4.7. AIS productionFresh tomato per

4.7. AIS production
Fresh tomato pericarp (40 g) was skinned, cubed and boiled at
80 C in 95% EtOH (100 ml) for 30 min. The sample was cooled to
room temperature, homogenised using a coffee grinder then
filtered through miracloth and washed successively with hot 85%
EtOH (200 ml), chloroform:methanol (1:1 v/v) (200 ml) and 100%
acetone until a run through became clear. Samples were then air
dried overnight.
4.8. Cell wall analysis
Pectinwas extracted from the AIS by incubating in 50 mMCDTA
for 6 h at room temperature. The liquid fraction was removed and
the residue treated with 50 mM Na2CO3 overnight at 2 C, after
which the second liquid fraction was removed. Both liquid fractions,
containing the ionic and covalent pectin fractions, respectively
were then subjected to an uronic acid assay as described by
Filisetti-Cozzi and Carpita [39] and the results pooled. The
remaining residue was fractionated into “cellulose” and “hemicellulose”
rich fractions using 1:20 residue to 4 M KOH ratio, for 2 h at
room temperature or 25 C. The residue was washed to neutral pH
and dried to give the cellulose rich fraction. The KOH extracted
material was adjusted to pH5.5 using acetic acid, precipitated with
80% acetone and dried to give the hemicellulose rich fraction. Recovery
of each of these fractions was assessed gravimetrically.
4.9. Monomeric composition
The hemicelluloses or cellulose rich fraction (30 mg) was subjected
to a two stage acid hydrolysis: initially with 12 M sulphuric
acid for 1 h at 37 C followed by 1Msulphuric acid diluted from the
12 M concentrate for 2 h at 100 C. The sugar monomers content of
the supernatant was determined by HPAEC-PAD (Dionex, UK) using
a CarboPac PA20 column with a 50 mM NaOH isocratic system and
flow rate of 0.5 ml/min at 30 C. Glucose, xylose, arabinose and
galactose were used as standards with mannitol as internal
standard.
4.10. Determination of degree of esterification of pectin by titration
Degree of esterification was measured by the reductive method
[40]. AIS (200 mg) was incubated overnight in 20 ml 10 mg ml1
NaBH4 dissolved in a 1:1 mixture of ethanol and 0.5% NaOH.
Samples were then dried and washed 5 times with acetic acid and
methanol at a ratio of 1:9 respectively and then 2 washes of
methanol. Samples were dried and then dissolved in 67% H2SO4 and
the unesterified pectin determined by the method of Filisetti-Cozzi
and Carpita [39].
4.11. Statistical analysis
Statistical analysis on cell wall composition time points and
esterification time points was performed using students T-test with
significance taken at p values below 0.05. Statistical analysis of the
monomeric composition was done using GenStat 14th Edition, by

