ์คู่ q214k l185p / กลายพันธุ์การเข้ารหัส ( rm4a ) พบว่ามีการหลั่งของเอนไซม์ในค.ศ. 1940 หก
. ประสิทธิภาพการทำให้ rm-4a แลคเคสเพิ่มขึ้น 2.4 ตามลำดับได้
- 2.8-fold ต่อ และ 2,6-dimethoxyphenol Abbr ,เมื่อเทียบกับ rwt .
วัฒนธรรม supernatants ที่มีให้ rwt หรือ rm-4a เร่งการเกือบสมบูรณ์ของ
บานไม่รู้โรย โซลูชั่น ( 70 nm S1
) ถ่ายด้วยกันผลของเราเปิดมุมมองใหม่สำหรับการใช้ Y lipolytica
เป็นแพลตฟอร์ม laccases วิวัฒนาการโมเลกุลวิศวกรที่มีคุณสมบัติดีขึ้น