Briefly, a loopful of bacterial col

Briefly, a loopful of bacterial colonies was washed twice in PBS
Briefly, a loopful นำเชื้อแบคทีเรียมาล้างใน PBS 2 ครั้ง andresuspended in ใน 500 ul extraction buffer (EB) (10 mM Tris–HCl, pH 8.0
and 1 mM EDTA). In screw-capped microcentrifuge tubes, the suspension

12 min heating in a boiling water bath. In the case of frozen spleen
tissue, approximately 500 μl of the thawed homogenate was spun briefly
and the tissue pellet then resuspended in 500 μl EB as described
above. Additional purification of the genomic DNA was then carried
out by phenol/chloroform/isoamyl alcohol extraction, followed by ethanol
precipitation (as described in Ausubel et al., 1992). The genomic
DNA content was quantified using Eppendorf spectophotometry.
Approximately 500–1000 ng of purified DNA preparation was utilized
as template DNA in the PCR reaction.
Amplification of a portion of the 16S rRNAgene (167 bp) was used for
identification of both DNA isolated from spleen and bacteria recovered
from spleen homogenates. Three to five μl of each respective DNA sample
was amplified with primers MarF (5´-AGGACCACGGGATTCATGTCC-3´)
and MarR (5´- GTAGGAGTCTGGGCCGTATCTCAG-3´) in 25 μl PCR reactions
using Taq DNA polymerase (Fermentas, Ukraine). Each reaction
contained 1.5 units of enzyme, 200 mM of deoxynucleoside triphosphate,
2 mM MgCl2, and 10 pmol of each primer and ultra-pure water. Cycling
was performed in a gradient thermal cycler (Eppendorf, Germany) as follows:
95 °C for 5 min; 35 cycles for 95 °C, 55 °C and 72 °C each for 1 min
followed by final extension at 72 °C for 7 min. Five microliters of each reaction
mixture was analyzed on 1.2% agarose gels stained with ethidium
bromide for visualization of PCR products. A no-template DNA negative
control was included with each run of PCR.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Briefly, a loopful of bacterial colonies was washed twice in PBS Briefly, a loopful นำเชื้อแบคทีเรียมาล้างใน PBS 2 ครั้ง andresuspended in ใน 500 ul extraction buffer (EB) (10 mM Tris–HCl, pH 8.0and 1 mM EDTA). In screw-capped microcentrifuge tubes, the suspension12 min heating in a boiling water bath. In the case of frozen spleentissue, approximately 500 μl of the thawed homogenate was spun brieflyand the tissue pellet then resuspended in 500 μl EB as describedabove. Additional purification of the genomic DNA was then carriedout by phenol/chloroform/isoamyl alcohol extraction, followed by ethanolprecipitation (as described in Ausubel et al., 1992). The genomicDNA content was quantified using Eppendorf spectophotometry.Approximately 500–1000 ng of purified DNA preparation was utilizedas template DNA in the PCR reaction.Amplification of a portion of the 16S rRNAgene (167 bp) was used foridentification of both DNA isolated from spleen and bacteria recoveredfrom spleen homogenates. Three to five μl of each respective DNA samplewas amplified with primers MarF (5´-AGGACCACGGGATTCATGTCC-3´)and MarR (5´- GTAGGAGTCTGGGCCGTATCTCAG-3´) in 25 μl PCR reactionsusing Taq DNA polymerase (Fermentas, Ukraine). Each reactioncontained 1.5 units of enzyme, 200 mM of deoxynucleoside triphosphate,2 mM MgCl2, and 10 pmol of each primer and ultra-pure water. Cyclingทำใน cycler ร้อนไล่ระดับสี (Eppendorf เยอรมนี) เป็นดังนี้:95 ° C เป็นเวลา 5 นาที รอบ 35 95 ° C, 55 ° C และ 72 ° C ละ 1 นาทีตาม ด้วยนามสกุลสุดท้าย 72 ° c สำหรับ microliters ห้า 7 นาทีของแต่ละปฏิกิริยาส่วนผสมถูกวิเคราะห์บน 1.2% agarose เจย้อม ด้วย ethidiumโบรไมด์สำหรับแสดงผลิตภัณฑ์ PCR ลบดีเอ็นเอไม่มีแม่ควบคุมมาพร้อมกับแต่ละการทำงานของ PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สั้น ๆ , loopful จากโคโลนีซัก 2 ครั้ง ในช่องสั้น ๆ , loopful นำเชื้อแบคทีเรียมาล้างใน PBS 2 ครั้ง andresuspended ใน the 500 UL ใช้สาร ( EB ) ( 10 มม. ) pH 8.0 หรือ HCl ,และ 1 mM EDTA ) สกรูฝาครอบหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ , ระงับ12 นาทีความร้อนในการต้มน้ำอาบ ในกรณีของม้าม แช่แข็งเนื้อเยื่อ ประมาณ 500 μลิตรละลายอนถูกปั่นสั้น ๆและเนื้อเยื่อที่เม็ดแล้ว resuspended 500 μ L EB ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น การเพิ่มขึ้นของดีเอ็นเอถูกอุ้มโดยการสกัดด้วยแอลกอฮอล์ในปริมาณฟีนอล / / ตามด้วยเอทานอลการตกตะกอน ( ตามที่อธิบายไว้ใน ซูเบล et al . , 1992 ) ในจีโนมปริมาณดีเอ็นเอถูก quantified ใช้เพนดอร์ฟ spectophotometry .ประมาณ 500 - 1000 ของการเตรียมดีเอ็นเอบริสุทธิ์ถูกใช้เป็นแม่แบบของดีเอ็นเอในปฏิกิริยา PCR .การเพิ่มส่วนของ 16S rrnagene ( 167 BP ) ใช้สำหรับการจำแนกชนิดของแบคทีเรียที่แยกได้จากทั้งดีเอ็นเอและม้ามหายจากม้าม homogenates . สามถึงห้าμ L ของแต่ละตัวอย่างดีเอ็นเอถูกขยายด้วยไพรเมอร์ marf ( 5 ใหม่ - aggaccacgggattcatgtcc-3 ใหม่ )แต่ . . . ( และ 5 ใหม่ - gtaggagtctgggccgtatctcag-3 ใหม่ ) 25 μ L โดยปฏิกิริยาการใช้ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( fermentas , ยูเครน ) แต่ละปฏิกิริยาที่มีอยู่ 1.5 หน่วยของเอนไซม์ 200 มิล ไตรฟอสเฟต deoxynucleoside ,ชุด 2 มม. และ 10 pmol ของแต่ละสีและ Ultra น้ำบริสุทธิ์ จักรยานในการปฏิบัติการไล่ระดับความร้อนรอบ ( เพนดอร์ฟ , เยอรมนี ) ดังนี้95 องศา C เป็นเวลา 5 นาที ; 35 รอบ 95 องศา C 55 ° C และ 72 ° C ละ 1 นาทีตามด้วยส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 7 นาที ห้าตัวเลขของแต่ละปฏิกิริยาส่วนผสมที่ใช้ 1.2 % เจลเปื้อนคู่ ,โบรไมด์ สำหรับการพัฒนาผลิตภัณฑ์ PCR ไม่ลบแม่แบบดีเอ็นเอควบคุมรวมแต่ละวิ่งของ PCR