washed twice with 10mM sodium aceta

washed twice with 10mM sodium acetate buffer (pH 5.5) containing
1mM 2-mercaptoethanol. The cell wall-bound invertase
extract was obtained by resuspending the pellet in a small volume
of 10mM sodium acetate buffer (pH 5.5) containing 1mM
2-mercaptoethanol.
Sucrose phosphate synthase (SPS) and sucrose synthase (SS)
activities were extracted as previously described by Batta and
Singh (1986) with minor modifications. Briefly, 1.5 g FW of powdered
tissue was homogenised in a chilled mortar and pestle with
5ml of extraction buffer (100mM Tris–HCl buffer (pH 7.6) containing
10mM MgCl2, 5mM EDTA and 1mM 2-mercaptoethanol).
The homogenate was centrifuged at 12,000×g for 15 min and
the supernatant precipitated with solid ammonium sulphate up
to 100% saturation. After stirring for 10 min the extract was centrifuged
at 12,000×g for 15 min and the supernatant discarded. The
resulting precipitate was resuspended in 10mM Tris–HCl buffer
(pH 8.0) containing 10mM MgCl2 and 1mM 2-mercaptoethanol
and dialyzed during 60 min against two changes of the same
buffer. The dialyzed extract was applied to assay SPS and SS activities.
These activities were only assayed in sucrose and sucrose
6-P direction. All enzyme extraction steps were carried out at
4 ◦C.
Activities of soluble and insoluble acid invertase, soluble alkaline
invertase, SS, and SPS were determined using established
spectrophotometric end point assays as previously described (Rosa
et al., 2004). All assays were run in duplicate and control reactions
were run on all samples by assaying in absence of sucrose, fructose
or fructose 6-P for invertase, SS and SPS, respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ล้างสองครั้ง ด้วยโซเดียม 10 มม. acetate บัฟเฟอร์ (pH 5.5) ประกอบด้วย2-mercaptoethanol 1 มม. Invertase ผูกกับผนังเซลล์สารสกัดได้รับ โดย resuspending เม็ดในปริมาณขนาดเล็ก10mM โซเดียม acetate บัฟเฟอร์ (pH 5.5) ประกอบด้วย 1 มม.2-mercaptoethanolซูโครสฟอสเฟต synthase (SPS) และซูโครส synthase (SS)กิจกรรมที่แยกไว้ก่อนหน้านี้เป็น อธิบาย โดยนุ และสิงห์ (1986) มีปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ 1.5 g FW ของผงเนื้อเยื่อถูก homogenised ในความเย็นโกร่งด้วย5ml สกัดบัฟเฟอร์ (ตรี – HCl 100 มม.บัฟเฟอร์ (pH 7.6) ประกอบด้วย10 มม. MgCl2, EDTA 5 มม. และ 1 มม. 2-mercaptoethanol)Homogenate ถูก centrifuged ที่ 12, 000 ซื้อ g สำหรับ 15 นาที และsupernatant ตกตะกอนกับซัลเฟตแอมโมเนียแข็งค่าเพื่อความเข้ม 100% หลังจากกวนสำหรับ 10 นาที แยกการ centrifugedที่ 12, 000 ซื้อ g 15 นาทีและ supernatant ที่ละทิ้ง ที่precipitate ได้ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ 10 มม.ตรี – HCl(pH 8.0) มี 10 มม. MgCl2 และ 1 มม. 2-mercaptoethanolและ dialyzed ใน 60 นาทีกับสองการเปลี่ยนแปลงเดียวกันบัฟเฟอร์ สารสกัดจาก dialyzed ใช้ assay SPS และ SSกิจกรรมเหล่านี้ได้เฉพาะ assayed ซูโครสและซูโครสทิศ 6-P ขั้นตอนการสกัดเอนไซม์ทั้งหมดได้ดำเนินการที่4 ◦Cกิจกรรมของการละลายน้ำ และไม่ละลายน้ำกรด invertase ละลายน้ำด่างinvertase, SS, SPS ได้ถูกก่อตั้งขึ้นโดยใช้จุดสิ้นสุด spectrophotometric assays (โรที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็นร้อยเอ็ด al., 2004) Assays ทั้งหมดถูกเรียกใช้ซ้ำและการควบคุมปฏิกิริยาถูกเรียกใช้ในตัวอย่างทั้งหมด โดย assaying ในการขาดงานของซูโครส ฟรักโทสหรือฟรักโทส 6-P สำหรับ invertase, SS และ SPS ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ล้างครั้งที่สองที่มีโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ 10 mM (pH 5.5) ที่มี
1 mM 2 mercaptoethanol เซลล์ที่ถูกผูกไว้ที่ผนัง invertase
สารสกัดที่ได้จากการ resuspending
เม็ดในปริมาณของโซเดียมบัฟเฟอร์อะซิเตต10 mM (pH 5.5) ที่มี 1 mM
2 mercaptoethanol.
เทสฟอสเฟตซูโครส (SPS) และเทสซูโครส (เอสเอส)
กิจกรรมสกัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดย Batta
และซิงห์(1986) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ , 1.5 กรัม FW
ของผงเนื้อเยื่อถูกhomogenised ในครกแช่เย็นและสากกับ
5ml ของบัฟเฟอร์สกัด (100 มมบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 7.6) ที่มี
10 mM MgCl2, 5mm EDTA และ 1 mM 2 mercaptoethanol).
homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 15
นาทีและใสตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่มั่นคงขึ้นอิ่มตัว
100% หลังจากที่กวนเป็นเวลา 10
นาทีสารสกัดที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่12,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและใสทิ้ง
ตะกอนที่เกิดถูก resuspended ใน 10 mM Tris-บัฟเฟอร์ HCl
(pH 8.0) ที่มี 10 mM MgCl2 และ 1 mM 2 mercaptoethanol
และ dialyzed ในช่วง 60
นาทีกับสองการเปลี่ยนแปลงของเดียวกันบัฟเฟอร์ สารสกัด dialyzed ถูกนำไปใช้ assay SPS และกิจกรรมเอสเอส.
กิจกรรมเหล่านี้ถูก assayed
เฉพาะในซูโครสและน้ำตาลซูโครสทิศทาง6-P ขั้นตอนการสกัดเอนไซม์ทั้งหมดได้รับการดำเนินการที่
4 ◦C.
กิจกรรมของอินเวอร์กรดที่ละลายน้ำและไม่ละลายน้ำอัลคาไลน์ที่ละลายน้ำได้อินเวอร์, เอสเอสและเอสพีเอได้รับการพิจารณาจัดตั้งโดยใช้การวิเคราะห์จุดสิ้นสุดสเปกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(Rosa et al., 2004) ตรวจทั้งหมดได้รับการทำงานในที่ซ้ำกันและการควบคุมปฏิกิริยาวิ่งตัวอย่างโดย assaying ในกรณีที่ไม่มีน้ำตาลฟรุกโตสหรือฟรุกโตส6-P สำหรับอินเวอร์, เอสเอสและเอสพีเอตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ล้างสองครั้งกับ 10mm โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.5 ) ประกอบด้วย
1 mm อย่างเดียว . ผนังเซลล์ถูกสกัดเย็น
ได้รับเจริญเม็ดใน
ปริมาณขนาดเล็กของ 10mm โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.5 ) ประกอบด้วย 1 mm

