3.1. DNA ProbesDNA probes were the

3.1. DNA Probes
DNA probes were the first nucleic acid-based
assays for detecting foodborne pathogens, and
they were introduced for food analysis in the early
1980s (21,22). At a 1987 meeting on the future
market opportunities in diagnostics, many scientists
had an optimistic outlook for DNA probes
and predicted that probes would become a major
worldwide market in the food industry within 5 yr.
In actuality, however, the commercial growth and
acceptance of probe assays have been unexpectedly
slow, and despite the fact that DNA probes
have been developed for most of the foodborne
pathogens, only a few companies are actively
pursuing this format for food analysis. Several
reviews on DNA probe assays for bacterial pathogens
have been published (23-25); therefore, only
the two commercially available probe tests will
be briefly discussed here. Both assays target ribosomal
RNA (rRNA), taking advantage of the fact
that the higher copy number of bacterial rRNA
provides a naturally amplified target and affords
greater assay sensitivity.
The assay format developed by GENE-TRAK
(Hopkinton, MA) for the detection of foodborne
pathogens is a combination of DNA hybridization
and enzyme immunoassay. The key components
are a poly-deoxyadenosine-tailed capture
probe and a fluorescein-labeled detector probe,
both of which are targeted to adjacent regions of
rRNA. After cultural enrichment and chemical
cell lysis, rRNA is hybridized simultaneously
with both probes, and the hybrid is subsequently
immobilized with a polydeoxythymidine-coated
dipstick. This complex is then detected by enzyme
immunoassay using a peroxidase-conjugated
antifluorescein antibody and a colorimetric peroxidase
substrate (26).
The Accuprobe by Gen-Probe (San Diego, CA),
initially developed for the identification of pure
culture isolates of foodborne pathogens, uses a
hybridization protection format, in which a singlestranded
DNA probe, tagged with a chemiluminescent
label (acridium ester), is used to hybridize
specific sequences in the 16S rRNA. Hybridization
protects the probe/label, since unhybridized
probes are inactivated by differential hydrolysis.
Subsequent addition of alkaline H202 activates
the label to emit light at 430 nm, which is quantitated
with a luminometer. The Accuprobe for
identification of Listeria monocytogenes was
found to be specific and sensitive, with a detection
limit of 105 CFU in buffer (27), but the evaluation of
this assay for the analysis of L. monocytogenes in
various food enrichments showed it to yield falsenegative
results. Apparently, media with high salt
content can interfere or greatly reduce cell lysis,
