but these differences in expression

but these differences in expression levels had no effect on the highly 35 significant การลดปริมาณ efficacy of the tested antibodies.
The ฮิวเมน PBMC/mouse SCID in vivo model was successfully used to show การลดปริมาณ of activated ฮิวเมน, LAG-3 expressing T cells in the peritoneum of immunocompromised SCID mice. Depending on donor, route of administration and time point of analysis, between 84.22-99.71% of
LAG-3 positive ฮิวเมน CD4 T cells and between 84.64-99.62% of LAG-3 positive ฮิวเมน CD8 T cells were depleted. As shown in Figure 2, co-administration of 5mg/kg H5L7BW to activated ฮิวเมน PBMCs in the peritoneum of SCID mice led to highly significant การลดปริมาณ of LAG-3 positive CD4 and CD8 positive T cells 24 hours after injection compared to Control IgG injected animals.
5 Figure 3 highlights the comparison between 5mg/kg H5L7BW and H5L7 5 hours after co-i.p.
administration to activated ฮิวเมน PBMCs as described before. Both antibodies induced highly
significant การลดปริมาณ of LAG-3 positive CD4 and CD8 T cells (Figure 3A).
As shown in Figure 4, administration of 5mg/kg H5L7BW via the intra-venous route resulted
in a highly statistically significant การลดปริมาณ of LAG-3 positive T cells after 5 hours (Figure 4A), similar 10 to what was observed in the experiments with i.p. co-administered LAG-3 การลดปริมาณ antibodies. The
comparison between i.v. administered H5L7BW, H5L7 and IMP731 (all at 5mg/kg) 5 hours after i.p.
administration of activated ฮิวเมน PBMCs revealed very similar การลดปริมาณ efficacies between the 3
molecules compared to control treated animals (Figure 5). Each of the 3 tested LAG-3 depleting
antibodies caused highly significant reduction in the number of LAG-3 positive CD4 and CD8 T cells 15 (Figure 5A) with H5L7BW demonstrating greater การลดปริมาณ capacity compared to H5L7 or IMP731.

Example 8: Binding analysis of แอนติ-LAG-3 ฮิวเมไนซ์ antibodies to recombinant soluble ฮิวเมน Fc gamma รีเซปเตอร์s using the ProteOnTM
ฮิวเมน FcyRIIIa binding was investigated in order to assess the ability of H5L7 and H5L7BW 20 to induce antibody dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC). H5L7 and H5L7BW แอนติ-LAG-3
antibodies were assessed for binding to recombinant soluble ฮิวเมน FcyRIIIa in addition to FcyRI
and FcyRII รีเซปเตอร์s using the ProteOnTM XPR36 (BioRadTM) biosensor machine, and were compared
against chimeric antibody IMP731.
A goat แอนติ-poly-histidine IgG was immobilised on a GLM biosensor chip by primary amine 25 coupling. This surface was used as a capture surface for the poly-histidine tagged ฮิวเมน Fc gamma
รีเซปเตอร์s. Antibodies to be tested were used as the analyte and passed over at 2048nM, 512nM,
128nM, 32nM and 8nM with an injection of OnM (i.e. buffer alone) used to double reference the
binding curves. The goat แอนติ-poly-histidine IgG surface was regenerated with 100mM phosphoric
acid between interactions. The run was carried out on the ProteOn XPR36 Protein Array Interaction 30 System at 25°c and using HBS-EP as running buffer. Data was analysed for each รีเซปเตอร์
separately, setting a global R-max and using the Equilibrium Model inherent to the ProteOn's
analysis software. Control molecules were run at the beginning and the end of the set of samples to
be tested to ensure comparability of results. Data was compared from two experiments and hybrid
control antibodies used as controls between experiments.

