2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods
2.1. Chemicals
All chemicals were of analytical grade. Sodium dodecyl sulphate
(SDS), Coomassie blue R-250 and N,N,N0
,N0
-tetramethylethylenediamine
(TEMED) were procured from Bio-Rad Laboratories
(Hercules, CA, USA). High-molecular-weight markers were purchased
from GE Healthcare UK Limited (Buckinghamshire, UK).
Food grade bovine bone gelatin with the bloom strength of 150–
250 g was obtained from Halagel (Thailand) Co., Ltd., (Bangkok,
Thailand).
2.2. Collection and preparation of seabass skin
Descaled skin of seabass (L. calcarifer) with a weight of 2.5–3 kg,
was obtained from the Kingfisher Holdings Co., Ltd., Songkhla,
Thailand. Descaled skin was kept in ice with a skin/ice ratio 1:3
(w/w) and transported to the Department of Food Technology,
Prince of Songkla University, Hat Yai within 1 h. Upon arrival, the
remaining meat was removed manually and the skin was washed
using cold tap water. The skin was pooled and used as the composite
sample. The sample was placed in polyethylene bags and stored
at 20 C until used, but not longer than 3 months. Prior to gelatin
extraction, the frozen skin was thawed with running water until
the core temperature reached 8–10 C. The skin was then cut into
small pieces (1.0 1.0 cm2
) using scissors.
2.3. Extraction of gelatin from the skin of seabass
Gelatin was extracted from seabass skin according to the method
of Jongjareonrak et al. (2006), with slight modification. Before
gelatin extraction, skin was soaked in 0.1 M NaOH, with a skin/
solution ratio of 1:10 (w/v), to remove any non-collagenous proteins.
The mixture was stirred for 3 h at room temperature (28–
30 C) using an overhead stirrer model W20.n (IKA-Werke GmbH
& CO.KG, Stanfen, Germany). The alkaline solution was changed
every 1 h for a total of 3 times. The residues were washed with
tap water until a neutral or faintly basic pH was obtained. The residues
were then mixed with 0.05 M acetic acid at a skin/solution
ratio of 1:10 (w/v) to swell collagenous material in the fish skin
matrix. The mixture was stirred at room temperature for 2 h. The
skin was washed using tap water until a neutral or faintly acidic
pH of the wash water was obtained. Finally, the swollen skin was
mixed with distilled water at a ratio of 1:10 (w/v) at 45 and
55 C. The extraction was performed for various times (3, 6 and
12 h) with continuous stirring. At the designated time, the mixtures
were filtered using a Buchner funnel, with a Whatman No.
4 filter paper (Whatman International, Ltd., Maidstone, England).
Then, the filtrates were freeze-dried using a freeze-dryer (CoolSafe
55, ScanLaf A/S, Lynge, Denmark). Gelatin samples were subsequently
subjected to analyses.
2.4. Analyses
2.4.1. Yield
The yield of gelatin was calculated based on the dry weight of
the starting material:
Yield ð%Þ ¼ Weight of freeze dried gelatin ðgÞ
Weight of initial dry skin ðgÞ 100 ð1Þ
2.4.2. SDS–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE)
SDS–PAGE was performed according to the method of Laemmli
(1970). Gelatin samples were dissolved in 5% SDS solution. The
mixtures were heated at 85 C for 1 h using a temperature controlled
water bath model W350 (Memmert, Schwabach, Germany).
Solubilised samples were mixed at a 1:1 (v/v) ratio with sample
buffer (0.5 M Tris–HCl, pH 6.8 containing 5% SDS and 20% glycerol).
Samples were loaded onto a polyacrylamide gel made up of 7.5%
separating gel and 4% stacking gel and subjected to electrophoresis
at a constant current of 20 mA/gel. After electrophoresis, gels were
stained with 0.05% (w/v) Coomassie blue R-250 in 50% (v/v) methanol
and 7.5% (v/v) acetic acid for 30 min. Finally, they were
destained with a mixture of 50% (v/v) methanol and 7.5% (v/v) acetic
acid for 30 min and destained again with a mixture of 5% (v/v)
methanol and 7.5% (v/v) acetic acid for 1 h. High-molecular-weight
protein markers were used to estimate the molecular weight of the
proteins.
