While no LAB (less than 102 cfu/g)

While no LAB (less than 102 cfu/g) were detected at Day 0 (Fig. 1b), mesophilic aerobic bacteria were detected in low numbers on PC agar. These were most likely contaminating Gram-positive and Gram-negative soil bacteria. The high cfu/g detected on PC agar after Day 0 were most likely LAB able to grow in the presence of oxygen. The identification of species isolated from PC agar (as shown in Fig. 1b) supports this view.

Based on colony morphology, about 260 isolates were picked from different agar plates at different stages of fermentation. Of these, we selected 27 isolates and identified them by 16S rDNA sequencing. Two isolates picked from PC agar plates at Day 0 were identified as Pseudomonas lurida and Rhodococcus fascians, respectively. Of 18 isolates picked from PC, MRS and MRS-P plates, 13 were identified as Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides and the remaining five as Enterococcus faecium. At Week 2, of seven isolates from PC and MRS plates, four were identified as E. faecium, two as Ln. mesenteroides subsp. mesenteroides, and one as Pediococcus pentosaceus. Although only a very limited number of isolates was identified, it appears that a rather normal spontaneous fermentation was achieved, with heterofermentative LAB (Ln. mesenteroides subsp. mesenteroides) dominating the early and homofermentative LAB (E. faecium) dominating the later phase of fermentation ( Lu, Breidt, Plengvidhya, & Fleming, 2003). No yeasts, moulds and enterobacteria were detected in the end products indicating good hygienic quality of the experiment carried out.

3.3. Extraction procedure and analytical methods

The extraction procedure for glucosinolates was adopted from that of Francisco et al. and modified by increasing the number of repetitions from one time to three times and decreasing the stirring time from 30 to 15 min (3 × 5 min). With three repetitions the complete extraction of all glucosinolates was possible and there was no glucosinolate found in the fourth extraction. In addition, the small modification at the end of the extraction step, by diluting the dry mass with eluent A (0.05% aqueous TFA) instead of pure water makes the peak separation and peak shapes better. For the extraction of volatiles such as I3A, the fresh sample was placed into boiling water to stop myrosinase activity (further), then the samples were homogenised. Homogenisation of the sample increased the efficiency of extraction compared to direct extraction. The selection of extraction solvent also plays an important role, as dichloromethane extracts more analytes than diethyl ether and ethyl acetate (results are not shown). The number of extraction times with dichloromethane was controlled with GC–MS. It was found that after four repetitions there was no glucosinolate degradation product left in the mother liquid.