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4.7 ผลิตเอไอเอสมะเขือเทศสด pericarp (40 กรัม) แม้ ลูกบาศก์ และต้มที่80 C ใน 95% EtOH (100 มล.) สำหรับ 30 นาที ตัวอย่างระบายความร้อนด้วยการอุณหภูมิห้อง homogenised ใช้บดกาแฟแล้วกรองผ่าน miracloth และล้าง ด้วยน้ำร้อน 85% ติด ๆ กันEtOH (200 มล.), คลอโรฟอร์ม: เมทานอล (1:1 v/v) (200 มล) และ 100%อะซีโตนจนรันผ่านกลายเป็นชัดเจน ตัวอย่างแล้วอากาศแห้งข้ามคืน4.8. ผนังเซลล์วิเคราะห์แยกจากเอไอเอส โดย incubating ใน 50 mMCDTA Pectinwasสำหรับ h 6 ที่อุณหภูมิห้อง เศษของเหลวถูกเอาออก และสารตกค้างที่รับ 50 มม. Na2CO3 ค้างคืนที่ 2 C หลังซึ่งเศษของเหลวสองถูกเอาออก เศษส่วนทั้งสองของเหลวประกอบด้วยเศษส่วนเพกทิน ionic และ covalent ตามลำดับถูกแล้วต้องการทดสอบกรด uronic ตามที่อธิบายไว้โดยFilisetti-Cozzi และ Carpita [39] และผลลัพธ์ทางถูกพู ที่คงเหลือ สารตกค้างถูกแบ่งเป็น "เซลลูโลส" และ "hemicellulose"อุดมไปด้วยส่วนที่ใช้ 1:20 ตกค้างต่อ 4 M เกาะ สำหรับ h 2 ที่อุณหภูมิห้องหรือ 25 เซลเซียส สารตกค้างถูกล้างให้ค่า pH เป็นกลางและแห้งให้เศษอุดมไปด้วยเซลลูโลส เกาะที่แยกวัสดุมีการปรับปรุงการใช้กรดอะซิติก ตะกอนมี pH5.580% อะซิโตน และแห้งให้ hemicellulose รวยเศษส่วน การกู้คืนของแต่ละส่วนเหล่านี้ถูกประเมิน gravimetrically4.9. องค์ประกอบที่ monomericHemicelluloses หรือเซลลูโลสรวยเศษส่วน (30 มิลลิกรัม) ถูกต้องเพื่อไฮโตรไลซ์กรดระยะที่สอง: เริ่มต้นกับซัลฟุริก 12 เมตรกรดสำหรับ h 1 ที่ 37 C ตาม ด้วยผสมจากกรด 1Msulphuric12 M เข้มข้นสำหรับ h 2 ที่ค. 100 Monomers น้ำตาลเนื้อหาของsupernatant ถูกกำหนด โดย HPAEC แผ่น (Dionex, UK) โดยใช้คอลัมน์ CarboPac PA20 กับ 50 มม.ระบบ isocratic คิด NaOH และอัตราการไหล 0.5 ml/นาที ที่ 30 C. กลูโคส xylose, arabinose และกาแล็กโทสถูกใช้เป็นมาตรฐานกับ mannitol เป็นภายในมาตรฐาน4.10 การกำหนดระดับของ esterification ของเพกทินโดยการไทเทรตปริญญา esterification ถูกวัด โดยวิธีการกล้าหาญ[40] . เอไอเอส (200 มิลลิกรัม) ถูก incubated ค้างคืนใน 20 ml 10 mg ml 1NaBH4 ละลายในส่วนผสม 1:1 ของเอทานอลและ 0.5% NaOHตัวอย่างที่แห้ง แล้วล้าง 5 ครั้ง ด้วยกรดอะซิติก และเมทานอลในอัตราส่วน 1:9 ตามลำดับแล้ว 2 ต่อผิวหน้าของเมทานอล ตัวอย่างแห้ง และละลายแล้ว ใน 67% กำมะถัน และเพกทิน unesterified ที่กำหนด โดยวิธีการ Filisetti-Cozziและ Carpita [39]4.11. สถิติวิเคราะห์วิเคราะห์ทางสถิติคะแนนเวลาส่วนประกอบของผนังเซลล์ และทำจุดเวลา esterification โดยใช้ T-ทดสอบนักเรียนด้วยนัยสำคัญที่ค่า p ต่ำกว่า 0.05 การวิเคราะห์ทางสถิติองค์ประกอบ monomeric เสร็จใช้รุ่น 14 GenStat โดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.7 เอไอเอสในการผลิต
มะเขือเทศสดเปลือก (40 กรัม) เป็นผิวคีบต้มที่
80 องศาเซลเซียสในเอทานอล 95% (100 มล.) เป็นเวลา 30 นาที ตัวอย่างที่จะถูกระบายความร้อน
ที่อุณหภูมิห้องเข้ากันโดยใช้เครื่องบดกาแฟแล้ว
กรองผ่าน miracloth และล้างอย่างต่อเนื่องกับร้อน 85%
เอทานอล (200 มล) คลอโรฟอร์ม: เมทานอล (1: 1 v / v) (200 มล) และ 100%
อะซิโตนจนกว่า วิ่งผ่านก็เห็นได้ชัดเจน ตัวอย่างอากาศแล้ว
ทำให้แห้ง.
