Preparation of RIGS kit. A novel fo

Preparation of RIGS kit. A novel format (Fig. 1) was designed for RIGS kit, so that it enables the detection of TSWV on a single strip.
The colloidal-gold-conjugated solution of antisera raised against TSWV was mixed in equal quantities and applied on 26 × 1.7 cm conjugate pads (Standard 14) and dried under dry air for 10-15 min.
TSWV IgG-BSA conjugate was diluted in 20 mM sodium phosphate buffer, (pH 8.0) containing 1% sucrose to a final concentration of 2 mg/ml and applied as a 0.5 mm thick, 26 cm line, centrally at 1.25 cm from the top and bottom ends on one side of a 2.5 × 26 cm nitrocellulose plastic backed membrane strip, using a locally fabricated airbrush device (Innovative Biosciences, India).
Nitrocellulose membrane was cut into sections (2.5 cm × 26 cm). Test line was coated with TSWV-IgG conjugate, which was applied to each membrane in
150 μg/ml TSWV using TLC conjugate sampler (Sambrook et al.,1989).
The distance between the test line and control line was 6mm. The test strips were dried at 37°C for 30 min.
TSWV IgGBSA conjugate was diluted in 1 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0) containing
containing 1% sucrose to a final concentration of 3 μg/ml and applied as a 1 mm thick, 26 cm line, at 0.5 cm from the top end of the membrane. The membrane was dried at 3°C under a dry wind blower for 10-15 min and blocked with 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7.5) containing 0.25% BSA and 1.0% sucrose. The membrane was dried at 37°C under a dry wind blower for 10-15 min and washed twice with 10 mM,sodium phosphate buffer (pH 7.2) before drying it for 10–15 min at 50°C. A polyethylene plastic sheet (26 × 8 cm) of 0.2 mm thickness was coated with acrylic adhesive on one side and the 2.5 cm wide membrane was placed centrally at a spacing of 1.5 cm from the top and 4 cm from the bottom end of the sheet.
The conjugate coated glass-fiber pad was placed on the lower end of the membrane, so as to overlap 2 mm on it. A filter pad was placed to overlap 2mm on the lower end of the conjugate release pad to act as sample pad and another pad (CF4) was
placed to overlap 2 mm on the upper end of the membrane to act as absorbent pad. The assembly was cold-laminated using an 8 cm wide transparent adhesive tape. The laminated 26× 8 cm assembly was cut into lateral-flow strips of 8 × 0.4 cm.
The strips were stored in an airtight plastic bottle containing a desiccant pack.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมความพร้อมของชุดแท่นขุดเจาะ รูปแบบนวนิยาย (รูปที่ 1). ได้รับการออกแบบสำหรับชุดแท่นขุดเจาะเพื่อที่จะช่วยให้การตรวจสอบของ TSWV บนแถบเดียว.
การแก้ปัญหาคอลลอยด์ทองผันของ antisera ขึ้นกับ TSWV ผสมในปริมาณที่เท่ากันและนำไปใช้ในวันที่ 26 × 1.7 ซม. แผ่นคอนจูเกต (Standard 14) และแห้งภายใต้อากาศแห้งประมาณ 10-15 นาที.
TSWV ผัน IgG-BSA ถูกเจือจางใน 20 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 8.0) ที่มีน้ำตาลซูโครส 1% ความเข้มข้นสุดท้ายของ 2 mg / ml และ นำไปใช้เป็น 0.5 มมหนา 26 สายเซนติเมตรส่วนกลางที่ 1.25 ซม. จากด้านบนและด้านล่างจะสิ้นสุดลงในอีกด้านหนึ่งของ 2.5 × 26 ซม. พลาสติกไนโตรเซลลูโลสได้รับการสนับสนุนแถบเมมเบรนที่ใช้ประดิษฐ์ในประเทศอุปกรณ์พู่กัน (ชีววิทยาศาสตร์นวัตกรรมอินเดีย).
Nitrocellulose เมมเบรนถูกตัดออกเป็นส่วน ๆ (2.5 ซม. × 26 ซม.) สายการทดสอบได้รับการเคลือบด้วยคอนจูเกต TSWV-IgG ซึ่งถูกนำไปใช้กับเมมเบรนในแต่ละ
150 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร TSWV ใช้ตัวอย่างผัน TLC (Sambrook et al., 1989).
ระยะห่างระหว่างสายการทดสอบและสายควบคุมเป็น 6mm แถบทดสอบแห้งที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที.
ผัน TSWV IgGBSA ถูกเจือจางใน 1 มิลลิบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 8.0)
ที่มีน้ำตาลซูโครส1% ความเข้มข้นสุดท้ายของ 3 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและนำไปใช้เป็นหนา 1 มิ 26 ซม. เส้นที่ 0.5 ซม. จากปลายด้านบนของเมมเบรน เมมเบรนแห้งที่ 3 ° C ภายใต้เป่าลมแห้งประมาณ 10-15 นาทีและบล็อกที่มี 10 มิลลิโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.5) ที่มี BSA 0.25% และ 1.0% น้ำตาลซูโครส เมมเบรนแห้งที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสภายใต้เป่าลมแห้งประมาณ 10-15 นาทีและล้างครั้งที่สองมี 10 มิลลิบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (pH 7.2) ก่อนการอบแห้งไว้ประมาณ 10-15 นาทีที่ 50 องศาเซลเซียส พลาสติกชนิดแผ่นพลาสติก (26 × 8 เซนติเมตร) 0.2 มมความหนาเคลือบด้วยกาวอะคริลิในด้านหนึ่งและ 2.5 ซม. เมมเบรนกว้างวางอยู่ใจกลางเมืองที่ระยะห่าง 1.5 ซม. จากด้านบนและ 4 ซม. จากปลายด้านล่างของแผ่น .
