Bligh/Dyer extraction of total lipi

Bligh/Dyer extraction of total lipids:
(Bligh,E.G. and Dyer,W.J. 1959. A rapid method for total lipid extraction and purification.
Can.J.Biochem.Physiol. 37:911-917.)
1. Weigh tissue (seed, leaf, etc). Grind dry soybean seeds in mortar and pestle. If using leaf or Arabidopsis seeds, add directly to glass tube and smash with glass rod after step 2 to grind.
2. Add tissue to glass tube, add 3 mls 2:1 MeOH:chloroform. Smash with glass rod.
3. Mix on Nutator 20 minutes.
4. Add 1 ml chloroform and 1.8 mls water.
5. Shake
6. Spin
7. Discard upper layer (aqueous phase, will contain some polar lipid species like acyl-CoAs. Depending on what you are after, you may need to save this layer)
8. Transfer lower layer (organic phase contains TAGs, membrane lipids and other neutral lipids) to new tube
9. Dry under N2
10. Dissolve in 200 ul 1:1 chloroform: methanol or 6:1 chloroform:methanol.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Bligh/ทัน สกัดไขมันรวม:(Bligh,E.G และ Dyer,W.J 1959 วิธีการที่รวดเร็วสำหรับการสกัดลิปิดทั้งหมดและทำให้บริสุทธิ์Can.J.Biochem.Physiol. 37:911-917.)1. น้ำหนักเนื้อเยื่อ (เมล็ดพันธุ์ ใบ ฯลฯ) บดเมล็ดถั่วเหลืองแห้งในครกและสาก ถ้าใช้ใบหรือเมล็ด Arabidopsis เพิ่มโดยตรง กับหลอดแก้ว และชน กับแก้วก้านหลังจากขั้นตอน 2 ไปบด2. เพิ่มเนื้อเยื่อแก้วหลอด เพิ่ม 3 mls 2:1 MeOH:chloroform ชนกับก้านแก้ว3. ผสมใน Nutator 20 นาที4. เพิ่มคลอโรฟอร์ม 1 มิลลิลิตรและน้ำ 1.8 mls5. สั่น6. หมุน7. ทิ้งชั้นบน (อควี จะประกอบด้วยบางชนิดไขมันขั้วโลกเช่น acyl CoAs ขึ้นอยู่กับสิ่งที่คุณมีหลังจาก คุณอาจต้องการบันทึกชั้นนี้)8. ชั้นล่างโอน (เฟสอินทรีย์ประกอบด้วยแท็ก เมมเบรนไขมัน และไขมันอื่น ๆ กลาง) หลอดใหม่9. แห้งใต้ N210. จางหายในคลอโรฟอร์ม 1:1 ul 200:6:1 คลอโรฟอร์ม: เมทานอลหรือเมทานอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไบลห์ / สกัดย้อมของไขมันรวม:
(ไบลห์, EG และผ้า WJ 1959 วิธีการอย่างรวดเร็วในการสกัดไขมันรวมและการทำให้บริสุทธิ์.
Can.J.Biochem.Physiol 37:.. 911-917)
1 ชั่งน้ำหนักเนื้อเยื่อ (เมล็ดใบและอื่น ๆ ) บดเมล็ดถั่วเหลืองแห้งในโกร่งบดยา หากมีการใช้เมล็ดหรือใบ Arabidopsis เพิ่มโดยตรงกับหลอดแก้วและชนกับแท่งแก้วหลังจากขั้นตอนที่ 2 การบด.
2 เพิ่มเนื้อเยื่อให้กับหลอดแก้วเพิ่ม 3 MLS 2: 1 เมธานอล: คลอโรฟอร์ม ชนกับแท่งแก้ว.
3 ผสมใน Nutator 20 นาที.
4 เพิ่ม 1 มิลลิลิตรคลอโรฟอร์มและน้ำ 1.8 MLS.
5 เขย่า
6 สปิน
7 ยกเลิกชั้นบน (เฟสน้ำ, จะมีบางสายพันธุ์เช่นไขมันขั้วโลก acyl-coas. ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับสิ่งที่คุณหลังจากที่คุณอาจจำเป็นต้องบันทึกชั้นนี้)
8 โอนชั้นล่าง (ระยะอินทรีย์มีแท็ก, เมมเบรนไขมันและไขมันที่เป็นกลางอื่น ๆ ) เพื่อหลอดใหม่
9 แห้งภายใต้ N2
10 ละลายใน 200 ยู 1: 1 คลอโรฟอร์ม: เมทานอลหรือ 6: 1 คลอโรฟอร์ม: เมทานอล