35 The results show that H5L7BW bound both polymorphisms of FcyRIIIa (valine V158 and
phenylalanine F158) with an improved แอฟฟินิตี้ of approximately 10 fold in comparison to H5L7 (see

Table 6). ฟิวโคซิเลตเตด antibody H5L7 bound to FcyRIIIa with a similar แอฟฟินิตี้ as chimeric antibody IMP731.
No significant changes were observed between the binding of the ฮิวเมไนซ์ ฟิวโคซิเลตเตด and อะฟิวโคซิเลตเตด แอนติ-LAG-3 antibodies for the FcyRI or FcyRIIa รีเซปเตอร์s.
5 Table 6: Binding of H5L7 and H5L7BW to ฮิวเมน Fc gamma รีเซปเตอร์s

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แต่ความแตกต่างเหล่านี้ในระดับนิพจน์ได้ผลไม่สูง 35 การลดปริมาณที่สำคัญประสิทธิภาพของแอนตี้ทดสอบวทคร PBMC/เมาส์ ฮิวเมนในรุ่น vivo สำเร็จถูกใช้แสดงการลดปริมาณของฮิวเมนที่เปิดใช้งาน ความล่าช้า 3 แสดง T เซลล์ใน peritoneum ของหนูวทครภูมิคุ้มกัน ขึ้นอยู่กับผู้บริจาค เส้นทางบริหารและจุดเวลาของการวิเคราะห์ ระหว่าง 84.22 99.71% ของเซลล์ CD4 T ฮิวเมนบวก 3 ความล่าช้า และถูกหมดเซลล์ CD8 T ฮิวเมนบวกระหว่าง 84.64 99.62% 3 ความล่าช้า ดังแสดงในรูปที่ 2, 5 มก./กก. H5L7BW เพื่อเรียกใช้ PBMCs ฮิวเมนใน peritoneum ของหนูภายใต้นำไปการลดปริมาณสำคัญมากของความล่าช้า 3 บวก CD4 และ CD8 บวก T เซลล์ 24 ชั่วโมงหลังจากฉีดเปรียบเทียบกับสัตว์ควบคุม IgG ฉีดร่วมบริหารรูป 5 3 เน้นการเปรียบเทียบระหว่าง 5 มก./กก. H5L7BW และ H5L7 5 ชั่วโมงหลังจาก co i.p.จัดการเรียกใช้ฮิวเมน PBMCs ตามที่อธิบายไว้ก่อน แอนตี้ทั้งเกิดสูงการลดปริมาณสำคัญของความล่าช้า 3 บวก CD4 และ CD8 T เซลล์ (รูปที่ 3A)ดังแสดงในรูปที่ 4 บริหาร 5 มก./กก. H5L7BW ผ่านเส้นทางดำภายในผล ในการลดปริมาณอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติสูงความล่าช้า 3 บวก T เซลล์หลังจาก 5 ชั่วโมง (รูปที่ 4A), 10 คล้ายกับสิ่งที่สังเกตในการทดลองกับ i.p. ร่วมจัดการแอนตี้การลดปริมาณ 3 ความล่าช้า ที่ เปรียบเทียบระหว่าง i.v. จัดการ H5L7BW, H5L7 และ IMP731 ทั้งหมดที่ 5mg/kg) 5 ชั่วโมงหลังจาก i.p. จัดการของ PBMCs ฮิวเมนเปิดเปิดเผยคล้ายการลดปริมาณ efficacies ระหว่าง 3 โมเลกุลเมื่อเทียบกับควบคุมสัตว์บำบัด (5 รูป) แห่ง 3 ทดสอบความล่าช้า 3 พึ่ง แอนตี้เกิดลดสูงสำคัญในจำนวนของความล่าช้า 3 บวก CD4 และ CD8 T เซลล์ 