2.4.3. Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopic analysis
FTIR spectra of the gelatin samples were obtained using a FTIR
spectrometer (EQUINOX 55, Bruker, Ettlingen, Germany) equipped
with a deuterated L-alanine tri-glycine sulphate (DLATGS) detector.
A horizontal attenuated total reflectance accessory (HATR) was
mounted into the sample compartment. The internal reflection
crystal (Pike Technologies, Madison, WI, USA), made of zinc selenide,
had a 45 angle of incidence to the IR beam. Spectra were
acquired at a resolution of 4 cm1 and the measurement range
was between 650 and 4000 cm1 (mid-IR region) at room temperature.
Automatic signals were collected in 32 scans at a resolution
of 4 cm1 and were ratioed against a background spectrum
recorded from the clean empty cell at 25 C. Analysis of spectral
data was carried out using the OPUS 3.0 data collection software
programme (Bruker, Ettlingen, Germany).
2.4.4. Amino acid analysis
Amino acid composition of gelatin samples was analysed
according to the method of Nagarajan et al. (201

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เคมีภัณฑ์ทั้งหมดเคมีเกรดวิเคราะห์ได้ โซเดียมซัลเฟต dodecyl(SDS), สี Coomassie R-250 และ N, N, N0, N0-tetramethylethylenediamine(TEMED) ถูกจัดหาจากเชื้อ(เฮอร์คิวลิส CA, USA) ซื้อสูงน้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายจาก GE สุขภาพสหราชอาณาจักร จำกัด (บักกิงแฮมเชอร์ UK)อาหารเกรดกระดูกวัวตุ๋นกับบลูมแรง 150 –250 กรัมมาจาก Halagel (ประเทศไทย) จำกัด (กรุงเทพมหานครประเทศไทย)2.2. การรวบรวมและการเตรียมการของปลากะพงขาวผิวผิวที่แมชของปลากะพงขาว (L. calcarifer) มีน้ำหนัก 2.5-3 กก.ได้รับจากคิงฟิชเชอร์โฮลดิ้งส์ Co., Ltd. สงขลาไทย แมชผิวถูกเก็บไว้ในน้ำแข็งกับผิว/น้ำแข็งอัตราส่วน 1:3(w/w) และถูกขนส่งไปแผนกของเทคโนโลยีการอาหารมหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ หาดใหญ่ภายใน 1 ชม. เมื่อมาถึง การเนื้อสัตว์ที่เหลือถูกเอาออกด้วยตนเอง และถูกล้างผิวใช้น้ำเย็น ผิวพู และใช้เป็นคอมโพสิตตัวอย่าง วางไว้ในถุงพลาสติก และเก็บตัวอย่างที่ 20 C จนถึงใช้ แต่ไม่นานกว่า 3 เดือน ก่อนตุ๋นดูด ผิวแช่แข็งถูกขับกับน้ำจนถึงอุณหภูมิแกนถึงค. 8 – 10 ผิวหนังแล้วตัดเข้าชิ้นเล็ก ๆ (1.0 1.0 cm2) โดยใช้กรรไกร2.3. การสกัดเจลาตินจากผิวของปลากะพงขาววุ้นถูกแยกจากผิวหนังปลากะพงขาวตามวิธีการของ Jongjareonrak et al. (2006), มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ก่อนที่จะวุ้นสกัด ผิวถูกแช่ใน 0.1 M NaOH กับสกิน /แก้ปัญหาอัตราส่วน 1:10 (w/v), การเอาโปรตีนใด ๆ -collagenousกวนส่วนผสมสำหรับ 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (28 –30 C) โดยใช้แบบจำลองแบบช้อนคนจ่าย W20.n (IKA - Werke GmbH& CO กก. Stanfen เยอรมนี) ละลายด่างเปลี่ยนแปลงทุก 1 ชั่วโมงรวม 3 ครั้ง ตกถูกล้างด้วยน้ำประปาจนกว่าค่า pH เป็นกลาง หรือรำไรพื้นฐานได้รับ สิ่งตกค้างแล้วมาผสมกับกรดอะซิติก 0.05 M ที่ผิวการแก้ปัญหาอัตราส่วน 1:10 (w/v) วัสดุ collagenous ในหนังปลาพองตัวเมทริกซ์ กวนส่วนผสมอุณหภูมิห้องสำหรับ 2ผิวถูกล้างโดยใช้น้ำประปาจน ถึงโทนสีกลาง หรือเป็นกรดรวย