CP primer was designed according to

CP primer was designed according to the sequences of NNV coat protein gene in orange-spotted grouper for virus-free testing(Table 1). Other primers were designed to implement the qRT-PCR analysis (Table 1). Expressions levels of six selected genes weredetected. qRT-PCR was conducted on a 7500 Real-time PCR system (Applied Biosystems, USA) using a SYBRR premix ExTaq™Kit (TaKaRa). The reaction carried out without the template was used as blank control. All samples were performed in triplicate wells, and cycling conditions were as follows: 10 s at 95
C, followed by 40 cycles consisting of 5 s at 95
C and 34 s at 60
C. Expression ofbactin was used as the internal control for the all gene expressionanalysis. Dissociation curve analysis was performed after thermocycling to determine whether a specific-sized single amplicon was amplified. The gene expressions were determined via the 2 △△CT method. Significant differences were accepted at P

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไพรเมอร์ซีพีถูกออกแบบมาตามลำดับของ NNV เสื้อยีนในปลาเก๋าส้มด่างไวรัสทดสอบ (ตาราง 1) ไพรเมอร์อื่น ๆ ถูกออกแบบมาเพื่อใช้วิเคราะห์ qRT PCR (ตาราง 1) ระดับนิพจน์ของยีนเลือกหก weredetected qRT PCR ดำเนินการในระบบแบบ Real-time PCR 7500 (ศาสตร์เชิงชีวภาพประยุกต์ สหรัฐอเมริกา) โดยใช้การผสม SYBRR ExTaq™ Kit (TaKaRa) ปฏิกิริยาที่ดำเนินการ โดยไม่มีแม่แบบถูกใช้เป็นตัวควบคุมว่าง ตัวอย่างทั้งหมดดำเนินการใน wells ตสแควร์ และขี่จักรยานเงื่อนไขมีดังนี้: 10 s ที่ 95 C ตาม ด้วย 40 รอบประกอบด้วย 5 s s 95 C และ 34 ที่ 60 c ofbactin นิพจน์ที่ใช้เป็นการควบคุมภายในสำหรับการ expressionanalysis ยีนทั้งหมด Dissociation curve วิเคราะห์ดำเนินการหลังจากเทอร์โม゚เพื่อตรวจสอบว่า ถูกขยายขนาดเฉพาะ amplicon เดียว การแสดงออกของยีนดำเนินการผ่านวิธีการ 2 △△CT มีการยอมรับความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ P < 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

CP ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบตามลำดับของยีนโปรตีน NNV เสื้อในปลากะรังดอกแดงสำหรับการทดสอบไวรัสฟรี (ตารางที่ 1) ไพรเมอร์อื่น ๆ ที่ถูกออกแบบมาเพื่อใช้ในการวิเคราะห์ qRT-PCR (ตารางที่ 1) ระดับการแสดงออกของยีนหกเลือก weredetected qRT-PCR ได้ดำเนินการใน 7500 Real-time PCR ระบบ (Applied Biosystems, สหรัฐอเมริกา) โดยใช้ชุด SYBRR พรีมิกซ์ ExTaq ™ (Takara) ปฏิกิริยาดำเนินการได้โดยไม่ต้องแม่แบบที่ใช้เป็นตัวควบคุมว่างเปล่า ตัวอย่างทั้งหมดถูกดำเนินการในหลุมเพิ่มขึ้นสามเท่าและเงื่อนไขการขี่จักรยานมีดังนี้ 10 วินาทีที่ 95 C ตามด้วย 40 รอบซึ่งประกอบด้วย 5 s ที่ 95 C และ 34 วินาทีที่ 60 C? การแสดงออก ofbactin ถูกใช้เป็นระบบการควบคุมภายในสำหรับ expressionanalysis ยีนทั้งหมด การวิเคราะห์โค้งแยกออกจากกันได้รับการดำเนินการหลังจาก thermocycling เพื่อตรวจสอบว่าเฉพาะขนาด amplicon เดียวถูกขยาย การแสดงออกของยีนที่ได้รับการพิจารณาผ่านทาง 2? △△วิธี CT ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญได้รับการยอมรับที่ P <0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บริษัท ซีพี ออลล์ ไพรเมอร์ถูกออกแบบตามลำดับของยีนโปรตีนห่อหุ้ม nnv สีส้มปลาเก๋า สำหรับการทดสอบปลอดจากไวรัส ( ตารางที่ 1 ) ชนิดอื่น ๆถูกออกแบบมาเพื่อใช้โดยข้าพเจ้าวิเคราะห์ ( ตารางที่ 1 ) การแสดงออกของยีนที่ระดับ 6 weredetected . ข้าพเจ้าสามารถดำเนินการในเวลาจริงจากระบบ 7 , 500 ( Applied Biosystems , USA ) ใช้ sybrr รวม extaq ™ Kit ( ทาการะ ) ปฏิกิริยาที่ดำเนินการโดยไม่มีแม่แบบที่ใช้ควบคุมที่ว่างเปล่า ตัวอย่างทั้งหมดจะถูกแสดงในเวลส์ทำสำเนาสามฉบับ และสภาพจักรยานมีดังนี้ : 10 95 C ตามด้วย 40 รอบ ประกอบด้วย 5 s 95c 34 s ที่ 60C การแสดงออกทางสีหน้า ofbactin ใช้เป็นระบบควบคุมภายในสำหรับทั้งหมดของยีน expressionanalysis . การวิเคราะห์เส้นโค้งการกระทำหลังจากที่ผื่นแดงเพื่อตรวจสอบว่ามีเฉพาะขนาดเดียวและถูกขยาย . ยีนนิพจน์คำนวณผ่าน 2 △△วิธี CT . เปรียบเทียบการยอมรับที่ p < 0.05