Peripheral blood mononuclear cells

Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) isolation
Whole blood collected into sodium-heparin on D40 and diluted 1:1 with phosphate buffered
saline (PBS; pH = 7.4) was overlaid on to Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare Bio-Sciences
Corp., Baie d’Urfe, QC) and separated by centrifugation at 400 g at 20°C for 30 min. After
hypotonic lysis of red blood cells, PBMC were washed once with PBS and once with culture
medium (Gibco® RPMI Media 1640, Life Technologies Inc., Burlington, ON) with 10%
(v/v) fetal bovine serum (FBS) and 1% (w/v) penicillin-streptomycin (Sigma-Aldrich,
Oakville, ON). Cells were stained with 0.4% Trypan blue (VWR International, Mississauga,
ON) and counted on a hemocytometer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกเซลล์โลหิตโมโนนิวเคลียร์ (PBMC) เลือดเลือดที่เก็บเป็นโซเดียมเฮ D40 และเจือจาง 1:1 ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์saline (PBS; pH = 7.4) ถูกวางทับบน Ficoll Paque พลัส (GE สุขภาพชีวภาพวิทยาศาสตร์คอร์ป Baie d'Urfe, QC) แยก โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 400 กรัมที่อุณหภูมิ 20 ° C 30 นาทีหลังจากlysis ใสของเซลล์เม็ดเลือดแดง PBMC ถูกล้างครั้งเดียว ด้วย PBS และเมื่อวัฒนธรรมปานกลาง (Gibco® RPMI สื่อ 1640 ชีวิตเทคโนโลยี อิงค์ เบอร์ลิงตัน บน) 10%(v/v) ทารกวัวซีรั่ม (FBS) และ 1% (w/v) ยาเพนนิซิลลิน-streptomycin (Sigma Aldrichค็อกเทล ON) เซลล์ถูกย้อม ด้วยสีฟ้า Trypan 0.4% (ซอนานา มิสซิสซอกาON) และนับจาก hemocytometer

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ในเลือดโมโนนิวเคลียร์ (PBMC) แยก
เลือดเก็บเข้าโซเดียมเฮบน D40 และเจือจาง 1: 1 กับฟอสเฟตบัฟเฟอร์
น้ำเกลือ (พีบีเอส; ค่า pH = 7.4) ถูกวางทับบนเพื่อ Ficoll-Paque พลัส (GE Healthcare Bio-วิทยาศาสตร์
คอร์ป Baie d'Urfé, QC) และคั่นด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 400 กรัมที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที หลังจาก
สลาย hypotonic ของเซลล์เม็ดเลือดแดง PBMC ถูกล้างครั้งเดียวกับพีบีเอสและครั้งเดียวกับวัฒนธรรม
กลาง (Gibco® RPMI สื่อ 1640 ไลฟ์เทคโนโลยีส์อิงค์เบอร์ลิงตัน, ON) 10%
(v / v) ของทารกในครรภ์วัวซีรั่ม (FBS) และ 1% (w / v) penicillin-streptomycin (Sigma-Aldrich,
Oakville, ON) เซลล์ที่ถูกย้อมด้วยสี 0.4% Trypan สีฟ้า (VWR นานาชาติ Mississauga,
ON) และนับ hemocytometer

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์เม็ดเลือดขาวปกติ ( 2 ) แยกเลือดทั้งหมดเก็บลงใน d40 โซเดียมเฮปารินที่เจือจาง 1 : 1 และด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ ( PBS ; pH = 7.4 ) คือหุ้มเพื่อ ficoll ปั๊ก พลัส ( GE Healthcare วิทยาศาสตร์ชีวภาพคอร์ป , Baie d"urfe , QC ) และแยกจากกันโดยการเหวี่ยงแยกที่ 400 กรัม 20 ° C เป็นเวลา 30 นาที หลังจากการสลายไฮโปโทนิกของเม็ดเลือดแดงขาว ถูกซักครั้งกับ PBS และอีกครั้งกับวัฒนธรรมขนาดกลาง ( gibco สื่อ® RPMI 1640 ชีวิตเทคโนโลยีอิงค์ , เบอร์ลิงตัน , ) 10 %( v / v ) ของวัว เซรั่ม ( FBS ) และ 1% ( w / v ) ยาสเตรปโตมัยซิน ( ซิกม่า AldrichOakville , ) เซลล์ที่ถูกย้อมด้วยสีไตรแพน 0.4% สีฟ้า ( บริษัท Imcopa International , Mississauga ,บน ) และนับบน hemocytometer .