Specificity of the PNA probeThe spe

Specificity of the PNA probe
The specificity of the PNA probe (PP0443A) should be considered as a critical point for FISH detection. To achieve this, the probes were firstly designed based on the multiple sequence alignment involving the LSU D1–D2 sequences of P. donghaiense and all other Procentrumavailable in Genbank. Next, BLAST searches were performed on the designed probes, confirming that the sequences of probes could exclusively match with P. donghaiense. Finally, cross-reactivity of the screened probe against other microalgae was tested. The positive (DU0512A) and negative (DU0499S18) control treatments were included to define a range of labeling intensities possible for any given sample and thereby provided a reference from which to assess the reactivity of specific probe.
The FISH trials served as an intermediate step to determine whether a candidate probe could access its target sequence. Therefore, no attempt was made to optimize the whole cell hybridization conditions and the list of species used in the trials was also limited. The results of hybridization with all test species using the PNA probe and control probes are shown in Table 2. The positive probe could react with all test species, repeatedly giving bright and uniform label intensity for all species examined. Contrarily, the negative probe could not label any species, and the cells treated by negative probe appeared uniformly dark. In contrast, PP0443A reacted exclusively with P. donghaiense. Based on these, the specific PNA probe may be speculated to be useful for molecular identification of the target species in natural samples containing many different microalgae.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความจำเพาะของโพรบ PNAความจำเพาะของโพรบ PNA (PP0443A) ควรเป็นจุดสำคัญสำหรับการตรวจจับปลา เพื่อให้บรรลุนี้ เซ็นเซอร์ตอนแรกออกแบบตามการจัดลำดับหลายตำแหน่งที่เกี่ยวข้องกับลำดับ LSU D1-D2 ของ P. donghaiense และ Procentrumavailable อื่น ๆ ทั้งหมดใน Genbank ถัดไป ค้นหาระเบิดได้ดำเนินการในหัวออก ยืนยันว่า ลำดับหัวเฉพาะอาจตรงกับ P. donghaiense ในที่สุด ถูกทดสอบ cross-reactivity ของโพรบที่ถูกตรวจสอบเทียบกับสาหร่ายอื่น ๆ บวก (DU0512A) และลบ (DU0499S18) ควบคุมรักษารวมถึงกำหนดช่วงของการติดฉลากความเข้มใด ๆ อย่างที่กำหนดให้ และจึงมีการอ้างอิงการประเมินปฏิกิริยาของโพรบที่เฉพาะเจาะจงการทดลองปลาหน้าที่เป็นมีขั้นตอนการตรวจสอบว่า การสอบสวนที่ผู้สมัครไม่สามารถเข้าถึงลำดับของเป้าหมาย ดังนั้น ไม่พยายามที่จะปรับเงื่อนไขการ hybridization เซลล์ทั้งหมด และรายชื่อชนิดที่ใช้ในการทดลองของยังจำกัด ผลลัพธ์ของการ hybridization กับพันธุ์ทดสอบทั้งหมดที่ใช้โพรบ PNA และสามารถควบคุมจะแสดงในตารางที่ 2 โพรบบวกสามารถทำปฏิกิริยากับพันธุ์ทดสอบทั้งหมด ซ้ำ ๆ ให้เข้มสดใส และสม่ำเสมอป้ายสำหรับทุกสายพันธุ์การตรวจสอบ อุปสงค์ โพรบลบได้ใส่ป้ายชื่อสายพันธุ์ใด ๆ และเซลล์รักษา โดยลบสอบสวนปรากฏมืดอย่างสม่ำเสมอ ตรงกันข้าม PP0443A ปฏิกิริยาเฉพาะกับ P. donghaiense ตามเหล่านี้ การสอบสวน PNA เฉพาะอาจคาดจะเป็นประโยชน์สำหรับการระบุเป้าหมายการขยายพันธุ์ในธรรมชาติตัวอย่างที่ประกอบด้วยสาหร่ายแตกต่างกันหลายโมเลกุล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความจำเพาะของการสอบสวน PNA
ความจำเพาะของการสอบสวน PNA (PP0443A) ควรจะถือว่าเป็นจุดสำคัญในการตรวจหาปลา เพื่อให้บรรลุนี้ probes ถูกประการแรกการออกแบบบนพื้นฐานของลำดับการจัดเรียงหลายที่เกี่ยวข้องกับลำดับ LSU D1-D2 พี donghaiense และทุก Procentrumavailable อื่น ๆ ใน Genbank ถัดไปค้นหาระเบิดได้ดำเนินการบนขั้วออกแบบยืนยันว่าลำดับของยานสำรวจเฉพาะสามารถจับคู่กับพี donghaiense สุดท้ายปฏิกิริยาข้ามของการสอบสวนคัดเลือกกับสาหร่ายทะเลขนาดเล็กอื่น ๆ ที่ได้รับการทดสอบ บวก (DU0512A) และลบ (DU0499S18) การรักษาควบคุมถูกรวมอยู่ในการกำหนดช่วงของความเข้มของการติดฉลากที่เป็นไปได้สำหรับตัวอย่างใดก็ตามและจะช่วยให้การอ้างอิงจากการที่ในการประเมินปฏิกิริยาของการสอบสวนที่เฉพาะเจาะจง.