thereby preventing the hybridization of the probe
with target rRNA (28). Selected Accuprobe and
GENE-TRAK probe assays and their respective
target pathogens are listed in Table 2.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.1. DNA Probesคลิปปากตะเข้ดีเอ็นเอถูกแรกใช้กรดนิวคลีอิกassays สำหรับการตรวจสอบโรค foodborne และพวกเขาได้แนะนำสำหรับการวิเคราะห์อาหารในช่วงไฟต์ (21,22) การประชุม 1987 ในอนาคตโอกาสทางการตลาดในการวินิจฉัย นักวิทยาศาสตร์จำนวนมากมี outlook ในเชิงบวกสำหรับคลิปปากตะเข้ดีเอ็นเอและคาดการณ์ว่า คลิปปากตะเข้จะกลายเป็น หลักการตลาดทั่วโลกในอุตสาหกรรมอาหารภายใน 5 ปีใน actuality อย่างไรก็ตาม การเจริญเติบโตทางการค้า และได้รับการยอมรับของโพรบ assays โดยไม่คาดคิดช้า และทั้ง ๆ ที่ DNA probesได้รับการพัฒนาสำหรับส่วนมากของ foodborneโรค กร่อยอยู่อย่างแข็งขันใฝ่หารูปแบบนี้สำหรับการวิเคราะห์อาหาร หลายความคิดเห็นในดีเอ็นเอโพรบ assays สำหรับโรคเชื้อแบคทีเรียมีการเผยแพร่ (23-25); ดังนั้น เท่านั้นจะทดสอบสองโพรบที่ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์จะสั้น ๆ กล่าวถึงที่นี่ เป้าหมายทั้ง assays ribosomalอาร์เอ็นเอ (rRNA), ประโยชน์ของความเป็นจริงที่สูงสำเนาจำนวนแบคทีเรีย rRNAมีเป้าหมายเป็นธรรมชาติเอาต์ และแล้วความไวสูงวิเคราะห์รูปแบบการทดสอบที่พัฒนา โดยยีน TRAK(Hopkinton, MA) ตรวจ foodborneโรคคือ การรวมกันของ DNA hybridizationและเอนไซม์ immunoassay ส่วนประกอบสำคัญจะจับโพลี deoxyadenosine-หางโพรบและการจับป้าย fluorescein โพรบซึ่งทั้งสองมีเป้าหมายติดกับแคว้นrRNA หลังจากโดดเด่นทางวัฒนธรรมและสารเคมีเซลล์ lysis, rRNA จะผสมพันธุ์กันมีทั้งคลิปปากตะเข้ และการผสมในเวลาต่อมาตรึงกับ polydeoxythymidine เคลือบdipstick แล้วมีการตรวจพบที่ซับซ้อน โดยเอนไซม์immunoassay ใช้ peroxidase กลวงantifluorescein แอนติบอดีและ peroxidase เทียบเคียงพื้นผิว (26)Accuprobe โดย Gen-โพรบ (San Diego, CA),เริ่มพัฒนาสำหรับรหัสของแท้วัฒนธรรมแยกของ foodborne โรค ใช้เป็นhybridization ป้องกันรูปแบบ ที่เป็น singlestrandedโพรบดีเอ็นเอ การติดแท็ก ด้วยการ chemiluminescentป้ายชื่อ (เอส acridium) ใช้คือลำดับเฉพาะใน 16S rRNA Hybridizationโพรบ/ป้ายชื่อ การปกป้องตั้งแต่ unhybridizedคลิปปากตะเข้ถูกยกเลิก โดยไฮโตรไลซ์แตกต่างเรียกใช้ H202 ด่างเพิ่มภายหลังป้ายชื่อที่จะฉายที่ 430 nm ซึ่งเป็น quantitatedมี luminometer Accuprobe สำหรับมีรหัสออลิ monocytogenesพบเฉพาะ และ สำคัญ มีการตรวจสอบจำนวน 105 CFU ในบัฟเฟอร์ (27), แต่การประเมินของทดสอบนี้สำหรับการวิเคราะห์ของ L. monocytogenes ในenrichments อาหารต่าง ๆ พบว่าให้ผลตอบแทน falsenegativeผลลัพธ์ที่ เห็นได้ชัด สื่อที่ มีเกลือสูงเนื้อหาสามารถแทรกแซง หรือลดเซลล์ lysis มากเพื่อป้องกันการ hybridization ของโพรบมีเป้าหมาย rRNA (28) เลือก Accuprobe และยีน-TRAK assays โพรบและผู้เกี่ยวข้องโรคเป้าหมายจะแสดงในตารางที่ 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.1 