ๆค่า pH ของน้ำล้างได้รับ ในที่สุด ถูกผิวหนังบวมผสมกับน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1:10 (w/v) ที่ 45 และค. 55 แยกดำเนินการสำหรับช่วงเวลาต่าง ๆ (3, 6 และ12 h) กับกวนอย่างต่อเนื่อง ในเวลาที่กำหนด ส่วนผสมกรองด้วยปล่อง Buchner หมายเลข Whatmanกระดาษ 4 กรอง (Whatman อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด Maidstone อังกฤษ)แล้ว filtrates ถูกอบแห้งโดยใช้เครื่อง freeze-อบ (CoolSafe55, ScanLaf a/s, Lynge เดนมาร์ก) เจลาตินตัวอย่างได้ในเวลาต่อมาต้องทำการวิเคราะห์2.4. วิเคราะห์2.4.1. ผลตอบแทนผลผลิตของเจลาตินคือคำนวณจากน้ำหนักแห้งของวัสดุที่เริ่มต้น:ผลð%Þ¼น้ำหนักอบแห้งวุ้น ðgÞน้ำหนักของผิวเริ่มต้น ðgÞ 100 ð1Þ2.4.2. SDS – การตรวจสอบวิเคราะห์เจอิ (SDS – หน้า)ดำเนินการตามวิธีการของ Laemmli SDS – หน้า(1970) ตัวอย่างวุ้นถูกละลายใน 5% SDS โซลูชัน การส่วนผสมที่ถูกทำให้ร้อน 85 c เป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยใช้เครื่องควบคุมอุณหภูมิน้ำอาบน้ำรุ่น W350 (ความ Schwabach เยอรมนี)ตัวอย่าง Solubilised ถูกผสมในอัตราส่วน 1:1 (v/v) พร้อมตัวอย่างบัฟเฟอร์ (0.5 M ทริสเรทติ้ง – HCl, SDS 5% ที่มีค่า pH 6.8 และกลีเซอรอล 20%)ตัวอย่างถูกโหลดลงบนเจลที่ตรวจสอบวิเคราะห์ทำขึ้น 7.5%เจลและ 4% ซ้อนแยกเจ และขึ้นอยู่กับอิที่คงกระแส 20 mA/เจล หลังจากอิ เจได้ย้อม ด้วย 0.05% (w/v) R-250 Coomassie blue ในเมทานอล 50% (v/v)และกรดอะซิติก 7.5% (v/v) 30 นาที ในที่สุด พวกเขาได้destained มีส่วนผสมของเมทานอล 50% (v/v) และ 7.5% (v/v) อะซิติกกรด 30 นาที และ destained อีก ด้วยส่วนผสมของ 5% (v/v)เมทานอลและกรดอะซิติก 7.5% (v/v) สำหรับ 1 มีน้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายโปรตีนถูกใช้ในการประมาณน้ำหนักโมเลกุลของการโปรตีน2.4.3. ฟูริเยร์แปลงอินฟราเรด (FTIR) spectroscopic วิเคราะห์FTIR สเปกตรัมอย่างวุ้นได้รับใช้เครื่อง FTIRสเปกโตรมิเตอร์ (วิษุวัต 55, Bruker, Ettlingen เยอรมนี) พร้อมด้วยเครื่อง deuterated ลานีน L tri glycine ซัลเฟต (DLATGS) ตรวจจับเป็นอุปกรณ์เสริมสะท้อนรวม attenuated แนวนอน (HATR)ติดตั้งลงในช่องใส่ตัวอย่าง แสงสะท้อนภายในคริสตัล (เทคโนโลยีหอก เมดิสัน อิน สหรัฐอเมริกา), ที่ทำจากสังกะสี selenideมีอุบัติการณ์ของมุม 45 กับลำแสง IR ได้ กระจายมาที่ความละเอียด 4 cm1 และช่วงการวัดระหว่าง cm1 650 และ 4000 (ภาคกลาง-IR) ที่อุณหภูมิห้องสัญญาณอัตโนมัติถูกเก็บใน 32 สแกนที่ความละเอียดของ 4 cm1 และ ratioed กับพื้นหลังมีสเปคตรัมบันทึกจากเซลล์ว่างสะอาดที่ 25 C. วิเคราะห์สเปกตรัมข้อมูลดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์เก็บข้อมูล OPUS 3.0โปรแกรม (Bruker, Ettlingen เยอรมนี)2.4.4. กรดอะมิโนวิเคราะห์คือวิเคราะห์องค์ประกอบของกรดอะมิโนตัวอย่างวุ้นตามวิธีของ Nagarajan et al. (201

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมี
สารเคมีทั้งหมดเป็นของเกรดวิเคราะห์ โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต
(SDS) Coomassie สีฟ้า R-250 และ N, N, N0
, N0
-tetramethylethylenediamine
(TEMED) ได้รับการจัดหาจาก Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ
(Hercules, CA, USA) เครื่องหมายโมเลกุลสูงน้ำหนักกำลังซื้อ
จาก GE Healthcare UK Limited (Buckinghamshire สหราชอาณาจักร).