ซูโครสซินเทสอย่างเดียว . ฟอสเฟต ( SP ) และซูโครสซินเทส ( SS )
กิจกรรมที่อธิบายโดยกซานเดอร์ บัตตาและ
ก่อนหน้านี้เป็นซิงห์ ( 1986 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ , 1.5 g FW ของเนื้อเยื่อผง
คือ homogenised ในเย็นครกและสากกับ
5ml ของบัฟเฟอร์ ( 100mm โดยการสกัดและ HCl บัฟเฟอร์ pH 7.6 ) ประกอบด้วย
10mm MgCl2 มม. และ EDTA 1mm อย่างเดียว )
อนคือระดับที่ 12 × G 15 นาทีและนำซัลเฟตตกตะกอน
ด้วย แอมโมเนียแข็งขึ้น
100% ความอิ่มตัวหลังจากกวน 10 นาที แยกเป็นระดับ
ที่ 12000 × G 15 นาทีและนำทิ้ง
ผลที่ได้ resuspended ใน 10mm ทริส– HCl บัฟเฟอร์
( pH 8.0 ) ประกอบด้วยชุด 10mm และและ 1mm อย่างเดียว
ผ่านระหว่าง 60 นาทีกับสองการเปลี่ยนแปลงของบัฟเฟอร์เดียวกัน

ผ่านแยกใช้วิธี SP และ SS
กิจกรรมกิจกรรมเหล่านี้เป็นเพียงปริมาณน้ำตาลซูโครสและทิศทาง 6-p ซูโครส

ทุกขั้นตอนการสกัดเอนไซม์ ได้ดำเนินการใน 4 ◦ C .

กิจกรรมละลายไม่ละลายในกรดและด่าง
เย็นเย็น , ละลาย , SS และ SP เป็นใช้ก่อตั้ง
) จุดสุดท้าย ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Rosa
et al . , 2004 ) สามารถถูกใช้ในปฏิกิริยา
ซ้ำ และการควบคุมมีวิ่งทุกตัวอย่าง โดย assaying ในการขาดงานของซูโครส ฟรักโทสหรือฟรุกโทส
6-p สำหรับเปรียบเทียบของแข็ง SP ตามลำดับ