15 (รูปของ 5A) กับ H5L7BW ที่เห็นความสามารถการลดปริมาณมากขึ้นเมื่อเทียบกับ H5L7 หรือ IMP731ตัวอย่างที่ 8: วิเคราะห์รวมแอนตี้แอนติ-ความล่าช้า-3 ฮิวเมไนซ์เพื่อฮิวเมน recombinant ละลาย Fc แกมมา รีเซปเตอร์s ใช้ ProteOnTM การฮิวเมน FcyRIIIa ผูกถูกตรวจสอบเพื่อประเมินความสามารถของ H5L7 และ H5L7BW 20 ชวนแอนติบอดีขึ้นเซลล์ mediated cytotoxicity (ADCC) H5L7 และ H5L7BW แอนติ-ความล่าช้า-3 แอนตี้ถูกประเมินรวมกับฮิวเมน recombinant ละลาย FcyRIIIa นอกจาก FcyRI และใช้ ProteOnTM XPR36 รีเซปเตอร์s FcyRII (BioRadTM) เครื่อง biosensor และถูกเปรียบเทียบ กับ chimeric แอนติบอดี IMP731แพะเป็น IgG แอนติ-โพลี-histidine เป็น immobilised บนชิปที่ biosensor GLM โดย amine หลัก 25 คลัป พื้นที่นี้ถูกใช้เป็นพื้นที่จับสำหรับแท็ก histidine โพลีฮิวเมน Fc แกมมา รีเซปเตอร์s แอนตี้จะทดสอบ analyte ที่ใช้ และส่งผ่านที่ 2048nM, 512nM 128nM, 32nM และ 8nM กับฉีดของ OnM (เช่นบัฟเฟอร์เพียงอย่างเดียว) ใช้ในการอ้างอิงคู่ ผูกเส้นโค้ง มีสร้างพื้นผิว IgG แอนติ-โพลี-histidine แพะกับ phosphoric 100 มม. กรดระหว่างการโต้ตอบ การรันถูกดำเนินระบบ ProteOn XPR36 โปรตีนเรย์โต้ตอบ 30 ที่ 25° c และใช้ HBS EP ใช้บัฟเฟอร์ ข้อมูลถูก analysed สำหรับแต่ละรีเซปเตอร์ ตั้งสากล R สูงแยก และการใช้แบบสมดุลโดยธรรมชาติจะเป็น ProteOn ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ ควบคุมโมเลกุลถูกเรียกใช้ที่เริ่มต้นและจุดสิ้นสุดของชุดของตัวอย่างที่ ทดสอบเพื่อให้แน่ใจความของผล ข้อมูลเปรียบเทียบจากการทดลองและผสมสอง แอนตี้ควบคุมที่ใช้เป็นตัวควบคุมระหว่างการทดลอง35 ผลลัพธ์แสดงว่า H5L7BW ผูกทั้ง polymorphisms FcyRIIIa (วาลีน V158 และphenylalanine F158) กับแอฟฟินิตี้การปรับปรุงของประมาณ 10 เท่าโดย H5L7 (ดู ตาราง 6) แอนติบอดีฟิวโคซิเลตเตด H5L7 กับ FcyRIIIa กับแอฟฟินิตี้คล้ายเป็นแอนติบอดี chimeric IMP731ไม่เปลี่ยนแปลงที่สำคัญได้พบระหว่างการรวมของที่ฮิวเมไนซ์ฟิวโคซิเลตเตดและอะฟิวโคซิเลตเตดแอนติ-ความล่าช้า-3 แอนตี้ รีเซปเตอร์s FcyRI หรือ FcyRIIaตาราง 5 6: ผูกการฮิวเมน Fc แกมมา รีเซปเตอร์s H5L7 และ H5L7BW

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แต่ความแตกต่างในระดับการแสดงออกเหล่านี้ไม่มีผลกระทบต่อสูง 35 อย่างมีนัยสำคัญการลดปริมาณการรับรู้ความสามารถของแอนติบอดีทดสอบ.