The HPLC and GC methods were specifically developed to profile all the polar, non-polar, volatile and non-volatile degradation compounds. The long HPLC method of 60 min with acidified eluent A (0.05% TFA) leads to specific separation of glucosinolates with better peak shapes at low wavelength (227 nm). All the analytes which are identified and quantified with HPLC, in addition to the I3A, which was measured by GC, were reported in this manuscript. However, due to the huge amount of data the complete analysis of the other volatile degradation products such as iberin, allylisothiocyanate, sulforaphane and their corresponding nitriles will be communicated soon in another manuscript.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขณะที่แล็บไม่ (น้อยกว่า 102 cfu/g) พบในวันที่ 0 (Fig. 1b), แบคทีเรียแอโรบิก mesophilic พบตัวเลขต่ำสุดบน PC agar นอกจากนี้เหล่านี้อาจได้ขยะแบคทีเรียดินแบคทีเรียแกรมบวก และแบคทีเรียแกรมลบ ห้องปฏิบัติการมักจะเติบโตในต่อหน้าของออกซิเจนสูง cfu/g พบบน PC agar วัน 0 ได้ รหัสของชนิดที่แยกต่างหากจาก PC agar (ดังที่แสดงใน Fig. 1b) สนับสนุนมุมมองนี้ตามสัณฐานวิทยาของโคโลนี แยกประมาณ 260 ได้รับเลือกจากแผ่นอื่น agar ในระยะต่าง ๆ ของการหมัก เหล่านี้ เราเลือก 27 แยก และระบุให้จัดลำดับ 16S rDNA แยกสองเบิกจากแผ่น PC agar วัน 0 ระบุเป็นลี lurida และ Rhodococcus fascians ตามลำดับ ของ 18 แยกเบิกจากแผ่น PC นาง และนาง P, 13 ได้ระบุเป็นการ mesenteroides Leuconostoc mesenteroides ถั่วและเหลือเป็น Enterococcus faecium ห้า 2 สัปดาห์ ของเจ็ดแยกจาก PC และนางแผ่น 4 ได้ระบุ E. faecium สองเป็นการ mesenteroides ถั่วการ mesenteroides Ln. และหนึ่งเป็น Pediococcus pentosaceus แต่ระบุเฉพาะมากจำนวนจำกัดแยก ปรากฏว่า การหมักอยู่ค่อนข้างปกติสำเร็จ มี heterofermentative แล็บ (Ln. mesenteroides ถั่ว mesenteroides) อำนาจเหนือช่วง homofermentative แล็บ (E. faecium) อำนาจเหนือระยะหลังของหมักดอง (Lu, Breidt, Plengvidhya และเฟลมิ ง 2003) พบ yeasts ไม่ แม่พิมพ์ และ enterobacteria ในผลิตภัณฑ์สิ้นสุดที่บ่งชี้คุณภาพสุขอนามัยดีทดลองดำเนินการ3.3 การสกัดขั้นตอนและวิธีวิเคราะห์ขั้นตอนการสกัด glucosinolates นำจากของ Francisco et al. และปรับเปลี่ยน โดยการเพิ่มจำนวนการทำซ้ำจากครั้งเดียวไปสามครั้ง และลดเวลา stirring จาก 30 เป็น 15 นาที (3 × 5 นาที) ด้วยการทำซ้ำสาม สกัดทั้งหมด glucosinolates ที่สมบูรณ์ได้ และมี glucosinolate ไม่พบในแยกสี่ นอกจากนี้ การเปลี่ยนแปลงขนาดเล็กที่สุดสกัดขั้น diluting มวลแห้งกับ eluent A (0.05% อควี TFA) แทนน้ำบริสุทธิ์ทำให้แยกสูงสุดและสูงสุดรูปร่างดี การสกัดของ volatiles เช่น I3A