ฟู้ดเกรดเจลาตินกระดูกวัวมีความแข็งแรงของบาน 150
250 กรัมที่ได้รับจาก Halagel (Thailand) Co. , Ltd. (กรุงเทพฯ,
ประเทศไทย ).
2.2 การเก็บและการจัดเตรียมของผิวปลากะพงขาว
ขจัดคราบตะกรันผิวของปลากะพงขาว ( L. calcarifer) มีน้ำหนัก 2.5-3 กิโลกรัม
ที่ได้รับจากกระเต็นโฮลดิ้ง จำกัด จังหวัดสงขลา,
ประเทศไทย ผิวขจัดคราบตะกรันที่ถูกเก็บไว้ในน้ำแข็งที่มีอัตราส่วนผิวหนัง / น้ำแข็ง 1: 3
(w / w) และเคลื่อนย้ายไปยังภาควิชาเทคโนโลยีการอาหาร,
มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์หาดใหญ่ภายใน 1 ชั่วโมง เมื่อมาถึงที่
เนื้อสัตว์ที่เหลือจะถูกลบออกด้วยตนเองและผิวถูกล้าง
โดยใช้น้ำประปาเย็น ผิวที่ได้รับการรวบรวมและนำมาใช้เป็นคอมโพสิต
ตัวอย่าง กลุ่มตัวอย่างที่ถูกวางไว้ในถุงพลาสติกชนิดและเก็บไว้
ที่ 20 องศาเซลเซียสจนใช้ แต่ไม่เกิน 3 เดือน ก่อนที่จะมีเจลาติน
สกัดผิวแช่แข็งถูกละลายด้วยน้ำที่ไหลจนกว่า
อุณหภูมิแกนถึง 8-10 องศาเซลเซียสผิวที่ถูกแล้วตัดเป็น
ชิ้นเล็ก ๆ (1.0 1.0 cm2
) โดยใช้กรรไกร.
2.3 การสกัดเจลาตินจากหนังปลากระพงขาว
เจลาตินเป็นสารสกัดจากหนังปลากะพงขาวตามวิธีการ
ของ Jongjareonrak et al, (2006) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ก่อน
การสกัดเจลาตินผิวถูกแช่ใน 0.1 M NaOH กับผิวหนัง /
อัตราส่วนการแก้ปัญหา 1:10 (w / v) เพื่อเอาโปรตีนที่ไม่ใช่ collagenous ใด ๆ .
ส่วนผสมที่ถูกกวนเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (28-
30 C) โดยใช้รูปแบบการกวนค่าใช้จ่าย W20.n (IKA? -Werke GmbH
& CO.KG, Stanfen, เยอรมนี) วิธีการแก้ปัญหาที่เป็นด่างก็เปลี่ยน
ทุก 1 ชั่วโมงรวมเป็น 3 ครั้ง ตกค้างถูกล้างด้วย
น้ำประปาจนกว่าจะมีค่า pH เป็นกลางหรือพื้นฐานแผ่วเบาที่ได้รับ ตกค้าง
ถูกผสมแล้วกับ 0.05 M กรดอะซิติกที่ผิวหนัง / วิธีการแก้ปัญหา
อัตราส่วน 1:10 (w / v) บวมวัสดุ collagenous ในปลาผิว
แมทริกซ์ ส่วนผสมที่ถูกกวนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง
ผิวถูกล้างโดยใช้น้ำประปาจนกว่าจะเป็นกลางหรือเป็นกรดราง
พีเอชของน้ำล้างได้ ในที่สุดผิวหนังบวมได้รับการ
ผสมกับน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1:10 (w / v) ที่ 45 และ
55 องศาเซลเซียสสกัดได้ดำเนินการสำหรับหลาย ๆ ครั้ง (3, 6 และ
12 ชั่วโมง) ด้วยการกวนอย่างต่อเนื่อง ในช่วงเวลาที่กำหนดไว้ผสม
ถูกกรองโดยใช้ช่องทาง Buchner กับ Whatman ฉบับที่
4 กระดาษกรอง (Whatman อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด เมดสโตนอังกฤษ).