ฮิวเมน PBMC / เมาส์ SCID ในรูปแบบที่ร่างกายได้รับการใช้ประสบความสำเร็จที่จะแสดงการลดปริมาณของการเปิดใช้งานฮิวเมน, LAG- 3 แสดงเซลล์ในเยื่อบุช่องท้อง T ของหนู SCID ภูมิคุ้มกัน ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับผู้บริจาคเส้นทางของการบริหารและการจุดเวลาของการวิเคราะห์ระหว่าง 84.22-99.71% ของ
LAG-3 บวกฮิวเมนเซลล์ CD4 T และระหว่าง 84.64-99.62% ของ LAG-3 บวกฮิวเมน CD8 T เซลล์ถูกหมด ดังแสดงในรูปที่ 2 ร่วมบริหารงานของ 5mg / กก H5L7BW เพื่อเปิดใช้งานฮิวเมน PBMCs ในเยื่อบุช่องท้องของหนู SCID นำไปสู่การอย่างมีนัยสำคัญลดปริมาณของ LAG-3 CD4 บวกและ CD8 บวก T เซลล์ 24 ชั่วโมงหลังฉีดเมื่อเทียบกับ IgG ฉีดควบคุมสัตว์.
5 รูปที่ 3 ไฮไลท์การเปรียบเทียบระหว่าง 5mg / กก H5L7BW และ H5L7 5 ชั่วโมงหลังจากที่ร่วม IP
ของการบริหารงานที่จะเปิดใช้งานฮิวเมนPBMCs ตามที่อธิบายไว้ก่อน ทั้งแอนติบอดีเหนี่ยวนำสูงอย่างมีนัยสำคัญการลดปริมาณของ LAG-3 CD4 บวกและ CD8 T เซลล์ (รูปที่ 3A). ดังแสดงในรูปที่ 4 การบริหารงานของ 5mg / กก H5L7BW ผ่านเส้นทางภายในหลอดเลือดดำส่งผลให้ในการอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติลดปริมาณกับ LAG 3 บวก T เซลล์หลังจาก 5 ชั่วโมง (รูปที่ 4A) 10 คล้ายกับสิ่งที่เป็นข้อสังเกตในการทดลองกับทรัพย์สินทางปัญญาร่วมบริหารงาน LAG-3 การลดปริมาณแอนติบอดี เปรียบเทียบระหว่าง iv ยา H5L7BW, H5L7 และ IMP731 (ที่ 5mg / kg) 5 ชั่วโมงหลังจากที่ IP ของการบริหารงานของการเปิดใช้งานฮิวเมนPBMCs เปิดเผยที่คล้ายกันมากการลดปริมาณประสิทธิผลระหว่าง 3 โมเลกุลเมื่อเทียบกับการควบคุมสัตว์ที่ได้รับการรักษา (รูปที่ 5) แต่ละแห่งที่ 3 การทดสอบ LAG-3 ทำลายภูมิคุ้มกันที่เกิดจากการลดลงอย่างมีนัยสำคัญอย่างมากในจำนวนLAG-3 CD4 บวกและ CD8 T เซลล์ 15 (รูปที่ 5A) กับ H5L7BW แสดงให้เห็นมากขึ้นการลดปริมาณกำลังการผลิตเมื่อเทียบกับ H5L7 หรือ IMP731. ตัวอย่างที่ 8: การผูก การวิเคราะห์แอนติ -LAG-3 ฮิวเมไนซ์แอนติบอดีเพื่อ recombinant ที่ละลายน้ำได้ฮิวเมน Fc แกมมารีเซปเตอร์ s ใช้ ProteOnTM ฮิวเมน FcyRIIIa ผูกพันถูกตรวจสอบเพื่อประเมินความสามารถของ H5L7 และ H5L7BW 20 ทำให้เกิดเป็นพิษขึ้นอยู่กับแอนติบอดี cell-mediated (ADCC) H5L7 และ H5L7BW แอนติ -LAG-3 แอนติบอดีถูกประเมินผูกพันกับ recombinant ที่ละลายน้ำได้ฮิวเมน FcyRIIIa นอกเหนือไปจาก FcyRI และ FcyRII รีเซปเตอร์ s ใช้ ProteOnTM XPR36 (BioRadTM) เครื่องไบโอเซนเซอร์และถูกนำมาเปรียบเทียบกับIMP731 