3.3 Kinetics of inhibition of VEGF

3.3 Kinetics of inhibition of VEGF activity by EGCG
and dp4
In order to investigate the kinetics of VEGF inhibition by the
polyphenols, VEGF was incubated with EGCG (62.5 nM) or
dp4 (200 nM) for extended periods of time (1–270 min and
1–120 min, respectively) after which the VEGFR-2-activating
activity of VEGF was determined by treating HUVECs with
the polyphenol-treated VEGF (5 min). The data clearly shows
that EGCG-mediated inhibition of VEGF activity is time dependent
(Fig. 3A), which is not consistent with the very rapid
(

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.3 Kinetics of inhibition of VEGF activity by EGCGand dp4In order to investigate the kinetics of VEGF inhibition by thepolyphenols, VEGF was incubated with EGCG (62.5 nM) ordp4 (200 nM) for extended periods of time (1–270 min and1–120 min, respectively) after which the VEGFR-2-activatingactivity of VEGF was determined by treating HUVECs withthe polyphenol-treated VEGF (5 min). The data clearly showsthat EGCG-mediated inhibition of VEGF activity is time dependent(Fig. 3A), which is not consistent with the very rapid(<1 s) time scales over which classic freely reversible enzymesubstratecomplex equilibria are formed. Further, the EGCGdata fitted very well to a two-phasemodel (two-phase decay) inwhich an initial fast exponential decay phase (KFast = 0.1184± 0.02 319 min−1) was followed by a slow exponential decayphase (KSlow = 0.003505 ± 0.0007308 min−1). Similar resultswere obtained with dp4 but with different rates (Fig. 3B).3.4 In-silico studies of the binding of EGCG and dp4to VEGFEGCG was predicted to bind into a groove at the pole ofVEGF (Fig. 4A) with a binding affinity of −8.1 kcal/mol. dp4was predicted to bind to a region of VEGF that is adjacentto the groove that EGCG is predicted to occupy (Fig. 4B),with an affinity of −8.2 kcal/mol.We also identified potentialresidues on VEGF that EGCG or dp4 may interact with basedon the predicted most energetically favourable binding sites(Table 1). EGCG was predicted to interact with 13 residues on
both subunits of VEGF and form hydrogen bonds with three
residues (ASP34, LYS48 and SER50). dp4 was predicted to
interact with 15 residues of VEGF including five residues via
hydrogen bonds (SER50, ASN62, ASP63, GLU64, GLU67,
CYS68).
3.5 Effect of polyphenols on VEGF binding to
endothelial cells
The inhibitory effects of the polyphenols on the VEGFR-2
activity of VEGF may, or may not be, a consequence of the
polyphenol preventing binding of VEGF to VEGFR-2 on the
endothelial cells. We explored the effects of the polyphenol
treatments of VEGF on its ability to bind to the surface of
HUVECs. Using flow cytometry, we show that dp4 treatment

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.3 จลนศาสตร์การยับยั้งของกิจกรรม VEGF โดย EGCG
และ dp4
เพื่อที่จะตรวจสอบจลนศาสตร์การยับยั้ง VEGF โดย
โพลีฟีน VEGF ถูกบ่มด้วย EGCG (62.5 นาโนเมตร) หรือ
dp4 (200 นาโนเมตร) สำหรับการขยายระยะเวลา (1-270 นาที
1-120 นาทีตามลำดับ) หลังจากที่ VEGFR-2-การเปิดใช้งาน
การทำงานของ VEGF ถูกกำหนดโดยการรักษา HUVECs กับ
VEGF โพลีฟีนได้รับการรักษา (5 นาที) ข้อมูลที่แสดงให้เห็นชัดเจน
ว่าการยับยั้ง EGCG สื่อของกิจกรรม VEGF เป็นเวลาที่ขึ้นอยู่กับ
(รูป. 3A) ซึ่งไม่สอดคล้องกับรวดเร็วมาก
(<1 s) เครื่องชั่งน้ำหนักในช่วงเวลาที่คลาสสิกย้อนกลับได้อย่างอิสระ enzymesubstrate
สมดุลที่ซับซ้อนที่เกิดขึ้น นอกจากนี้ EGCG
ข้อมูลที่ติดตั้งเป็นอย่างดีเพื่อสอง phasemodel (ผุสองเฟส) ใน
ที่เริ่มต้นขั้นตอนการสลายตัวได้อย่างรวดเร็วชี้แจง (KFast = 0.1184
± 0.02 319 นาที 1) ตามมาด้วยการสลายตัวช้าชี้แจง
ขั้นตอน (KSlow = 0.003505 ± 0.0007308 นาที 1) ผลที่คล้ายกัน
กับที่ได้รับ dp4 แต่มีอัตราที่แตกต่างกัน (รูป. 3B).
3.4 ใน silico ศึกษาผูกพันของ EGCG และ dp4
เพื่อ VEGF
EGCG เป็นที่คาดการณ์ในการผูกเข้าไปในร่องที่ขั้วของ
VEGF (รูป. 4A) ด้วย ความสัมพันธ์ผูกพันของ -8.1 kcal / mol dp4
ได้รับการคาดการณ์ว่าจะผูกกับพื้นที่ของ VEGF ที่อยู่ติดกัน
เพื่อร่อง EGCG ที่คาดว่าจะครอบครอง (รูป. 4B)
กับความสัมพันธ์ของ -8.2 กิโลแคลอรี / mol.We ยังระบุที่อาจเกิด
สารตกค้างใน VEGF ว่า EGCG หรืออาจ dp4 โต้ตอบกับตาม
ที่คาดการณ์ในที่สุดพลังที่ดีเว็บไซต์ที่มีผลผูกพัน
(ตารางที่ 1) EGCG เป็นที่คาดการณ์ในการโต้ตอบกับ 13 ตกค้างใน
หน่วยย่อยทั้งสอง VEGF และรูปแบบพันธะไฮโดรเจนกับสาม
ตกค้าง (ASP34, LYS48 และ SER50) dp4 ได้รับการคาดการณ์ว่าจะ
มีปฏิสัมพันธ์กับ 15 ตกค้างของ VEGF รวมถึงห้าตกค้างผ่าน
พันธะไฮโดรเจน (SER50, ASN62, ASP63, GLU64, GLU67,
CYS68).
3.5 ผลของโพลีฟีนใน VEGF ผูกพันกับ
endothelial เซลล์
ยับยั้งผลกระทบของโพลีฟีใน VEGFR- 2
กิจกรรมของ VEGF อาจหรือไม่อาจจะเป็นผลมาจาก
โพลีฟีนที่มีผลผูกพันของการป้องกันการ VEGF VEGFR-2 ใน
เซลล์บุผนังหลอดเลือด เราสำรวจผลกระทบของโพลีฟีน
การรักษาของ VEGF กับความสามารถในการผูกกับพื้นผิวของ
HUVECs ใช้โฟเราแสดงให้เห็นว่าการรักษา dp4

