1. Primer LengthMultiplex PCR assay

1. Primer Length
Multiplex PCR assays involve designing of large number of primers, hence it is required that the designed primer should be of appropriate length. Usually, primers of short length, in the range of 18-22 bases are used.

2. Melting Temperature
Primers with similar Tm, preferably between 55°C-60°C are used. For sequences with high GC content, primers with a higher Tm (preferably 75°C-80°C) are recommended. A Tm variation of between 3°-5° C is acceptable for primers used in a pool.

3. Specificity
It is important to consider the specificity of designed primers to the target sequences, while preparing a multiplex assay, especially since competition exists when multiple target sequences are in a single reaction vessel.

4. Avoid Primer Dimer Formation
The designed primers should be checked for formation of primer dimers, with all the primers present in the reaction mixture. Dimerization leads to unspecific amplification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. รองพื้นยาวMultiplex PCR assays เกี่ยวข้องกับการออกแบบของไพรเมอร์ ดังนั้น จึงจำเป็นที่รองพื้นออกแบบควรมีความยาวที่เหมาะสม มักจะ จะใช้ไพรเมอร์ของสั้นยาว ในช่วงของฐาน 18-222. ละลายอุณหภูมิมีใช้ไพรเมอร์กับ Tm คล้าย ควรอยู่ระหว่าง 55° C - 60° C ไพรเมอร์กับ Tm สูง (ควร 75° C - 80° C) จะแนะนำสำหรับลำดับเนื้อหา GC สูง รูปแบบ Tm ของระหว่าง 3° - 5° C เป็นที่ยอมรับสำหรับไพรเมอร์ที่ใช้ในสระว่ายน้ำ3. specificityควรพิจารณา specificity ของไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อลำดับเป้าหมาย ขณะเตรียมทดสอบต่าง ๆ ๅ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื่องจากการแข่งขันอยู่เมื่อหลายเป้าหมายลำดับในปฏิกิริยาเดียวเรือได้4. หลีกเลี่ยงการก่อตัวผลิตของ Dimer รองพื้นไพรเมอร์ที่ออกแบบควรมีการตรวจสอบการก่อตัวของสีรองพื้น dimers กับไพรเมอร์ทั้งหมดที่มีส่วนผสมของปฏิกิริยา Dimerization นำไปสู่การขยาย unspecific

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1 ความยาวประถมศึกษา
ตรวจ Multiplex PCR เกี่ยวข้องกับการออกแบบของจำนวนมากของไพรเมอร์จึงจำเป็นต้องใช้ไพรเมอร์ที่ได้รับการออกแบบที่ควรจะเป็นของความยาวที่เหมาะสม โดยปกติแล้วไพรเมอร์ที่มีความยาวระยะสั้นในช่วง 18-22 ฐานที่มีการใช้2 ละลายอุณหภูมิไพรกับ Tm ที่คล้ายกันอย่างยิ่งระหว่าง 55 ° C-60 ° C จะมีการใช้ สำหรับลำดับที่มีเนื้อหา GC สูงไพรเมอร์ที่มีความสูง Tm (ยิ่ง 75 ° C-80 ° C) มีการแนะนำ การเปลี่ยนแปลง Tm ระหว่าง 3 ° -5 ° C เป็นที่ยอมรับสำหรับไพรเมอร์ที่ใช้ในการสระว่ายน้ำ3 เฉพาะเจาะจงมันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องพิจารณาความจำเพาะของไพรเมอร์ออกแบบมาเพื่อเป้าหมายลำดับในขณะที่การเตรียมการทดสอบหลายโดยเฉพาะอย่างยิ่งนับตั้งแต่การแข่งขันที่เกิดขึ้นเมื่อหลายลำดับเป้าหมายอยู่ในเรือปฏิกิริยาเดียว4 หลีกเลี่ยงการก่อประถมศึกษา Dimer ออกแบบไพรเมอร์ควรจะตรวจสอบการก่อตัวของ dimers ไพรเมอร์ที่มีไพรเมอร์ทั้งหมดที่อยู่ในส่วนผสมของปฏิกิริยา dimerization นำไปสู่การขยาย unspecific

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . รองพื้น multiplex PCR สามารถเกี่ยวข้องกับความยาว
ออกแบบไพรเมอร์จำนวนมาก ดังนั้นจึงเป็นสิ่งจำเป็นที่ออกแบบไพรเมอร์ที่ควรมีความยาวที่เหมาะสม โดยปกติ ไพรเมอร์ของความยาวสั้นๆ ในช่วงประมาณ 18-22 ใช้

2 ละลายจากอุณหภูมิ
กับ TM คล้ายคลึงกัน โดยเฉพาะระหว่าง 55 องศา c-60 ° C ที่ใช้ ยีนที่มีเนื้อหาเข้มข้นสูงไพรเมอร์กับ TM สูงกว่า ( เด่นกว่า 75 องศา c-80 ° C ) แนะนำ เป็น TM ความผันแปรระหว่าง 3 องศา - 5 องศา C เป็นที่ยอมรับสำหรับไพรเมอร์ที่ใช้ในสระว่ายน้ำ

3 ความจำเพาะ
มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะพิจารณาเฉพาะออกแบบไพรเมอร์เพื่อเป้าหมายลำดับ ขณะเตรียมวิธี multiplex โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื่องจากการแข่งขันมีอยู่เมื่อลำดับหลายเป้าหมายอยู่ในถังปฏิกิริยาเดียว

4 .หลีกเลี่ยงการออกแบบไพรเมอร์ primer dimer
ควรตรวจสอบการก่อตัวของไพรเมอร์สายด้วยไพรเมอร์ทั้งหมดในปัจจุบันในการผสม สหชาตากำกวมแบบ .