แอนติบอดีลูกผสม . แพะแอนติฮิสทิดี -poly-IgG ถูกตรึงบนชิป GLM ไบโอเซนเซอร์โดย amine หลัก 25 มีเพศสัมพันธ์ พื้นผิวนี้ถูกนำมาใช้เป็นพื้นผิวการจับภาพสำหรับโพลีฮิสติดีนติดแท็กฮิวเมน Fc แกมมารีเซปเตอร์ของ แอนติบอดีที่จะทดสอบใช้เป็นวิเคราะห์และผ่านไปที่ 2048nM, 512nM, 128nM, 32nm และ 8nM กับการฉีด OnM (เช่น buffer คนเดียว) ที่ใช้ในการอ้างอิงสองเส้นโค้งที่มีผลผูกพัน แพะแอนติผิว IgG -poly-ฮิสติดีนถูกสร้างใหม่ที่มีฟอสฟ 100 มมกรดปฏิสัมพันธ์ระหว่าง วิ่งได้ดำเนินการใน ProteOn XPR36 ปฏิสัมพันธ์อาร์เรย์โปรตีน 30 ระบบที่ 25 ° C และการใช้ HBS-EP วิ่งบัฟเฟอร์ วิเคราะห์ข้อมูลสำหรับแต่ละรีเซปเตอร์แยกการตั้งค่าระดับโลก R-สูงสุดและการใช้สมดุลแบบธรรมชาติกับ ProteOn ของซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ โมเลกุลควบคุมวิ่งที่จุดเริ่มต้นและจุดสิ้นสุดของชุดของตัวอย่างที่จะได้รับการทดสอบเพื่อให้แน่ใจว่าการเปรียบเทียบผล ข้อมูลที่ถูกเมื่อเทียบจากสองการทดลองและไฮบริดแอนติบอดีควบคุมที่ใช้เป็นตัวควบคุมระหว่างการทดลอง. 35 ผลการศึกษาพบว่า H5L7BW ผูกพันทั้งความหลากหลายของ FcyRIIIa (valine V158 และphenylalanine F158) ที่มีการปรับปรุงแอฟฟินิตี้ประมาณ 10 เท่าเมื่อเทียบกับ H5L7 (ดูตารางที่6) ฟิวโคซิเลตเตดแอนติบอดี H5L7 ผูกไว้กับ FcyRIIIa กับที่คล้ายกันแอฟฟินิตี้เป็น IMP731 แอนติบอดีลูกผสม. ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญระหว่างผูกพันของฮิวเมไนซ์ฟิวโคซิเลตเตดและอะฟิ วโคซิเลตเตดแอนติ -LAG-3 แอนติบอดีสำหรับ FcyRI หรือ FcyRIIa รีเซปเตอร์เอส. 5 ตารางที่ 6: การผูกของ H5L7 และ H5L7BW การฮิวเมน Fc แกมมารีเซปเตอร์ของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แต่ความแตกต่างเหล่านี้ในระดับการแสดงออกไม่มีผลต่อความสูง 35 การลดปริมาณประสิทธิภาพของการทดสอบแอนติบอดี .
2 / ฮิวเมนเมาส์สคิดแบบ vivo เสร็จเรียบร้อยแล้ว ใช้แสดงการลดปริมาณแล้วฮิวเมน lag-3 , แสดงเซลล์ T ในช่องท้องของหนูที่มีภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องสคิด . ขึ้นอยู่กับผู้บริจาคเส้นทางของการบริหาร และจุดเวลาของการวิเคราะห์ระหว่าง 84.22-99.71 %
lag-3 บวกฮิวเมน CD4 T เซลล์และระหว่าง 84.64-99.62 % ของ lag-3 บวกฮิวเมน CD8 T เซลล์ได้หมด ดังแสดงในรูปที่ 2ร่วมบริหาร 5 mg / kg h5l7bw เพื่อเปิดใช้งานฮิวเมนนำไปตรวจในช่องท้องของหนูสคิดนำไปสู่การลดปริมาณสูงระดับ CD4 CD8 lag-3 บวกและบวกเซลล์ T 24 ชั่วโมง หลังฉีดเมื่อเทียบกับการควบคุมปกติฉีดสัตว์ .
