Serine protease activity was assaye

Serine protease activity was assayed primarily according to
the protocol described by Murphy and Walton (1996). Briefly,
azocasein (SigmaeAldrich, St. Louis, MO, USA) was used as a
substrate to measure enzyme activity. Approximately 20 ml of
20-fold diluted enzyme solution was incubated with 0.5 ml of
azocasein (concentration: 25 mg/ml) in 25mMsodium acetate
at 37 C and pH 5.0 for 4 h. The enzyme reaction was stopped
by adding 20 ml of 50% trichloroacetic acid to the mixture and
vortexing vigorously for 5 s. The mixture was then centrifuged
at 14,000 g for 5 min in a microcentrifuge, and the OD410 of
500 ml supernatant was measured in a Beckman DU-600
spectrophotometer (Beckman Instruments, Fullerton, CA,
USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรมโปรติเอสรอบเส้นใยประสาทถูก assayed ตามเป็นหลักโพรโทคอลโดยเมอร์ฟี่และ Walton (1996) สั้น ๆazocasein (SigmaeAldrich เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้เป็นพื้นผิวการวัดกิจกรรมของเอนไซม์ ประมาณ 20 มิลลิลิตรโซลูชั่นเอนไซม์เจือจางยี่สิบเท่า incubated มี 0.5 mlazocasein (ความเข้มข้น: 25 mg/ml) ในอะซิเต 25mMsodiumที่ 37 C และ pH 5.0 สำหรับ 4 h หยุดปฏิกิริยาเอนไซม์โดยการเพิ่มส่วนผสม 20 ml กรด trichloroacetic 50% และvortexing แรง ๆ สำหรับ 5 s ส่วนผสมเป็นผลิตภัณฑ์แล้วที่ 14,000 กรัมสำหรับ 5 นาทีในการไมโคร และ OD410 ของ500 มล. supernatant โดยวัดใน Beckman DU-600สเปค (Beckman เครื่อง ฟูลเลอร์ตัน CAสหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรมซีรีนโปรติเอสได้รับการวิเคราะห์หลักตาม
โปรโตคอลอธิบายโดยเมอร์ฟี่และวอลตัน (1996) สั้น ๆ ,
azocasein (SigmaeAldrich, St. Louis, MO, USA) ถูกใช้เป็น
สารตั้งต้นในการวัดการทำงานของเอนไซม์ ประมาณ 20 มิลลิลิตร
20 เท่าวิธีการแก้ปัญหาของเอนไซม์เจือจางถูกบ่ม 0.5 มิลลิลิตร
azocasein (ความเข้มข้น 25 mg / ml) ใน 25mMsodium อะซิเตท
ที่ 37 ซีและพีเอช 5.0 4 H? ปฏิกิริยาเอนไซม์ก็หยุด
โดยการเพิ่ม 20 มล. ของกรดไตรคลอโร 50% ถึงส่วนผสมและ
vortexing อย่างจริงจังเป็นเวลา 5 วินาที ส่วนผสมที่ถูกปั่นแล้ว
14,000? กรัมเป็นเวลา 5 นาทีในไมโครและทั้ง OD410 ของ
500 มลใสวัดใน Beckman DU-600
spectrophotometer (Beckman เครื่องดนตรี, Fullerton, CA,
USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอสเป็นเอนไซม์หลักตามขั้นตอนที่อธิบายโดยเมอร์ฟี่และวอลตัน ( 1996 ) สั้น ๆazocasein ( sigmaealdrich เซนต์หลุยส์ โม , USA ) ถูกใช้เป็นพื้นผิวที่จะวัดกิจกรรมของเอนไซม์ ประมาณ 20 มิลลิลิตร20 เท่า ซึ่งสารละลายเอนไซม์ถูกบ่มกับ 0.5 มิลลิลิตรazocasein ( ความเข้มข้น 25 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ใน 25mmsodium อะซิเตทที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ pH 5.0 เป็นเวลา 4 ชั่วโมง เอนไซม์ปฏิกิริยาถูกหยุดโดยการเพิ่ม 20 ml 50 % กรดไตรคลอโรอะซิติกและการผสมvortexing อย่างจริงจัง 5 . ผสมส่วนผสมแล้วไฟฟ้าที่ 14 , 000 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีในไมโครเซนตริฟิวจ์ และ od410 ของ500 ml สูงวัดใน du-600 เบคแมนเครื่อง Spectrophotometer ( เบคแมน ฟูลเลอร์ตัน แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา )