Material and methods
2.1. Tomatoes (Solanum lycopersicum)
Whole plum tomatoes, fresh, unblemished, and unwaxed were
purchased at a local market (Wyndmoor, PA) and stored overnight
at 4 C without any washing or sanitization. Tomatoes were
removed from 4 C and equilibrated to room temperature before
being inoculated.
2.2. Strain, growth conditions, and inocula preparation
A bacterial cocktail composed of three serotypes of S. enterica (S.
Montevideo G4639, S. Newport H1275, and S. Stanley H0558) was
used for this work. Selection of these strains was based on their
association, mainly with produce related outbreaks. S. Montevideo
G4639, which was isolated from a tomato-associated outbreak, was
received from Dr. Larry Beuchat at the University of Georgia. S.
Newport H1275 and S. Stanley H0558 both were associated with
alfalfa sprout-related outbreaks and were obtained from Dr. Patricia
Griffin, Center for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA. The
bacterial strains were grown by two successive loop transfers of
individual strains incubated at 37 C for 24 h in 5 ml Tryptic Soy
Broth (TSB, BBL, BD Difco, Sparks, MD). A final transfer of 0.2 ml was
made into 50ml TSB with incubation at 37 C for 18 h. The bacterial
cells were harvested by centrifugation (5000 g, 15 min) at 4 C.
Cell pellets were washed twice in 0.1% (w/v) peptone water (PW,
BBL, BD Difco) and finally suspended in PW to a achieve target
population of about 8 log CFU/ml. To enumerate the population
densities in each cell suspension, appropriate dilutions (in 0.1% PW)
were spiral plated (model D, Spiral Biotech, Bethesda, MD), in
duplicate, on to tryptic soy agar (TSA; BD Difco) plates. Equal volumes
of cultures were combined in a separate sterile test tube to
obtain a cocktail of three strains of Salmonella prior to inoculation
of tomatoes.
วัสดุและวิธีการ
2.1 มะเขือเทศ (Solanum lycopersicum)
มะเขือเทศพลัมทั้งสดที่ยอดเยี่ยมและ unwaxed ถูก
ซื้อได้ที่ตลาดในประเทศ (Wyndmoor, PA) และเก็บไว้ในชั่วข้ามคืน
ที่ 4 องศาเซลเซียสโดยไม่ต้องซักผ้าหรือฆ่าเชื้อใด ๆ มะเขือเทศถูก
ลบออกจาก 4 องศาเซลเซียสและ equilibrated ที่อุณหภูมิห้องก่อนที่จะ
ถูกเชื้อ.
2.2 ความเครียดสภาวะการเจริญเติบโตและ inocula เตรียม
ค็อกเทลแบคทีเรียประกอบด้วยสามสายพันธุ์เอส enterica (เอส
มอนเตวิเด G4639, เอสนิวพอร์ต H1275 และเอสสแตนเลย์ H0558) ถูก
ใช้สำหรับการทำงานนี้ การคัดเลือกสายพันธุ์เหล่านี้อยู่บนพื้นฐานของพวกเขา
สมาคมส่วนใหญ่กับการระบาดของโรคที่เกี่ยวข้องกับการผลิต เอสมอนเตวิเด
G4639 ซึ่งแยกได้จากการระบาดของโรคมะเขือเทศที่เกี่ยวข้องได้
รับจากดร. ลาร์รี Beuchat ที่มหาวิทยาลัยจอร์เจีย เอส
นิวพอร์ตและ S. H1275 H0558 สแตนเลย์ทั้งสองมีความสัมพันธ์กับ
การระบาดถั่วงอกหญ้าชนิตที่เกี่ยวข้องและที่ได้รับจากดร. แพทริ
กริฟฟิศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค, แอตแลนตา
สายพันธุ์แบคทีเรียที่เป็นผู้ใหญ่สองโอนห่วงต่อเนื่องของ
แต่ละสายพันธุ์ที่บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงใน 5 มล. tryptic ถั่วเหลือง
น้ำซุป (TSB, BBL, BD Difco ประกาย, MD) สุดท้ายของการถ่ายโอน 0.2 มล. ถูก
ทำให้เป็น 50ml TSB กับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง แบคทีเรีย
เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง (5000? กรัม 15 นาที) ที่ 4 องศาเซลเซียส.
