PCR analysisDNA was isolated from G

PCR analysis

DNA was isolated from GUS positive plants using CTAB method [15]. PCR screening of putative transformants was performed using specific primers for Cry 2Ab gene. The plasmid was used as a positive control. The sequences of forward and reverse primers were 5′CATTCAGCTTCCAGCACAAGAGCC3′; and 5′TGGGTGCCAGAGTTCAGGGTCACG3′, respectively. The PCR mixture were performed in a total volume of 25 μl (1.0 μl of 10 mM dNTPs, 5.0 μl 10× buffer, containing MgCl2, 2.0 μl of 50-ng/μl template DNA, 0.4 μl of Taq polymerase, 1.0 μl of 70 pmol from each primer and 14.6 μl sterile distilled water). Amplification is accomplished through a Thermal Cycler (Biometra, Germany), using first one incubation at 94 °C for 5 min and the step cycle program set to denaturant at 94 °C for 30 s, to anneal at 56 °C for 50 s and then extended at 72 °C for 75 s for a total of 30 cycles; after that, an extra step of extension at 72 °C for 10 min was performed

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ PCRดีเอ็นเอที่ถูกแยกจาก GUS บวกพืชโดยใช้วิธี CTAB [15] ตรวจ PCR ของ transformants อ้างว่าฝาถูกดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์เฉพาะสำหรับยีน 2Ab ร้องไห้ Plasmid ถูกใช้เป็นตัวบวก ลำดับของไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนหลังได้ 5′CATTCAGCTTCCAGCACAAGAGCC3′ และ 5′TGGGTGCCAGAGTTCAGGGTCACG3′ ตามลำดับ ดำเนินการส่วนผสม PCR ในปริมาณรวมของ 25 μl (μl 1.0 ของ dNTPs 10 มม. 5.0 μl 10 ×บัฟเฟอร์ ประกอบด้วย MgCl2, μl 2.0 ของ 50-ฉบับ/μl แม่ดีเอ็นเอ μl 0.4 ของพอลิเมอเรส Taq, μl 1.0 ของ pmol 70 จากรองพื้นแต่ละและ 14.6 μl หมันน้ำกลั่น) ขยายได้ผ่าน Cycler ความร้อน (Biometra เยอรมนี), ใช้หนึ่งก่อนบ่มที่ 94 ° C สำหรับ 5 นาที และโปรแกรมวงจรขั้นตอนตั้งค่า denaturant ไปที่ 94 ° C 30 s การหลอมที่ 56 ° C สำหรับ 50 s และจากนั้น ขยาย 72 ° c สำหรับ 75 s จำนวน 30 รอบ ดำเนินการขั้นตอนเพิ่มเติมของส่วนขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 10 นาทีหลังจากนั้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR วิเคราะห์ดีเอ็นเอที่แยกได้จากพืชในเชิงบวกกัสโดยใช้วิธี CTAB [15] การตรวจคัดกรอง PCR ของ transformants สมมุติถูกดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ Cry 2AB ยีน พลาสมิดถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก ลำดับของการเดินหน้าและถอยหลังไพรเมอร์เป็น 5'CATTCAGCTTCCAGCACAAGAGCC3 '; และ 5'TGGGTGCCAGAGTTCAGGGTCACG3 'ตามลำดับ ส่วนผสม PCR ได้ดำเนินการในปริมาณรวมทั้งสิ้น 25 ไมโครลิตร (1.0 ไมโครลิตร 10 มิลลิเมตร dNTPs 5.0 ไมโครลิตร 10 ×บัฟเฟอร์ที่มี MgCl2 2.0 ไมโครลิตร 50 ng / ไมโครลิตรดีเอ็นเอแม่แบบ 0.4 ไมโครลิตรของ Taq โพลิเมอร์ 1.0 ไมโครลิตร 70 pmol จากแต่ละไพรเมอร์และ 14.6 ไมโครลิตรน้ำกลั่นหมัน) ขยายทำได้ผ่าน Cycler ความร้อน (Biometra, เยอรมนี) โดยใช้คนแรกบ่มที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและโปรแกรมรอบขั้นตอนที่กำหนดให้ denaturant ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีเพื่อหลอมที่ 56 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 50 วินาทีและ แล้วยื่นที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 75 วินาทีจำนวน 30 รอบ; หลังจากนั้นเป็นขั้นตอนที่เพิ่มขึ้นของส่วนขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีที่ได้ดำเนินการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ดีเอ็นเอดีเอ็นเอที่แยกได้จากพืชด้วยวิธีกัสบวก ctab [ 15 ] เทคนิคการคัดเลือกพลาสมิดซึ่งมีการใช้ไพรเมอร์ที่จำเพาะสำหรับร้องไห้ 2ab ยีน พลาสมิดที่ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก ไปข้างหน้าและย้อนกลับลำดับโดยได้รับ cattcagcttccagcacaagagcc3 5 ’ และ tgggtgccagagttcagggtcacg3 5 ’’ ตามลำดับ pcr ส่วนผสมได้ในปริมาณรวม 25 μ L ( 1.0 ลิตร dntps μ , 5.0 มม. 10 μ L 10 ×บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วยชุดμ 2.0 ลิตร 50 นาโนกรัม / μผมแม่แบบดีเอ็นเอ μ 0.4 ลิตร ทัค polymerase 1.0 μ L 70 pmol จากไพรเมอร์ขนาด L และμแต่ละ หมันน้ำกลั่น ) ขยายได้ผ่านวงจรความร้อน ( biometra , เยอรมัน ) , ใช้ตัวแรกบ่มที่ 94 ° C เป็นเวลา 5 นาทีและโปรแกรมขั้นตอนวงจรชุดทำให้ผิดธรรมชาติที่ 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที กับ 56 ° C แอนนีลที่ 50 และขยายแล้ว 72 ° C 75 สำหรับทั้งหมดของ 30 รอบ หลังจากนั้น เป็นขั้นตอนของการเสริมที่ 72 ° C 10 นาทีแสดง