ดีเอ็นเอโพรบดีเอ็นเอโพรบเป็นครั้งแรกในกรดนิวคลีอิกที่ใช้ชุดตรวจการตรวจหาเชื้อก่อโรคที่เกิดจากอาหารและพวกเขาได้รับการแนะนำให้รู้จักการวิเคราะห์อาหารในช่วงต้นทศวรรษที่1980 (21,22) ที่ 1987 การประชุมเกี่ยวกับอนาคตโอกาสทางการตลาดในการตรวจวินิจฉัยนักวิทยาศาสตร์หลายคนมีมุมมองในแง่ดีสำหรับดีเอ็นเอโพรบและคาดการณ์ว่าฟิวส์จะกลายเป็นที่สำคัญตลาดทั่วโลกในอุตสาหกรรมอาหารภายใน5 ปี. ในความเป็นจริงแต่การเจริญเติบโตของการค้าและการยอมรับของตรวจสอบสวนได้โดยไม่คาดคิดช้าและแม้จะมีความจริงที่ว่ายานสำรวจดีเอ็นเอได้รับการพัฒนาให้มากที่สุดจากอาหารเชื้อโรคเพียงไม่กี่บริษัท มีความกระตือรือร้นใฝ่หารูปแบบในการวิเคราะห์อาหาร หลายความคิดเห็นเกี่ยวกับการตรวจดีเอ็นเอสอบสวนเชื้อโรคแบคทีเรียได้รับการตีพิมพ์(23-25); ดังนั้นจึงมีเพียงสองการทดสอบการสอบสวนในเชิงพาณิชย์จะมีการหารือในเวลาสั้นๆ ที่นี่ การตรวจทั้งสองเป้าหมายโซมอลอาร์เอ็นเอ (rRNA) การใช้ประโยชน์จากความจริงที่ว่าจำนวนสำเนาที่สูงขึ้นของแบคทีเรียrRNA มีเป้าหมายขยายตามธรรมชาติและกำบังไวทดสอบมากขึ้น. รูปแบบการทดสอบที่พัฒนาโดย GENE-TRAK (Hopkinton, MA) สำหรับการตรวจสอบของ ที่เกิดจากอาหารเชื้อโรคคือการรวมกันของการผสมข้ามพันธุ์ดีเอ็นเอและimmunoassay เอนไซม์ ส่วนประกอบที่สำคัญเป็นโพลี deoxyadenosine นกจับการสอบสวนและการสอบสวนตรวจจับfluorescein ติดฉลาก, ทั้งที่มีการกำหนดเป้าหมายไปยังพื้นที่ที่อยู่ติดกันของrRNA หลังจากที่เพิ่มคุณค่าทางวัฒนธรรมและทางเคมีสลายเซลล์ rRNA เป็นไฮบริดพร้อมกันกับโพรบทั้งสองและไฮบริดเป็นต่อมาตรึงด้วยpolydeoxythymidine เคลือบdipstick ความซับซ้อนเช่นนี้มีการตรวจพบแล้วโดยเอนไซม์immunoassay ใช้ peroxidase-ผันแอนติบอดีantifluorescein และ peroxidase สีพื้นผิว(26). Accuprobe โดย Gen-Probe (ซานดิเอโก), การพัฒนาครั้งแรกสำหรับบัตรประจำตัวของบริสุทธิ์วัฒนธรรมแยกของเชื้อโรคที่เกิดจากอาหาร, ใช้รูปแบบการป้องกันการผสมพันธุ์ซึ่งเป็น singlestranded สอบสวนดีเอ็นเอติดแท็กด้วย chemiluminescent ฉลาก (เอสเทอ acridium) จะใช้ในการผสมพันธุ์ลำดับที่เฉพาะเจาะจงใน16S rRNA การผสมพันธุ์ปกป้องสอบสวน / ฉลากตั้งแต่ unhybridized probes จะถูกยกเลิกโดยการย่อยสลายที่แตกต่างกัน. นอกจากนี้ภายหลังจากการเปิดใช้งานอัลคาไลน์ H202 ฉลากเพื่อเปล่งแสงที่ 430 นาโนเมตรซึ่งเป็น quantitated กับ luminometer Accuprobe สำหรับบัตรประจำตัวของเชื้อListeria monocytogenes ถูกพบว่ามีความเฉพาะเจาะจงและมีความสำคัญกับการตรวจสอบขีดจำกัด ของ 105 CFU ในบัฟเฟอร์ (27) แต่การประเมินผลการทดสอบนี้สำหรับการวิเคราะห์L. monocytogenes ในenrichments อาหารต่างๆแสดงให้เห็นว่ามันจะให้ผลผลิต falsenegative ผล. เห็นได้ชัดว่าสื่อที่มีเกลือสูงเนื้อหาสามารถแทรกแซงหรือช่วยลดการสลายของเซลล์จึงช่วยป้องกันการผสมพันธุ์ของหัวที่มีเป้าหมายrRNA (28) เลือก Accuprobe และGENE-TRAK ตรวจสอบสวนและตนเชื้อโรคเป้าหมายที่ระบุไว้ในตารางที่2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.1 . ดีเอ็นเอโพรบ
DNA probes เป็นกรดนิวคลีอิกโดย
) สำหรับการตรวจหาเชื้อโรคอาหารเป็นพิษ และพวกเขาได้ถูกนำมาวิเคราะห์