5 รูปที่ 3 เน้นการเปรียบเทียบระหว่าง 5 mg / kg และ h5l7bw h5l7 5 ชั่วโมงหลังจาก co-i.p.
การบริหารงานฮิวเมน PBMCs ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ทั้งแอนติบอดีและระดับของ lag-3 บวกสูง
การลดปริมาณ CD4 CD8 T และเซลล์ ( รูปที่ 3 ) .
ดังแสดงในรูปที่ 4 การบริหาร 5 mg / kg h5l7bw ผ่านเส้นทางภายในหลอดเลือดดำมีผล
ในสูงอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติการลดปริมาณของ lag-3 บวกเซลล์ T หลังจาก 5 ชั่วโมง ( รูปที่ 4 )ที่คล้ายกัน 10 สิ่งที่พบในการทดลองกับนักเรียน lag-3 จำกัด Co การลดปริมาณแอนติบอดี
เปรียบเทียบระหว่างเกลือและ h5l7bw h5l7 imp731 ( ทั้งหมด , และ 5 mg / kg ) 5 ชั่วโมงหลังจากผลการบริหารงานฮิวเมน
PBMCs พบคล้ายกันมากการลดปริมาณผลระหว่าง 3
โมเลกุลเมื่อเทียบกับการควบคุมรักษาสัตว์ ( รูปที่ 5 )แต่ละที่ 3 ทดสอบ lag-3 depleting
แอนติบอดีที่เกิดขึ้นสูงอย่างมีนัยสำคัญลดจำนวน CD4 CD8 T เซลล์และ lag-3 บวก 15 ตัวเลข ( 5A ) h5l7bw แสดงการลดปริมาณความจุมากขึ้นเมื่อเทียบกับ h5l7 หรือ imp731

ตัวอย่าง 8 :ผูกพันการวิเคราะห์แอนติ - แอนติบอดีฮิวเมไนซ์ lag-3 เพื่อใช้ละลายฮิวเมน FC แกมมารีเซปเตอร์ s โดยใช้ proteontm
ฮิวเมน fcyriiia ผูกถูกตรวจสอบเพื่อประเมินความสามารถของ h5l7 20 h5l7bw เพื่อก่อให้เกิดแอนติบอดีขึ้นอยู่กับการตรึงเซลล์เซลล์ ( adcc ) และ h5l7 h5l7bw แอนติ - lag-3
แอนติบอดีมีการประเมินยึดคอมที่ฮิวเมน fcyriiia นอกจาก fcyri
fcyrii รีเซปเตอร์ s และใช้ proteontm xpr36 ( bioradtm ) ไบโอเซนเซอร์เครื่อง และเปรียบเทียบกับแอนติบอดีที่ imp731
.
แพะแอนติ - โพลีฮิสติดีน IgG ถูกตรึงบน glm ไบโอเซนเซอร์ชิพโดย primary amine 25 คู่ .พื้นผิวนี้ถูกใช้เป็นจับพื้นผิวโพลีฮิสติดีนแท็กฮิวเมน FC แกมมา
รีเซปเตอร์ . แอนติบอดีการทดสอบจะถูกใช้เป็นครูและข้ามที่ 2048nm 512nm
128nm ขึ้น , , , และ 8nm ด้วยการฉีดของ onm ( เช่นบัฟเฟอร์คนเดียว ) ใช้คู่อ้างอิง
โค้งผูก