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.3 กิจกรรมการศึกษาจลนศาสตร์ของการยับยั้งโดย EGCG และ

dp4 เพื่อศึกษาจลนพลศาสตร์ของการศึกษาการยับยั้งโดย
โพลีฟีน , การศึกษาถูกบ่มด้วย EGCG ( 62.5 nm ) หรือ
dp4 ( 200 nm ) เป็นระยะเวลานานของเวลา ( 1 ) 270 นาที
1 – 120 นาที ตามลำดับ ) หลังจากนั้น การ vegfr-2-activating
กิจกรรมการศึกษาถูกกำหนด โดยการรักษาด้วย
ถือว่าการศึกษากลุ่มโพลีฟีนอล ( 5 นาที )ข้อมูลที่แสดงให้เห็นชัดเจนว่า EGCG ยับยั้งกิจกรรม (

) การศึกษาเวลา ( รูปที่ 3 ) ซึ่งไม่สอดคล้องกับที่รวดเร็วมาก
( < 1 วินาที ) เวลาเครื่องชั่งที่คลาสสิกกลับได้อย่างอิสระ enzymesubstrate
ซับซ้อนสมดุลจะเกิดขึ้น เพิ่มเติมข้อมูล EGCG
พอดีมาก สอง phasemodel ( ผุ 2 )
ซึ่งเริ่มต้นอย่างรวดเร็วชี้แจงสลายเฟส ( kfast = 0.1184
± 002 319 มิน− 1 ) ตามขั้นตอนสลาย
ชี้แจงช้า ( kslow = 0.003505 ± 0.0007308 มิน− 1 )
ผลที่คล้ายกันได้รับกับ dp4 แต่ด้วยอัตราที่แตกต่างกัน ( รูปที่ 3B ) .
3.4 สำหรับการศึกษาและผลผูกพันของ EGCG เพื่อการศึกษา dp4

EGCG ถูกคาดการณ์ไว้ในร่องที่เสา
( รูปที่ 4 ) การศึกษากับความใกล้ชิดผูกพันของ− 1 kcal / mol dp4
ถูกคาดการณ์ว่าจะผูกกับภาคการศึกษาที่ติดกัน
กับร่องที่ EGCG เป็นสำคัญเพื่อครอบครอง ( รูปที่ 4B )
กับความสัมพันธ์ของ− 8.2 กิโลแคลอรี่ / mol.we ยังระบุว่าในการศึกษาศักยภาพกาก
EGCG หรือ dp4 อาจโต้ตอบกับจากที่คาดการณ์มากที่สุด

( ตารางดีเว็บไซต์เป็นเกลียวผูกพัน 1 ) พบว่า EGCG เพื่อโต้ตอบกับ 13 ตกค้างบน
ทั้งการศึกษาและรูปแบบย่อยของพันธะไฮโดรเจน 3
( asp34 ตกค้าง , และ lys48 ser50 ) dp4 ถูกคาดการณ์ว่าจะ
โต้ตอบกับ 15 ตกค้างของการศึกษารวมถึงห้าตกค้างผ่าน
พันธะไฮโดรเจน ( ser50 asn62 , asp63 glu64 glu67 , , , ,

cys68 ) 3.5 ผลของโพลีฟีนในการศึกษาเซลล์ endothelial ผูกพัน

ผลการยับยั้งของโพลีฟีนในกิจกรรม vegfr-2
ของการศึกษาอาจจะหรืออาจจะไม่ เป็นผลของโพลีฟีนอล ( การศึกษาเพื่อป้องกัน

vegfr-2 บนเซลล์บุ . เราสำรวจผลของโพลีฟีนอล
รักษาของการศึกษาความสามารถในการใช้พื้นผิวของ
กลุ่ม . การใช้เครื่องนับเซลล์ เราแสดงให้เห็นว่า dp4 รักษา