9.1. Lipopolysaccharide Stimulation

9.1. Lipopolysaccharide Stimulation of THP-1 Cells. The
human monocytic leukemia cell line THP-1 was used for
studying antiinflammatory potential of natural products or
pharmaceuticals as it is a highly differentiated monocytic
cell line with phagocytic properties and has Fc as well as
C3b receptors. Indeed, it is the most commonly used model
to study the biology of foam cell formation because it can
be easily induced to a macrophage phenotype after phorbol
ester treatment [108]. Furthermore, these cells have been
reported to produce proinflammatory cytokines (IL-1, IL-6,
and TNF) and chemokines (IL-8 and MCP-1) in response to
lipopolysaccharide (LPS) stimulation [109, 110]. The THP-1
cell line, rather than human monocytes, was used as in vitro
model system to minimize variability and to allow for high
throughput. Using the THP-1 cells, one can demonstrated
that, under hyperglycemic conditions, superoxide anion and
IL-6 release are increased, as observed in diabetic monocytes,
and can elucidated the molecular mechanisms that mediate
the increased superoxide anion and cytokine release from
diabetic monocytes [111–113]. Thus, the THP-1 cell line
is the best in vitro model system to understand monocyte/
macrophage biology as it relates to human disease.
The cells will be grown in 75 mm2 flasks in RPMI supplemented
with fetal bovine serum until they attained 70%
confluency. On reaching confluency, the cells will be plated in
12-well tissue culture plates (5 × 105 cells/mL) in serum-free
medium at 37◦C in 5% CO2. The cells will be challenged with
different concentrations (0–1000 μg/L) of LPS for different
times (4, 12, and 24 h). The supernatants will be harvested
after each time point and stored frozen at −20◦C until
analysis. IL-1β, TNF-α, and IL-6 will be quantified in all
supernatants. The cells were lysed in 0.1 mol/L NaOH and
the results for release of each cytokine will be reported as
per milligram of protein. The intra- and interassay CVs for
the cytokine assays will be

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

9.1. lipopolysaccharide กระตุ้นเซลล์ THP-1 ที่ใช้สำหรับบรรทัดของเซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาว monocytic มนุษย์ THP-1ศึกษาศักยภาพ antiinflammatory ของธรรมชาติ หรือยาที่จะสังเกตคำ monocyticบรรทัด มีคุณสมบัติ phagocytic เซลล์ และมี Fc เป็นC3b receptors แน่นอน เป็นรูปแบบที่ใช้บ่อยที่สุดการศึกษาชีววิทยาของการก่อตัวเซลล์โฟมเนื่องจากสามารถสามารถเกิดได้กับ macrophage phenotype หลัง phorbolรักษาเอส [108] นอกจากนี้ เซลล์เหล่านี้ได้รายงานการผลิต proinflammatory cytokines (IL-1, IL-6และ TNF) และ chemokines (IL-8 และ MCP 1) เพื่อตอบสนองกระตุ้น lipopolysaccharide (LPS) [109, 110] THP 1รายการเซลล์ มากกว่ามนุษย์ monocytes ถูกใช้ในหลอดแบบจำลองระบบ เพื่อลดความแปรผัน และให้สูงอัตราความเร็ว โดยใช้เซลล์ THP 1 หนึ่งสามารถแสดงที่ ภายใต้เงื่อนไข hyperglycemic, anion ซูเปอร์ออกไซด์ และIL-6 รุ่นเพิ่มขึ้น เท่าที่สังเกตใน monocytes โรคเบาหวานและสามารถ elucidated กลไกระดับโมเลกุลที่บรรเทาanion ซูเปอร์ออกไซด์เพิ่มขึ้นและอย่างไร cytokine ออกจากโรคเบาหวาน monocytes [111 – 113] ดังนั้น THP-1 เซลล์รายการเป็นระบบการเพาะเลี้ยงรุ่นสุดเข้าใจโมโนไซต์ /macrophage ชีววิทยาที่เกี่ยวข้องกับโรคของมนุษย์เซลล์จะเติบโตในน้ำระดับ 75 มม 2 ได้ภายใน RPMI เสริมด้วยเซรั่มวัวครรภ์จนกว่าจะได้ 70%confluency ในการเข้าถึง confluency เซลล์ที่จะถูกชุบในเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อดี 12 แผ่น (5 × 105 เซลล์/มล.) ในซีรั่มฟรีกลางที่ 37◦C 5% CO2 เซลล์จะถูกท้าทายด้วยความเข้มข้นแตกต่างกัน (0-1000 μg/L) ของ LPS ในแตกต่างกันเวลา (4, 12 และ 24 ชม) Supernatants จะเก็บเกี่ยวได้ตลอดหลังจากเวลาแต่ละจุด และเก็บ แช่แข็งที่ −20◦C จนถึงวิเคราะห์ จะ quantified IL 1β, TNF ด้วยกองทัพ และ IL-6 ทั้งหมดsupernatants เซลล์ถูก lysed ใน 0.1 โมล/L NaOH และจะรายงานผลสำหรับรุ่นของแต่ละอย่างไร cytokineต่อ milligram โปรตีน CVs อินทราและ interassay สำหรับจะ assays อย่างไร cytokine < 10% และจุดเวลาเฉพาะจะเป็นกระตุ้นทำได้อย่างไร cytokine ที่สูงสุดตั้งข้อสังเกต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