เม็ดเซลล์ถูกล้างครั้งที่สองใน 0.1% (w / v) น้ำเปปโตน (PW,
BBL, BD Difco) และระงับในที่สุด PW ไป บรรลุเป้าหมาย
ประชากรประมาณ 8 log CFU / ml ระบุประชากร
หนาแน่นในแต่ละเซลล์แขวนลอย, เจือจางที่เหมาะสม (0.1% ใน PW)
ถูกเกลียวชุบ (รุ่น D, เกลียวไบโอเทค, Bethesda, MD) ใน
ที่ซ้ำกันไปวุ้นถั่วเหลือง tryptic (TSA; BD Difco) แผ่น ปริมาณที่เท่าเทียมกัน
ของวัฒนธรรมมารวมกันในหลอดทดลองผ่านการฆ่าเชื้อที่แยกต่างหากเพื่อ
ให้ได้เครื่องดื่มค็อกเทลในสามของสายพันธุ์ของเชื้อ Salmonella ก่อนที่จะมีการฉีดวัคซีน
ของมะเขือเทศ
การแปล กรุณารอสักครู่..

วัสดุและวิธีการ
2.1 . มะเขือเทศ ( ไม่สามารถจะยอมรับได้ lycopersicum )
ทั้งมะเขือเทศพลัม , สด , ผุดผ่อง และเป็นถูก
ซื้อในตลาดท้องถิ่น ( wyndmoor , PA ) และเก็บไว้ค้างคืน
ที่ 4 C โดยไม่ล้างหรือสะอาด . มะเขือเทศมี
ลบออกจาก 4 C และ equilibrated อุณหภูมิห้องก่อน
ถูก inoculated 2.2 . เงื่อนไขการเจริญเติบโตและการเตรียม inocula
เมื่อยค็อกเทลที่ประกอบด้วยแบคทีเรีย 3 ( S . enterica ( S .
Montevideo g4639 , S . newport h1275 และ S . Stanley h0558 ) คือ
ใช้สำหรับงานนี้ การคัดเลือกสายพันธุ์โดยสมาคมของพวกเขา
ส่วนใหญ่ผลิตที่เกี่ยวข้องกับการระบาด s Montevideo
g4639 ซึ่งถูกแยกจากโรคที่เกี่ยวข้องมะเขือเทศ ,
ได้รับจาก ดร. ลาร์รี่ beuchat ที่มหาวิทยาลัยจอร์เจีย
Sนิวพอร์ต h1275 และ S . Stanley h0558 ทั้งสองเกี่ยวข้องกับ
ถั่วงอกที่ระบาด และหญ้าที่ได้จากดร. แพทริเซีย
กริฟฟิน ศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค , แอตแลนตา , Ga
สายพันธุ์แบคทีเรียเติบโตโดยต่อเนื่องสองห่วงโอน
แต่ละสายพันธุ์ บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง 5 ml
อาหารซุปถั่วเหลือง ( TSB , BBL BD difco , ประกายไฟ , MD ) โอนสุดท้ายของ 02 ml คือ
กลายเป็น 50ml TSB กับบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง เซลล์แบคทีเรีย
ถูกเก็บเกี่ยวโดยการเหวี่ยงแยก ( 5 , 000 G , 15 นาที ) ที่ 4 C .
เซลล์ล้างสองครั้งในอัตรา 0.1% ( w / v ) เปปโตนน้ำ ( PW
BBL , BD difco ) และสุดท้าย แขวนลอยใน PW ให้บรรลุเป้าหมาย
ประชากรประมาณ 8 log CFU / ml ได้ระบุประชากร
ความหนาแน่นในแต่ละเซลล์การเจือจางที่เหมาะสม ( ใน 01% PW )
) ชุบ ( แบบเกลียวเกลียว D , ไบโอเทค , Bethesda , MD ) ,
ซ้ำ บนอาหารวุ้นถั่วเหลือง ( TSA ; BD difco ) จาน เท่ากับปริมาณ
วัฒนธรรมร่วมในการทดสอบหลอดฆ่าเชื้อแยก
ขอรับค็อกเทล 3 สายพันธุ์ของเชื้อซาลโมเนลลาก่อน
ของมะเขือเทศ
การแปล กรุณารอสักครู่..