ตัวอย่างสดที่วางเป็นเดือดน้ำจะหยุดกิจกรรม myrosinase (เพิ่มเติม), แล้วตัวอย่างที่ homogenised Homogenisation ของตัวอย่างเพิ่มประสิทธิภาพสกัดไปสกัดโดยตรง การเลือกตัวทำละลายสกัดยังมีบทบาทสำคัญ เป็น dichloromethane สารสกัดจาก analytes เพิ่มเติม diethyl อีเทอร์และเอทิล acetate (ผลลัพธ์จะไม่แสดง) จำนวนครั้งที่สกัดด้วย dichloromethane ถูกควบคุม ด้วย GC-MS พบว่า หลังจากทำซ้ำสี่มี ผลิตภัณฑ์ย่อยสลาย glucosinolate ไม่เหลือในแม่ของเหลววิธี HPLC และ GC ได้รับการพัฒนาโดยเฉพาะกับโพรไฟล์สารย่อยสลายขั้ว ไม่ใช่ขั้วโลก ระเหย และไม่ระเหยทั้งหมด วิธี HPLC นาน 60 นาทีมี acidified eluent A (0.05% TFA) นำไปสู่การแบ่งแยกเฉพาะ glucosinolates กับพีครูปร่างที่ดีกว่าที่ความยาวคลื่นต่ำ (227 nm) Analytes ทั้งหมดซึ่งมีระบุ และ quantified ด้วย HPLC นอกจาก I3A ซึ่งถูกวัด โดย GC มีรายงานในฉบับนี้ อย่างไรก็ตาม เนื่องจากจำนวนมากของข้อมูลการวิเคราะห์ที่สมบูรณ์ของการสลายตัวระเหยผลิตภัณฑ์อื่น ๆ เช่น iberin, allylisothiocyanate, sulforaphane และ nitriles ของพวกเขาที่สอดคล้องกันจะสัมผัสเร็ว ๆ นี้ในฉบับอื่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในขณะที่ไม่มี LAB (น้อยกว่า 102 cfu / g) ได้รับการตรวจพบในวันที่ 0 (รูป. 1b) แบคทีเรียแอโรบิก mesophilic ถูกตรวจพบในตัวเลขที่ต่ำในอาหารเลี้ยงเชื้อเครื่องคอมพิวเตอร์ เหล่านี้เป็นส่วนใหญ่มีแนวโน้มการปนเปื้อนแบคทีเรียแกรมบวกและแบคทีเรียในดินแกรมลบ สูง cfu / g ตรวจพบในอาหารเลี้ยงเชื้อเครื่องคอมพิวเตอร์หลังจากวันที่ 0 มีแนวโน้มมากที่สุด LAB สามารถที่จะเติบโตในที่ที่มีออกซิเจน บัตรประจำตัวของสายพันธุ์ที่แยกได้จากวุ้นพีซี (ดังแสดงในรูปที่. 1 ข) สนับสนุนมุมมองนี้. ขึ้นอยู่กับลักษณะทางสัณฐานวิทยาอาณานิคมประมาณ 260 สายพันธุ์ที่ถูกหยิบมาจากจานอาหารเลี้ยงเชื้อที่แตกต่างกันในแต่ละขั้นตอนของการหมัก ของเหล่านี้เราเลือก 27 สายพันธุ์และมีการระบุพวกเขาโดยลำดับ 16S rDNA สองสายพันธุ์หยิบมาจากแผ่นวุ้นพีซีในวันที่ 0 ถูกระบุว่าเป็น Pseudomonas lurida และ Rhodococcus fascians ตามลำดับ 18 ไอโซเลทหยิบมาจากเครื่องคอมพิวเตอร์และแผ่น MRS MRS-P 13 ถูกระบุว่าเป็น Leuconostoc mesenteroides subsp mesenteroides และที่เหลืออีกห้า Enterococcus faecium เป็น ในสัปดาห์ที่ 2 ของเจ็ดสายพันธุ์จากแผ่น PC และ MRS สี่ถูกระบุว่าเป็นอี faecium สองเป็น Ln mesenteroides subsp mesenteroides และหนึ่งเป็น Pediococcus pentosaceus แม้ว่าจะมีเพียงจำนวน จำกัด มากของสายพันธุ์ที่ถูกระบุก็ปรากฏว่าหมักธรรมชาติค่อนข้างปกติก็ประสบความสำเร็จด้วย heterofermentative LAB (LN. mesenteroides subsp. mesenteroides) มีอำนาจเหนือในช่วงต้นและ homofermentative LAB (E. faecium) มีอำนาจเหนือขั้นตอนต่อมาของการหมัก (Lu, Breidt, Plengvidhya และเฟลมมิ่ง, 2003) ยีสต์ไม่มี, แม่พิมพ์และ enterobacteria ถูกตรวจพบในผลิตภัณฑ์สุดท้ายแสดงให้เห็นคุณภาพถูกสุขอนามัยที่ดีของการทดลองดำเนิน. 3.3 ขั้นตอนการสกัดและวิธีการวิเคราะห์ขั้นตอนการสกัด glucosinolates ถูกนำมาจากที่ฟรานซิสและอัล