9.1 lipopolysaccharide กระตุ้น THP-1 เซลล์
เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวของมนุษย์ monocytic สาย THP-1
ที่ใช้สำหรับการศึกษาที่มีศักยภาพต้านการอักเสบของผลิตภัณฑ์ธรรมชาติหรือยามันเป็น
monocytic
แตกต่างอย่างมากสายพันธุ์ของเซลล์ที่มีคุณสมบัติและมีความphagocytic Fc
เช่นเดียวกับผู้รับC3b แท้จริงมันเป็นรูปแบบที่ใช้กันมากที่สุดในการศึกษาชีววิทยาของการสร้างเซลล์โฟมเพราะมันสามารถถูกเหนี่ยวนำให้เกิดได้อย่างง่ายดายเพื่อฟีโนไทป์macrophage หลังจาก phorbol รักษาเอสเตอร์ [108] นอกจากนี้เซลล์เหล่านี้ได้รับการรายงานในการผลิต proinflammatory cytokines (IL-1, IL-6, และ TNF) และ chemokines (IL-8 และ MCP-1) ในการตอบสนองต่อlipopolysaccharide (LPS) กระตุ้น [109 110] THP-1 สายพันธุ์ของเซลล์มากกว่า monocytes มนุษย์ใช้เป็นในหลอดทดลองแบบจำลองระบบเพื่อลดความแปรปรวนและเพื่อให้สูงผ่าน ใช้ THP-1 เซลล์หนึ่งสามารถแสดงให้เห็นว่าภายใต้เงื่อนไขที่ระดับน้ำตาลในเลือด, ไอออน superoxide และIL-6 การเปิดตัวจะเพิ่มขึ้นเป็นที่สังเกตใน monocytes โรคเบาหวานและสามารถอธิบายกลไกระดับโมเลกุลที่เป็นสื่อกลางในไอออนsuperoxide ที่เพิ่มขึ้นและการเปิดตัวไซโตไคน์จากmonocytes โรคเบาหวาน [111-113] ดังนั้นเซลล์ THP-1 ที่ดีที่สุดในหลอดทดลองแบบจำลองระบบที่จะเข้าใจ monocyte / ชีววิทยา macrophage ที่เกี่ยวข้องกับโรคของมนุษย์. เซลล์จะมีการเติบโตขึ้นใน 75 mm2 ขวดใน RPMI เสริมด้วยซีรั่มวัวของทารกในครรภ์จนกว่าพวกเขาจะบรรลุ70% confluency . เมื่อถึง confluency เซลล์จะถูกชุบใน12 แผ่นเดียวกับการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ (5 × 105 เซลล์ / มิลลิลิตร) ในซีรั่มฟรีขนาดกลางที่37◦CในCO2 5% เซลล์จะถูกท้าทายด้วยความเข้มข้นแตกต่างกัน (0-1000 ไมโครกรัม / ลิตร) ของซีรี่ส์ที่แตกต่างกันสำหรับครั้ง(4, 12, และ 24 ชั่วโมง) supernatants จะถูกเก็บเกี่ยวหลังจากจุดในแต่ละครั้งและจัดเก็บแช่แข็งที่-20◦Cจนการวิเคราะห์ IL-1β, TNF-αและ IL-6 จะได้รับการวัดในทุกsupernatants เซลล์ถูก lysed ใน NaOH 0.1 mol / L และผลสำหรับการเปิดตัวของไซโตไคน์แต่ละคนจะได้รับรายงานว่าต่อมิลลิกรัมของโปรตีน ประวัติ intra- กันมีและสำหรับการตรวจไซโตไคน์จะ<10% และจุดเวลาที่เฉพาะเจาะจงที่กระตุ้นไซโตไคน์ประสบความสำเร็จสูงสุดที่จะได้รับการตั้งข้อสังเกต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