ผันแผ่นใยแก้วเคลือบถูกวางลงบนปลายล่างของเมมเบรนเพื่อให้เป็นไปทับซ้อนกัน 2 มมกับมัน แผ่นกรองถูกนำมาวางทับซ้อนกัน 2 มิลลิเมตรที่ปลายล่างของแผ่นปล่อยคอนจูเกตจะทำหน้าที่เป็นตัวอย่างแผ่นและแผ่นอื่น (CF4)
ถูกวางทับซ้อนกัน2 มมปลายบนของเมมเบรนจะทำหน้าที่เป็นแผ่นดูดซับ การชุมนุมเป็นเย็นเคลือบใช้ 8 ซม. กว้างเทปกาวใส ลามิเนต 26 × 8 ซม. การชุมนุมที่ถูกตัดเป็นเส้นด้านข้างไหลของ 8 × 0.4 ซม.
แถบถูกเก็บไว้ในขวดพลาสติกสุญญากาศที่มีแพ็คสารดูดความชื้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมชุด rigs รูปแบบใหม่ ( รูปที่ 1 ) ถูกออกแบบมาสำหรับชุดแท่นขุดเจาะ เพื่อให้มันสามารถตรวจหาของ tswv บนแถบเดียว
ทองคอลลอยด์และแก้ไขแอนติยกกับ tswv ผสมในปริมาณที่เท่ากัน และใช้กับ 26 × 1.7 ซม. ) ( มาตรฐาน 14 แผ่น ) และแห้งในอากาศแห้งประมาณ 10-15 นาที
tswv IgG BSA ) เจือจางใน 20 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 8.0 ) ที่ประกอบด้วย 1% ซูโครสความเข้มข้นสุดท้าย 2 mg / ml และใช้เป็น 0.5 มม. หนา , สายซม. 26 จากส่วนกลางที่ 1.25 ซม. จากด้านบนและด้านล่างปลายข้างหนึ่งของ 2.5 × 26 ซม. ไนโตรพลาสติกข้อมูล เยื่อแผ่นโดยใช้เครื่องประดิษฐ์อุปกรณ์แอร์บรัช ( ชีววิทยาศาสตร์ , อินเดีย นวัตกรรม )
ไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนถูกตัดออกเป็นส่วน ( 2.5 cm × 26 ซม. ) แนวข้อสอบถูกเคลือบด้วย tswv IgG ) ซึ่งจะใช้แต่ละเยื่อใน
150 μ g / ml tswv โดยใช้ TLC ) ตัวอย่าง ( sambrook et al . , 1989 )
ระยะห่างระหว่างบรรทัดการทดสอบและการควบคุมสาย 6mm แถบทดสอบที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 30 นาที iggbsa )
tswv เจือจางใน 1 มม. หรือ HCl บัฟเฟอร์ pH 80
) ซึ่งประกอบด้วยซูโครสความเข้มข้น 1% สุดท้าย 3 μ g / ml และใช้เป็น 1 มม. หนา , สายซม. 26 , 0.5 ซม. จากด้านบนสุดของเมมเบรน เยื่อแผ่นแห้งที่อุณหภูมิ 3 องศา C ภายใต้เป่าลมแห้งประมาณ 10-15 นาที และถูกปิดกั้นด้วย 10 มม. โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.5 ) ที่มี BSA 0.25% และซูโครส 1.0% .เยื่อแผ่นแห้งที่อุณหภูมิ 37 องศา C ภายใต้เป่าลมแห้งประมาณ 10-15 นาทีและล้าง 2 ครั้งกับ 10 mm , โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 ) ก่อนที่จะแห้งประมาณ 10 – 15 นาทีที่ 50 องศา เป็นพลาสติกแผ่นพลาสติก ( 26 × 8 ซม. ) ความหนา 0.2 มม. ถูกเคลือบด้วย Acrylic กาวด้านหนึ่ง และ 2.5 ซม. กว้างอยู่ที่ระยะห่างจากแผ่น 15 ซม. จากด้านบนและ 4 เซนติเมตรจากปลายล่างของแผ่น คือ แผ่นเคลือบไฟเบอร์กลาส
ถูกวางไว้บนปลายล่างของเยื่อแผ่น เพื่อซ้อน 2 มม. ครับ เป็นแผ่นกรองวางซ้อนกัน 2 mm บนปลายล่างของผันปล่อยแผ่นเป็นแผ่นตัวอย่างและแผ่นอื่น ( CF4 ) คือ
วางซ้อนกัน 2 เดือนบนปลายบนของเยื่อ แสดงเป็น แผ่นรองดูดซับชุมนุมเย็นเคลือบใช้ 8 ซม. กว้างใสเทปกาว ลามิเนต 26 × 8 ซม. ประกอบที่ถูกตัดเป็นแถบด้านข้างไหล 8 × 0.4 ซม.
แถบที่ถูกเก็บไว้ในขวดพลาสติกบรรจุภัณฑสารดูดความชื้นแพ็ค