อาหารในช่วงต้น 1980 ( 21,22 ) ที่ 1987 การประชุมใน อนาคต
โอกาสทางการตลาดในการวินิจฉัยหลายนักวิทยาศาสตร์
ได้ในแง่ดีดีเอ็นเอโพรบ
และคาดว่าฟิวส์จะกลายเป็นตลาดทั่วโลกที่สำคัญในอุตสาหกรรมอาหารภายใน

5 ปีในความเป็นจริงแล้ว อย่างไรก็ตาม การเติบโตทางการค้า และการยอมรับหรือได้รับการสอบสวน

อย่างช้า และแม้จะมีความจริงที่ว่า DNA probes
ได้รับการพัฒนามากที่สุดของอาหารเป็นพิษ
เชื้อโรค , เพียงไม่กี่ บริษัท จะกระตือรือร้น
ไล่ตามรูปแบบการวิเคราะห์อาหาร รีวิวหลาย
บนดีเอ็นเอตรวจสอบ ) สำหรับแบคทีเรียเชื้อโรค
ได้รับการเผยแพร่ ( 23-25 ) ; ดังนั้น , เพียง
สองพร้อมใช้งานในเชิงพาณิชย์ตรวจสอบการทดสอบจะ
จะสั้น ๆกล่าวถึงในที่นี้ ทั้งสองวิธีเป้าหมาย
ribosomal RNA ( rRNA ) , การใช้ประโยชน์จากความเป็นจริง
ที่สูงกว่าคัดลอกจำนวนของแบคทีเรียแบคทีเรีย
มีธรรมชาติขยายเป้าหมายและความไวแล้ว

) มากกว่า โดยรูปแบบการพัฒนาโดย gene-trak
( Hopkinton , MA ) เพื่อตรวจหาอาหารเป็นพิษ
เชื้อโรคคือการรวมกันของ DNA และเอนไซม์ Immunoassay (
.
ส่วนประกอบสำคัญคือโพลีดีอ ซีแอดีโนซีน หาง หัวจับ และติดป้ายว่าเครื่องตรวจจับี่

ทั้งการสืบสวนสอบสวน ซึ่งมีเป้าหมายไปยังพื้นที่ที่อยู่ติดกันของ
rRNA . หลังจากเสริมวัฒนธรรมการสลายเซลล์แบคทีเรียและสารเคมี
,
) พร้อมกันเป็นทั้งวัดและไฮบริดคือต่อมา
ตรึงด้วย polydeoxythymidine เคลือบ
บ้าอำนาจ ที่ซับซ้อนนี้จะตรวจพบ โดยทางเอนไซม์โดยใช้เอนไซม์ conjugated

antifluorescein แอนติบอดี และพื้นผิวมี 7.4 ( 26 )
.
accuprobe โดย Gen โพรบ ( San Diego , CA )
เริ่มต้นพัฒนาสำหรับการแยกเชื้อบริสุทธิ์ของเชื้อโรคอาหารเป็นพิษ
,
( การใช้รูปแบบซึ่งใน singlestranded
ดีเอ็นเอโพรบ , แท็กกับป้ายชื่อ chemiluminescent
( acridium เอสเทอร์ ) , ใช้ผสม
เฉพาะในลำดับเบส 16S rRNA . (
ปกป้อง probe / ป้าย ตั้งแต่ unhybridized
) ซึ่งเป็นค่าการย่อย .
2 ที่ตามมาของด่าง h202 กระตุ้น
ป้ายเพื่อเปล่งแสงที่ 430 nm ซึ่งผ่าน
กับลูมิโนมิเตอร์ .การ accuprobe สำหรับ
ตัววงแหวนแวนอัลเลนคือ
พบเฉพาะเจาะจงและอ่อนไหวกับการตรวจจับ
จำกัด 105 CFU ในบัฟเฟอร์ ( 27 ) แต่การประเมิน
นี้การทดสอบเพื่อวิเคราะห์ monocytogenes ลิตรใน
enrichments อาหารต่าง ๆ แสดงให้เห็นถึงผลลัพธ์ที่ falsenegative

เห็นได้ชัดว่าสื่อที่มีปริมาณเกลือ
สูงสามารถแทรกแซง หรือลดการสลายเซลล์
,ดังนั้นการป้องกันการผสมผสานด้วย
กับ rRNA เป้าหมาย ( 28 ) accuprobe และ
gene-trak probe ) และเชื้อโรคเป้าหมายแต่ละ
เลือกอยู่ในรางที่ 2