4.8 การวิเคราะห์ผนังเซลล์
Pectinwas สกัดจากเอไอเอสโดยการบ่มใน 50 mMCDTA
6 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ส่วนของเหลวจะถูกลบออกและ
สารตกค้างที่รับการรักษาด้วย 50 มิลลิเมตร Na2CO3 ค้างคืนที่ 2 องศาเซลเซียสหลังจาก
ที่ของเหลวส่วนที่สองจะถูกลบออก ทั้งเศษส่วนของเหลว
ที่มีอิออนและโควาเลนต์เศษส่วนเพคตินตามลำดับ
จากนั้นได้ภายใต้การทดสอบกรด uronic ตามที่อธิบายไว้โดย
Filisetti-Cozzi และ Carpita [39] และผลการรวบรวม
สารตกค้างที่เหลือ fractionated เป็น "เซลลูโลส" และ "เฮมิเซลลูโลส"
เศษส่วนที่อุดมไปด้วยการใช้สารตกค้าง 01:20 ถึง 4 อัตราส่วน M เกาะเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่
อุณหภูมิห้องหรือ 25 องศาเซลเซียส ที่เหลือก็จะล้างค่า pH เป็นกลาง
และแห้งเพื่อให้เซลลูโลสส่วนที่อุดมไปด้วย เกาะสกัด
วัสดุที่ได้รับการปรับให้ pH5.5 โดยใช้กรดอะซิติกตกตะกอนด้วย
อะซิโตน 80% และแห้งเพื่อให้เฮมิเซลลูโลสส่วนที่อุดมไปด้วย การกู้คืน
ของแต่ละเศษส่วนเหล่านี้ได้รับการประเมิน gravimetrically.
4.9 องค์ประกอบ monomeric
เฮมิเซลลูโลสหรือเซลลูโลสส่วนที่อุดมไปด้วย (30 มิลลิกรัม) ถูกยัดเยียด
ให้เป็นสองขั้นตอนการย่อยสลายกรด: ครั้งแรกกับ 12 M กำมะถัน
? กรดเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 C ตามด้วยกรด 1Msulphuric ปรับลดจาก
12 M สมาธิเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 100? C. น้ำตาลเนื้อหาโมโนเมอร์ของ
สารละลายถูกกำหนดโดย HPAEC-PAD (Dionex สหราชอาณาจักร) โดยใช้
คอลัมน์ CarboPac PA20 กับ NaOH 50 มิลลิเมตรระบบ Isocratic และ
อัตราการไหล 0.5 มิลลิลิตร / นาทีที่ 30 องศาเซลเซียส กลูโคสไซโลส, ราบิโนสและ
กาแลคถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานกับแมนนิทอลเป็นภายใน
มาตรฐาน.
4.10 การกำหนดระดับของเอเพคตินโดยการไตเตรท
ปริญญา esterification วัดโดยวิธีลดลง
[40] เอไอเอส (200 มก.) ถูกบ่มค้างคืนใน 20 มล. 10 มล. 1 มิลลิกรัม?
NaBH4 ละลายใน 1: 1. ส่วนผสมของเอทานอลและ NaOH 0.5%
ตัวอย่างแห้งและล้างแล้ว 5 ครั้งด้วยกรดอะซิติกและ
เมทานอลในอัตราส่วน 1: 9 ตามลำดับและจากนั้น 2 ล้างของ
เมทานอล ตัวอย่างแห้งและเลือนหายไปแล้วใน 67% H2SO4 และ
เพคติน unesterified กำหนดโดยวิธีการ Filisetti-Cozzi
และ Carpita [39].
4.11 การวิเคราะห์ทางสถิติ
วิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติในเซลล์จุดเวลาองค์ประกอบผนังและ
จุดเวลาที่เอได้รับการดำเนินการโดยใช้นักเรียน t-test ที่มี
ความสำคัญถ่ายที่ค่า P ต่ำกว่า 0.05 วิเคราะห์ทางสถิติของ
องค์ประกอบ monomeric ถูกทำโดยใช้ฉบับ 14 GenStat โดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4.7 . โดยการผลิต
มะเขือเทศสดเปลือก ( 40 กรัม ) ถูกถลกหนัง , cubed และต้มที่ 80 องศาเซลเซียส
 แอลกอฮอล์ 95% ( 100 ml ) เป็นเวลา 30 นาที ตัวอย่าง

เย็นอุณหภูมิห้อง homogenised โดยใช้เครื่องบดกาแฟแล้ว
miracloth กรองผ่านและล้างอย่างต่อเนื่องกับร้อน 85 %
เอโตะ ( 200 ml ) คลอโรฟอร์ม : เมทานอล ( 1 : 1 v / v ) ( 200 ml ) และ 100 %
) วิ่งผ่านจนกลายเป็นชัดเจน ตัวอย่างอากาศ
ข้ามคืนแห้ง .