การทดลองปลาทำหน้าที่เป็นสื่อกลางในการ ตรวจสอบว่ามีการสอบสวนผู้สมัครสามารถเข้าถึงลำดับเป้าหมาย ดังนั้นจึงไม่มีความพยายามที่จะเพิ่มประสิทธิภาพของเซลล์เงื่อนไขการผสมพันธุ์ทั้งหมดและรายชื่อของสายพันธุ์ที่ใช้ในการทดลองยังถูก จำกัด ผลที่ได้จากการผสมข้ามพันธุ์กับทุกสายพันธุ์ทดสอบโดยใช้ PNA สอบสวนและการควบคุมยานสำรวจที่แสดงในตารางที่ 2 การสอบสวนในเชิงบวกสามารถตอบสนองกับทุกสายพันธุ์ทดสอบซ้ำแล้วซ้ำอีกให้เข้มฉลากสดใสและชุดสำหรับการตรวจสอบทุกสายพันธุ์ ตรงกันข้ามการสอบสวนเชิงลบไม่สามารถติดป้ายทุกชนิดและเซลล์ได้รับการรักษาโดยการสอบสวนเชิงลบปรากฏเข้มสม่ำเสมอ ในทางตรงกันข้าม PP0443A ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นเฉพาะกับพี donghaiense ขึ้นอยู่กับเหล่านี้การสอบสวน PNA เฉพาะอาจมีการคาดการณ์ว่าจะเป็นประโยชน์สำหรับประชาชนในระดับโมเลกุลของสายพันธุ์เป้าหมายในตัวอย่างธรรมชาติที่มีสาหร่ายแตกต่างกันมาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ของพีเอ็นเอโพรบความจำเพาะความจำเพาะของพีเอ็นเอโพรบ ( pp0443a ) ควรจะถือว่าเป็นจุดที่สำคัญสำหรับการตรวจหาปลา เพื่อให้บรรลุนี้ จึงถูกออกแบบตามแนวหลายลำดับแรกเกี่ยวข้องกับ LSU D1 และ D2 ลำดับของหน้า donghaiense procentrumavailable ทั้งหมดอื่น ๆและบริเวณ ต่อไปค้นหาระเบิดจำนวนการออกแบบโพรบ ยืนยันว่า ลำดับในวัดโดยเฉพาะสามารถตรงกับหน้า donghaiense . ในที่สุด , การคัดกรองตรวจสอบกับกางเขนของสาหร่ายขนาดเล็กอื่น ๆทดสอบ บวก ( du0512a ) และลบ ( du0499s18 ) การรักษาควบคุมจำนวนรวมการกำหนดช่วงของการติดฉลากเข้มเป็นไปได้สำหรับตัวอย่างและเพื่อให้อ้างอิงจากที่ประเมินการตรวจสอบเฉพาะปลาทดลองให้บริการเป็นตัวกลางเพื่อตรวจสอบว่าผู้สมัครตรวจสอบสามารถเข้าถึงลำดับเป้าหมาย ดังนั้นจึงไม่มีความพยายามที่จะเพิ่มประสิทธิภาพเซลล์ลูกผสมทั้งเงื่อนไขและรายการของสายพันธุ์ที่ใช้ในการทดลอง คือ นอกจากนี้ยัง จำกัด ผลของการทำพืชทดสอบทั้งหมดใช้ PNA สอบสวนและควบคุมและแสดงในตารางที่ 2 การสอบสวนเป็นบวกอาจทำปฏิกิริยากับสายพันธุ์ทดสอบซ้ำๆ ให้สดใส และความเข้มของเครื่องแบบฉลากชนิดตรวจสอบ อุปสงค์ , โพรบลบไม่สามารถฉลากชนิด และเซลล์ที่ได้รับการรักษาโดยโพรบลบปรากฏมืดเหมือนกัน . ในทางตรงกันข้าม pp0443a ทำปฏิกิริยาเฉพาะกับหน้า donghaiense . ตามเหล่านี้ด้วย PNA เฉพาะอาจจะสันนิษฐานว่าจะเป็นประโยชน์สำหรับการระบุโมเลกุลเป้าหมายชนิดในตัวอย่างสาหร่ายธรรมชาติที่แตกต่างกันมาก