9.1 . สีดำเข้ม thp-1 กระตุ้นเซลล์
มนุษย์ monocytic ลูคีเมียเซลล์เส้น thp-1
ศึกษาศักยภาพการใช้ผลิตภัณฑ์ธรรมชาติหรือ
ยาเป็นอย่างสูงที่แตกต่าง monocytic
ไพรที ด้วยคุณสมบัติของสิ่งแปลกปลอมและมี FC เช่นกัน
c3b receptor จริงๆแล้ว มันเป็นที่ใช้กันมากที่สุดรูปแบบ
ศึกษาชีววิทยาของการพัฒนาเซลล์โฟม เพราะมันสามารถเป็นง่ายๆเป็นแมคโครฟาจ
กระตุ้นการหลังการรักษา เ phorbol
[ 108 ] นอกจากนี้ เซลล์เหล่านี้ได้รับการรายงานเพื่อผลิต proinflammatory cytokines (
1
, IL-6 และ TNF , คีโมไคนส์ ( 8 ) และในการตอบสนองได้ดี )

สีดำเข้ม ( หล่อลื่น ) กระตุ้น [ 109 , 110 ] Cell thp-1
มากกว่ามนุษย์โมโนไซท ,ใช้ในระบบแบบหลอดแก้ว เพื่อลดความแปรปรวน
และอนุญาตให้มีอัตราความเร็วสูง

การใช้เซลล์ thp-1 หนึ่งสามารถแสดง
, ภายใต้เงื่อนไขกิจกรรมและสร้าง , ไอออนออกไซด์
ปล่อยเพิ่มขึ้น เท่าที่สังเกตในโมโนไซทเบาหวาน
และสามารถทำการไกล่เกลี่ยกลไกระดับโมเลกุลที่เพิ่มขึ้นและ Superoxide anion

ปล่อยจากไซโตไคน์เบาหวานโมโนไซท [ 111 - 113 ] ดังนั้น สาย thp-1 เป็นแบบจำลองระบบ
เซลล์ในหลอดทดลองที่ดีที่สุดที่จะเข้าใจโมโนไซต์ / แมโครฟาจ
ชีววิทยาในขณะที่มันเกี่ยวข้องกับโรคในมนุษย์ .
เซลล์จะถูกปลูกในขวด 75 แน่นใน RPMI เสริม
กับทารกในครรภ์และเซรั่มจนกว่าพวกเขาจะบรรลุ 70 %
confluency . เมื่อถึง confluency เซลล์จะถูกชุบ
12 ดีจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ( 5 × 105 เซลล์ / มิลลิลิตร ) ใน serum-free
ขนาดกลางที่ 37 องศาเซลเซียส ใน◦คาร์บอนไดออกไซด์ 5% เซลล์จะถูกท้าทายด้วย
ความเข้มข้นต่างกัน ( 0 – 1000 μ g / L ) สเปรย์หล่อลื่นสำหรับเวลาที่ต่างกัน
( 4 , 12 และ 24 ชั่วโมง ) การ supernatants จะเก็บเกี่ยว
หลังจากที่แต่ละจุดเวลาและเก็บแช่แข็งที่อุณหภูมิ 20 C −◦จนกว่า
การวิเคราะห์ บีตา - 1 , α TNF และ IL-6 จะ quantified ใน
supernatants .เซลล์ก็ lysed 0.1 โมลต่อลิตร NaOH และ
ผลปล่อยแต่ละไซโตไคน์จะรายงาน
ต่อมิลลิกรัมโปรตีน ภายใน และ interassay CVS
) ไซโตไคน์จะ < 10% , และเวลาที่เฉพาะเจาะจงจุดที่กระตุ้นไซโตไคน์ที่ประสบความสำเร็จสูงสุด

จะได้ระบุไว้เป็นอย่างอื่น