และแก้ไขโดยการเพิ่มจำนวนของการเกิดซ้ำจากครั้งหนึ่งถึงสามครั้งและลดเวลากวน 30-15 นาที (3 × 5 นาที) กับสามซ้ำการสกัดที่สมบูรณ์ของ glucosinolates ทั้งหมดเป็นไปได้และมี glucosinolate ไม่พบในการสกัดที่สี่ นอกจากนี้การปรับเปลี่ยนเล็ก ๆ ในตอนท้ายของขั้นตอนการสกัดโดยเจือจางมวลแห้งด้วยตัวชะ A (0.05% น้ำ TFA) แทนน้ำบริสุทธิ์ทำให้แยกจุดสูงสุดและรูปร่างที่ดีขึ้นสูงสุด การสกัดสารระเหยเช่น I3A ที่ตัวอย่างสดถูกนำมาวางลงในน้ำเดือดที่จะหยุดกิจกรรม myrosinase (เพิ่มเติม) จากนั้นกลุ่มตัวอย่างถูก homogenised Homogenisation ของกลุ่มตัวอย่างมีประสิทธิภาพเพิ่มขึ้นของการสกัดเมื่อเทียบกับการสกัดโดยตรง การเลือกของตัวทำละลายสกัดยังมีบทบาทสำคัญเช่นสารสกัดไดคลอโรมีเทนวิเคราะห์มากกว่าอีเทอร์และเอทิลอะซิเตท (ผลจะไม่แสดง) จำนวนครั้งที่สกัดด้วยไดคลอโรมีเทนถูกควบคุมด้วย GC-MS มันก็พบว่าหลังจากสี่ซ้ำไม่มีผลิตภัณฑ์ย่อยสลาย glucosinolate ที่เหลืออยู่ในของเหลวแม่. HPLC และวิธี GC ได้รับการพัฒนาโดยเฉพาะเพื่อให้รายละเอียดทั้งหมดที่ขั้วโลกไม่มีขั้วสารระเหยและการย่อยสลายแบบไม่ลบเลือน วิธี HPLC ยาว 60 นาทีกรดชะ A (0.05% TFA) นำไปสู่การแยกเฉพาะของ glucosinolates ที่มีรูปร่างที่ดีขึ้นสูงสุดที่ความยาวคลื่นต่ำ (227 นาโนเมตร) วิเคราะห์ทั้งหมดที่มีการระบุและวัดด้วย HPLC, นอกเหนือไปจาก I3A ซึ่งวัดจากประชาคมโลกได้รับรายงานในต้นฉบับนี้ แต่เนื่องจากจำนวนมากของข้อมูลการวิเคราะห์ที่สมบูรณ์ของผลิตภัณฑ์ที่ย่อยสลายสารระเหยอื่น ๆ เช่น iberin, allylisothiocyanate, sulforaphane และไนตริลที่สอดคล้องกันของพวกเขาจะมีการสื่อสารในเร็ว ๆ นี้อีกด้วยลายมือ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในขณะที่ไม่มีแล็บ ( cfu / g ตรวจพบน้อยกว่า 102 ) ในวันที่ 0 ( รูปที่ 1A ) พบว่าแบคทีเรียแอโรบิกมีตัวเลขต่ำบนพีซี วุ้น เหล่านี้ส่วนใหญ่ปนเปื้อนดินแบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบ สูง cfu / g ตรวจพบบนพีซีวุ้นหลังจากวันที่ 0 คือส่วนใหญ่ Lab สามารถเจริญเติบโตในที่ที่มีออกซิเจน การจำแนกสายพันธุ์ที่แยกได้จาก PC ( ดังแสดงในรูปที่1B ) สนับสนุนมุมมองนี้

ตามลักษณะของโคโลนีประมาณ 260 สายพันธุ์ถูกเลือกจากอาหารจานที่แตกต่างกันในแต่ละขั้นตอนของการหมัก นี่ เราเลือก 27 ไอโซเลทและระบุพวกเขาโดย 16S rDNA ของ สองสายพันธุ์ที่รับมาจาก PC วุ้นแผ่นวันที่ 0 และถูกระบุว่าเป็น Pseudomonas lurida rhodococcus fascians ตามลำดับ 18 แยกเก็บจากพีซีนาง และ mrs-p แผ่น 13 ที่ถูกระบุว่าเป็นลิวโคน ตอคฆ่าเชื้อแล้วผสม subsp . ฆ่าเชื้อแล้วผสมและที่เหลืออีกห้าเป็นเอ็นเทโรค็อกคัสจาก . ในสัปดาห์ที่ 2 ของ 7 ไอโซเลทจากเครื่องคอมพิวเตอร์และนางแผ่นสี่ที่ถูกระบุว่าเป็นเช่นจาก สองอย่างใน . ฆ่าเชื้อแล้วผสม subsp . ฆ่าเชื้อแล้วผสม และเป็นหนึ่งใน 3 . แม้เพียงจำนวนไม่มากของสายพันธุ์ถูกระบุปรากฏว่าค่อนข้างปกติธรรมชาติหมักเร็จ กับ heterofermentative Lab ( LN . ฆ่าเชื้อแล้วผสม subsp . ฆ่าเชื้อแล้วผสม ) ในแล็บแรกและ homofermentative ( เช่นจากในเฟส ) ภายหลังการหมัก ( ลู่ breidt plengvidhya & Fleming , , , 2003 ) ไม่มียีสต์ ,