จากนั้นกรองได้แห้งใช้แช่แข็งเครื่องเป่า (CoolSafe
55 , ScanLaf A / S, Lynge, เดนมาร์ก) ตัวอย่างเจลาตินที่ได้รับต่อมา
ภายใต้การวิเคราะห์.
2.4 การวิเคราะห์
2.4.1 ผลผลิต
ผลผลิตของเจลาตินที่คำนวณได้อยู่บนพื้นฐานของน้ำหนักแห้งของ
วัสดุที่เริ่มต้น:
ผลผลิต% d Þ¼ของน้ำหนักแห้งแช่แข็งเจลาตินðgÞ
น้ำหนักผิวแห้งเริ่มต้นðgÞ 100 ð1Þ
2.4.2 ระบบ SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
ระบบ SDS-PAGE ได้ดำเนินการตามวิธีการของ Laemmli
(1970) ตัวอย่างเจลาตินละลายใน 5% วิธีการแก้ปัญหา SDS
ผสมถูกความร้อนที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยใช้ควบคุมอุณหภูมิ
น้ำรุ่นอาบน้ำ W350 (MEMMERT, Schwabach, เยอรมนี).
ตัวอย่าง Solubilised ถูกผสมที่ 1: 1 (v / v) อัตราส่วนกับตัวอย่าง
บัฟเฟอร์ (0.5 M Tris-HCl ค่า pH 6.8 มีระบบ SDS 5% และกลีเซอรีน 20%).
ตัวอย่างถูกโหลดไปยังเจลอะคริเลตที่สร้างขึ้นจาก 7.5%
เจลแยกและ 4% เจลซ้อนและเป็นไป electrophoresis
ในปัจจุบันคงที่ของ 20 mA / เจล หลังจาก electrophoresis เจลถูก
ย้อมด้วยสี 0.05% (w / v) Coomassie สีฟ้า R-250 ใน 50% (v / v) เมทานอล
และ 7.5% (v / v) กรดอะซิติกเป็นเวลา 30 นาที ในที่สุดพวกเขาก็ถูก
destained ที่มีส่วนผสมของ 50% (v / v) เมทานอลและ 7.5% (v / v) อะซิติก
กรดเป็นเวลา 30 นาทีและ destained อีกครั้งที่มีส่วนผสมของ 5% (v / v)
เมทานอลและ 7.5% (V / v) กรดอะซิติกเป็นเวลา 1 ชั่วโมง สูงน้ำหนักโมเลกุล
เครื่องหมายโปรตีนถูกนำมาใช้ในการประมาณน้ำหนักโมเลกุลของ
โปรตีน.
2.4.3 ฟูเรียร์อินฟราเรด (FTIR) การวิเคราะห์สเปกโทรสโก
FTIR สเปกตรัมของตัวอย่างเจลาตินที่ได้รับใช้ FTIR
สเปกโตรมิเตอร์ (EQUINOX 55, Bruker, Ettlingen, เยอรมนี) ติดตั้ง
กับ L-อะลานีนซัลเฟต Tri-glycine (DLATGS) เครื่องตรวจจับ deuterated.
รวมจางแนวนอน สะท้อนอุปกรณ์เสริม (HATR) ได้รับการ
ติดตั้งลงในช่องตัวอย่าง ภายในสะท้อน
คริสตัล (หอก Technologies, Madison, WI, USA) ทำจาก selenide สังกะสี
มี 45 มุมตกกระทบลำแสงอินฟราเรด Spectra ถูก
ได้มาที่ความละเอียด 4 CM1 และช่วงการวัด
อยู่ระหว่าง 650 และ 4000 CM1 (กลาง IR ภูมิภาค) ที่อุณหภูมิห้อง.
สัญญาณอัตโนมัติถูกเก็บไว้ใน 32 สแกนที่ความละเอียด
4 CM1 และ ratioed กับสเปกตรัมพื้นหลัง
บันทึก จากเซลล์ที่ว่างเปล่าที่สะอาดที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสการวิเคราะห์สเปกตรัม
ข้อมูลที่ถูกนำออกมาใช้บทประพันธ์ 3.0 ข้อมูลซอฟแวร์คอลเลกชัน
Program (Bruker, Ettlingen, เยอรมนี).
2.4.4 การวิเคราะห์กรดอะมิโน
กรดอะมิโนกรดของตัวอย่างเจลาตินที่ได้มาวิเคราะห์
ตามวิธีการของ Nagarajan et al, (201

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . เคมีภัณฑ์วิเคราะห์สารเคมีทั้งหมดเป็นเกรด โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต( SDS ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250 และ N , N , NO30 ,- tetramethylethylenediamine( temed ) จัดหาจากห้องปฏิบัติการราดไบโอ( ดาว , CA , USA ) สูงโมเลกุลเครื่องหมายถูกซื้อจาก GE Healthcare UK Limited ( เหมือนเดิม , UK )เกรดอาหารวัวกระดูกเจลาตินกับความแข็งแรงของ 150 –บลูม250 กรัม ได้จาก halagel ( ประเทศไทย ) จำกัด ( กรุงเทพประเทศไทย )2.2 . คอลเลกชันและการเตรียมผิว ปลากระพงขอดเกล็ดผิวหนังของปลากะพงขาว ( L . ของแกะด้วยน้ำหนัก 2.5 – 3 กิโลกรัมได้จากนกกระเต็น โฮลดิ้ง จำกัด สงขลาประเทศไทย ขอดเกล็ดผิวหนังที่ถูกเก็บไว้ในน้ำแข็ง ด้วยอัตราส่วน 1 : 3 ผิว / น้ำแข็ง( w / w ) และส่งไปยังภาควิชาเทคโนโลยีทางอาหารมหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ หาดใหญ่ ภายใน 1 ชั่วโมง เมื่อมาถึงเหลือเนื้อถูกลบออกด้วยตนเองและผิวหนังที่ถูกล้างการใช้น้ำเย็น ผิวหนังที่ถูกรวมและใช้เป็นคอมโพสิตตัวอย่าง ตัวอย่างถูกวางไว้ในถุง polyethylene และจัดเก็บที่ 20 C จนชิน แต่ไม่เกิน 3 เดือน ก่อนที่จะมีเจลาตินการสกัด , แช่แข็งละลายกับน้ำจนผิวเป็นวิ่งแกนอุณหภูมิถึง 8 – 10 องศาเซลเซียสแล้วตัดเป็นผิวคือชิ้นเล็ก ( 1.0 1.0 ตร. ซม.) การใช้กรรไกร2.3 การสกัดเจลาตินจากหนังปลากะพงเจลาตินสกัดจากผิวหนังตามวิธีการ ปลากระพงของ jongjareonrak et al . ( 2006 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ก่อนที่การสกัดเจลาติน ผิวชุ่มใน 0.1 M NaOH กับผิว /โซลูชั่นของอัตราส่วน 1 : 10 ( w / v ) เพื่อลบใด ๆที่ไม่ collagenous โปรตีนผสมส่วนผสมที่กวน 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ( 28 )30 องศาเซลเซียส ) โดยใช้ค่าใช้จ่ายหมุนแบบ w20 . N ( Ika werke GmbH& co.kg stanfen , เยอรมนี ) สารละลายด่างถูกเปลี่ยนทุก 1 ชั่วโมง รวมเป็น 3 ครั้ง ถูกล้างด้วยสารพิษตกค้างน้ำประปาจนเป็นกลาง หรือบางๆพื้นฐาน pH ได้ สารพิษตกค้างแล้วผสมกับ 0.05 M กรดอะซิติกที่แก้ปัญหาผิว /อัตราส่วน 1 : 10 ( w / v ) บวม collagenous ในปลาผิววัสดุเมทริกซ์ ผสมส่วนผสมที่กวนไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมงผิวล้างใช้น้ำจากก๊อกจนเป็นกลางหรือเป็นกรดบางๆpH ของน้ำล้างได้ . ในที่สุด ผิวหนังบวม คือผสมกับน้ำในอัตราส่วน 1 : 10 ( w / v ) ที่ 45 และ55 C สกัดแสดงเวลาต่าง ๆ ( 3 , 6 และ12 ชั่วโมง ) อย่างต่อเนื่อง กวน ที่เขต เวลา ผสมถูกกรองโดยใช้กรวยกรองบุชเนอร์ กับ whatman ไม่กระดาษ 4 ตัวกรอง ( whatman อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด เมดสโตน ประเทศอังกฤษ )แล้ว มีการใช้สารละลายแช่แข็งแช่แข็งแห้ง ( coolsafe55 , scanlaf A / S lynge , เดนมาร์ก ) ตัวอย่างเจลาตินเป็นในภายหลังรับวิเคราะห์ข้อมูล2.4 . การวิเคราะห์เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . ผลผลิตผลได้ของเจลาตินคำนวณจากน้ำหนักแห้งของกำลังวัสดุผลผลิตð % Þ¼หนักตรึงเจลาตินðกรัมÞแห้งน้ำหนักเริ่มต้นแห้งผิวðÞð 1 Þ 100 กรัม2.4.2 . SDS - polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS ) หน้า )SDS - หน้าถูกแสดงตามวิธีการของ laemmli( 1970 ) ตัวอย่างเจลาตินละลายใน 5 % SDS โซลูชั่น ที่ส่วนผสมมีอุณหภูมิ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง โดยใช้อุณหภูมิควบคุมน้ำที่อาบแบบ w350 ( MEMMERT Schwabach , เยอรมนี )ตัวอย่าง solubilised ถูกผสมในอัตราส่วน 1 : 1 ( v / v ) กับตัวอย่างบัฟเฟอร์ ( 0.5 เมตรโดย– HCl , พีเอช 6.8 ที่มีถึง 5 % SDS และ 20% รอล )จำนวนโหลดไปยัง polyacrylamide gel ขึ้น 7.5%แยกเจลและ 4% และต้องซ้อนเจลอิเลคโตรโฟเรซีสณปัจจุบันคงที่ 20 MA / เจล หลังจากอิเล็กเจลคือเปื้อน 0.05% ( w / v ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250 50 % ( v / v ) เมทานอลและ 7.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดเป็นเวลา 30 นาที ในที่สุด พวกเขาคือdestained ที่มีส่วนผสมของ 50 % ( v / v ) เมทานอลและ 7.5 % ( v / v ) ติคกรดสำหรับ 30 นาที destained อีกครั้งด้วยส่วนผสมของ 5% ( v / v )เมทานอลและ 7.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดน้ำหนักโมเลกุลสูงเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเครื่องหมายโปรตีนถูกใช้เพื่อคำนวณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน2.4.3 . ฟูเรียร์ทรานฟอร์มอินฟราเรดสเปกโทรสโกปี ( FTIR ) การวิเคราะห์FTIR spectra ของเจลาตินที่ได้ใช้ ( ตัวอย่างสเปกโตรมิเตอร์ ( Equinox 55 บรุคเกอร์ Ettlingen เยอรมนี , ) พร้อมกับ deuterated ไตรไกลซีนอะลานีนซัลเฟต ( dlatgs ) เครื่องตรวจจับแนวนอนการรวมค่าอุปกรณ์ ( hatr ) คือติดตั้งลงในตัวอย่างช่อง . การสะท้อนแสงภายในคริสตัล ( หอก Technologies , Madison , WI , USA ) , ทำจากสังกะสี ซีลีไนด์มี 45 มุมตกกระทบกับ IR Beam สเปกตรัมคือที่ได้รับมติ 4 CM1 และช่วงการวัดระหว่าง 650 000 CM1 ( กลางและภูมิภาค ) ที่อุณหภูมิห้องสัญญาณอัตโนมัติจำนวน 32 สแกนที่ความละเอียดใน4 CM1 และ ratioed กับพื้นหลังของสเปกตรัมบันทึกจากการทำความสะอาดเซลล์ที่ว่างเปล่าที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสการวิเคราะห์สเปกตรัมข้อมูลที่ใช้ในซอฟต์แวร์คอลเลกชัน 3.0 ข้อมูลโปรแกรม ( BRUKER Ettlingen เยอรมนี , )2.4.4 . การวิเคราะห์กรดอะมิโนองค์ประกอบกรดอะมิโนของกลุ่มตัวอย่างนำมาวิเคราะห์เจลาตินตามวิธีการของ nagarajan