4 . เซลล์การวิเคราะห์
ผนัง pectinwas สกัดจากเอไอเอส โดยการแช่ใน 50 mmcdta
6 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ส่วนของเหลวจะถูกลบออกและ
กากปฏิบัติกับ 50 mm Na2CO3 ค้างคืนที่ 2  C หลังจาก
ซึ่งสัดส่วนของเหลวที่สองถูกลบออก ของเหลวทั้งสองเศษส่วน
ที่มีพันธะไอออนิกเพคตินเศษส่วนตามลำดับ
แล้วต้องใช้กรด uronic ตามที่อธิบายไว้โดย
filisetti คอซซี่ carpita [ 39 ] และผลรวม .
ที่เหลือตกค้างในลำดับ " เซลลูโลส " และ " เฮมิเซลลูโลส "
รวยเศษส่วนโดยใช้กาก 1 4 M เกาะต่อ 2 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 25 C
ห้องหรือ  ตกค้างชำระล้าง Ph เป็นกลาง
และแห้งให้เซลลูโลสรวยเศษส่วน เกาะสกัด
วัสดุปรับ ph5.5 โดยใช้กรดอะซิติก ตกตะกอนกับ
80% และไอแห้งให้เฮมิเซลลูโลสรวยเศษส่วน การกู้คืน
ของแต่ละของเศษส่วนเหล่านี้ได้รับ gravimetrically .
4.9 . วิธีองค์ประกอบ
hemicelluloses หรือเซลลูโลสรวยเศษส่วน ( 30 มิลลิกรัม ) ภายใต้
เป็นสองขั้นตอน : เริ่มด้วยกรดซัลฟิว
12 ม.กรดเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37  C ตามด้วย 1msulphuric กรดเจือจางจาก
12 M สมาธิ 2 ชั่วโมง 100  C . น้ำตาลปริมาณสูงเมอร์
ถูกกำหนดโดย hpaec-pad ( DIONEX , UK ) โดยใช้
คอลัมน์ carbopac pa20 กับ 50 มม. NaOH Isocratic และอัตราการไหลของระบบ
0.5 มล. นาทีที่ 30  C . กลูโคส น้ำตาลไซโลส
galactose ถูกใช้เป็นมาตรฐานที่ 5 มาตรฐานภายใน
.
4.10 .การกำหนดระดับของปฏิกิริยาเอสเทอริฟิเคชันของเพคตินเอสเทอริฟิเคชันโดยการไทเทรต
-
ซึ่งวัดโดยวิธี [ 40 ] เอไอเอส ( 200 มิลลิกรัม ) คือบ่มค้างคืน 20 ml 10 มิลลิกรัม ml  1
nabh4 ละลายใน 1 : 1 ผสมของเอทานอลและ 0.5 % NaOH .
จำนวน 5 ครั้ง แล้วตากให้แห้ง และล้างด้วยกรด
เมทานอล ในอัตราส่วน 1 : 9 ตามลำดับ และ 2 ตัว ของ
เมทานอลตัวอย่างแห้ง แล้วละลายในกรดซัลฟิวริก
67% และ unesterified เพคตินโดยกำหนดวิธีการและ filisetti คอซซี่
carpita [ 39 ] .
4.11 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลในเซลล์ผนัง

คะแนนองค์ประกอบเวลา จุด และเวลาปฏิกิริยาเอสเทอริฟิเคชันโดยใช้ t-test เป็นนักเรียนที่มีความสำคัญไปที่ P
ค่าต่ำกว่า 0.05 การวิเคราะห์ทางสถิติของ
เกิดเป็นองค์ประกอบ โดยใช้ genstat รุ่น 14 โดย