2. Materials and methods2.1. Plant

2. Materials and methods
2.1. Plant materials

Hybrid seeds were produced by crossing a high yielding, drought and stem canker tolerant cultivar (TRI 3013-female parent), with a moderate yielding and nematodes tolerant cultivar (DT 95-male parent). Anthers were collected from unopened flower buds and vials containing pollens were kept overnight in a desiccator to enhance anther dehiscence. On following day morning, sepals and petals of the unopened mature flower buds were removed, emasculated and pollen was dusted onto the stigma of TRI 3013 flowers using a camel hair brush. The pollinated buds were tagged with a reference number and covered with a cloth bag. After 3 days, cloth bags were removed and net bags were attached to ensure collection of mature seeds from fruits. Seeds fallen into net bags were collected at the time of fruit dehiscence (9 months after pollination).

The collected seeds were disinfected with 20% NaOCl (Sigma, USA) and embryos were regenerated on MS solid medium supplemented with 3 mg L−1 BAP, 0.5 mg L−1 IBA, 8 g L−1 Agar and 30 g L−1 sucrose (Multiplication Medium, Gunasekare and Evans, 2000). The pH of the medium was adjusted to 5.8 before autoclaving. The cultures were incubated at 25 °C and 15 h light duration. Regenerated micro-shoots were multiplied 4 times by sub culturing onto multiplication medium at 8 week intervals until the required amount of micro-shoots were produced.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุพืชเมล็ดพันธุ์ไฮบริดที่ผลิตโดยข้ามที่ให้ผลผลิตสูงภัยแล้งและลำต้นเปื่อยพันธุ์ใจกว้าง (TRI ผู้ปกครอง 3013 หญิง) กับผลผลิตในระดับปานกลางและไส้เดือนฝอยพันธุ์ใจกว้าง (DT ผู้ปกครอง 95 ชาย) อับเรณูที่ถูกเก็บรวบรวมจากตาดอกที่ปิดสนิทและขวดที่มีละอองเรณูถูกเก็บไว้ค้างคืนในเดซิเพื่อเพิ่ม dehiscence อับละอองเกสร ต่อไปนี้ในตอนเช้าวันกลีบเลี้ยงและกลีบดอกของดอกตูมผู้ใหญ่เปิดถูกถอดออก emasculated และละอองเกสรดอกไม้ได้รับการปัดฝุ่นบนความอัปยศของ TRI 3013 ดอกไม้โดยใช้แปรงขนอูฐ ตาเรณูถูกแท็กที่มีจำนวนการอ้างอิงและปกคลุมด้วยถุงผ้า หลังจาก 3 วัน, ถุงผ้าที่ถูกถอดออกและถุงสุทธิติดเพื่อให้แน่ใจว่าคอลเลกชันของเมล็ดผู้ใหญ่จากผลไม้ เมล็ดหล่นลงไปในถุงสุทธิที่ถูกเก็บรวบรวมในเวลาของ dehiscence ผลไม้ (9 เดือนหลังจากการผสมเกสร). เมล็ดที่เก็บรวบรวมได้รับการฆ่าเชื้อ 20% NaOCl (ซิกม่าสหรัฐอเมริกา) และตัวอ่อนที่ถูกสร้างใหม่ใน MS สื่อที่เป็นของแข็งเสริมด้วย 3 มก. L-1 BAP 0.5 มก. L-1 IBA, 8 กรัม L-1 และวุ้น 30 กรัม L-1 ซูโครส (คูณกลาง Gunasekare และอีแวนส์, 2000) ค่า pH ของกลางที่ได้รับการปรับให้ 5.8 ก่อนที่จะนึ่งฆ่าเชื้อ วัฒนธรรมที่ถูกบ่มที่ 25 ° C และ 15 ชั่วโมงระยะเวลาที่แสง สร้างใหม่หน่อไมโครถูกคูณ 4 ครั้งโดยการย่อยเลี้ยงลงบนกลางคูณในช่วงเวลา 8 สัปดาห์จนกว่าจำนวนเงินที่ต้องของหน่อขนาดเล็กเป็นจำนวนมาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุพืช

ลูกผสมเมล็ดถูกผลิตโดยข้ามที่ให้ผลผลิตสูง ทนแล้ง และลำต้นเปื่อยใจกว้างพันธุ์ ( ไตร 3013 หญิงแม่ ) กับหยุ่นปานกลาง และไส้เดือนฝอย ใจกว้าง พันธุ์ ( DT 95 ชายผู้ปกครอง ) รวบรวมจากอับเรณูที่ปิดสนิทที่มีดอกตูมและหลอดละอองเรณูไว้ค้างคืนในเดซิกเคเตอร์เพื่อเพิ่มพฤติกรรมการตั้งครรภ์ที่ไม่ได้ตั้งใจ .ในวันต่อมาตอนเช้า กลีบเลี้ยงและกลีบดอกของยังเป็นดอกตูมอยู่ออก อ่อนแอและเกสรก็โรยลงบนยอดของไตร 3013 ดอกไม้โดยใช้แปรงขนอูฐ . ส่วนเกสรตาถูกแท็กด้วยหมายเลขอ้างอิงและคลุมด้วยถุงผ้า หลังจาก 3 วัน ถุงผ้าออกและสุทธิถุงแนบเพื่อให้คอลเลกชันของผู้ใหญ่เมล็ดจากผลไม้เมล็ดร่วงลงไปในถุงตาข่ายเก็บในเวลาของการตั้งครรภ์ที่ไม่ได้ตั้งใจ ผลไม้ ( 9 เดือนหลังจากการผสมเกสร ) .

เก็บเมล็ดฆ่าเชื้อด้วย 20% ไม่ระบุ ( Sigma , USA ) และเจริญได้บนอาหารแข็งเป็นอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วย 3 mg L − 1 BAP 0.5 mg L − 1 IBA 8 กรัมต่อลิตร บริษัท เวสเทิร์น 1 วุ้น และ 30 กรัม L − 1 ซูโครส ( คูณกลาง , gunasekare และอีแวนส์ , 2000 ) พีเอชของอาหารปรับ 58 ก่อนอัตราส่วนโฟกัส . วัฒนธรรมที่อุณหภูมิ 25 ° C และ 15 H แสงของ สร้างใหม่ขนาดเล็กยอดคูณ 4 ครั้ง โดยเพาะเลี้ยงบนอาหารที่ย่อยคูณช่วง 8 สัปดาห์ จนต้องใช้ปริมาณไมโครมียอดผลิต