modifications. To recreate the gast

modifications. To recreate the gastric digestion, pepsin
with a final concentration of 5% (w/v) was added to the
samples, the pH values of which were adjusted to 3.0.
The samples were incubated for 120 min at 37°C with
gentle agitation at 110 rpm. To simulate intestinal digestion,
the samples were adjusted to pH 6.0, and solutions
of bile salts and pancreatin were added at final concentrations
of 0.3% and 0.1% (w/v), respectively. The samples
were incubated at 37°C for 180 min with gentle agitation
at 110 rpm. To determine cell count, the samples were
removed before and after gastric and intestinal digestion,
and the aliquots were serially diluted and plated in triplicate
on MRS agar. The plates were incubated for 48 h
under anaerobic conditions.
Adhesion of LAB to Caco-2 cells
Bacteria were evaluated for their adhesion capability to
the human colon carcinoma cell line Caco-2. The cells
were cultured in RPMI medium supplemented with 10%
heat-inactivated fetal bovine serum and 1% penicillin–
streptomycin mixture. Cells were cultured on 24-well tissue
culture plates and incubated at 37°C in 5% CO2
under a relatively humidified atmosphere until a confluent
monolayer was formed.
Before the adhesion assay, the media in the wells containing
a Caco-2 cell monolayer were removed and
replaced once with fresh antibiotic-free RPMI. Thereafter,
1 9 107 cfu/mL of bacteria was added to each well with a
total volume of 1 mL and then incubated for 3 h at 37°C
under an atmosphere of 5% (v/v) CO2. To remove nonattached
bacterial cells, the wells were washed thrice with a
sterile prewarmed PBS solution. To detach the bacteria
cells from the wells, 1 mL of 1% (v/v) Triton X-100 was
added to each well, and the mixture was stirred for
10 min. To measure the viable cell count, the cell suspension
was plated onto MRS agar and incubated at 37°C
under anaerobic conditions. This assay was performed in
triplicate.
MTT assay
The cytotoxicity of the isolated Lactobacillus strains to
tumor/normal cells was evaluated by using the microculture
tetrazolium [MTT, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyltetrazolium bromide] assay. Briefly, HT-29 and
FHs 74 cells (1.2 9 104 cell/well) were seeded into each
well of a 96-well microplate with RPMI growth medium.
After reaching 50% confluence, 24 h after seeding, the
cells were treated with the filtered supernatant of the isolated
strain at a time point of 24 h. After treatment, the
medium was replaced with 200 lL of fresh medium containing
50 lL of MTT solution (2 mg/mL in PBS) and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปรับเปลี่ยน การสร้างการย่อยอาหารในกระเพาะอาหาร เพพซินด้วยสุดท้ายมีเพิ่มความเข้มข้น 5% (w/v)ตัวอย่าง ค่า pH ที่ได้ปรับปรุง 3.0ตัวอย่างถูก incubated ใน 120 นาทีที่ 37° C มีอาการกังวลต่ออ่อนโยนที่ 110 รอบต่อนาที เพื่อจำลองการย่อยอาหารของลำไส้ตัวอย่างที่ปรับ pH 6.0 และโซลูชั่นเกลือน้ำดีและ pancreatin เพิ่มที่ความเข้มข้นสุดท้าย0.3% และ 0.1% (w/v), ตามลำดับ ตัวอย่างมี incubated ที่ 37° C สำหรับ 180 นาทีมีอาการกังวลต่อเบา ๆที่ 110 รอบต่อนาที กำหนดเซลล์ ตัวอย่างดีเอาออกก่อน และ หลังการย่อย อาหารในกระเพาะอาหาร และลำไส้และ aliquots serially diluted และชุบใน triplicateบน MRS agar แผ่นถูก incubated สำหรับ 48 hภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจนยึดเกาะของห้องปฏิบัติการเซลล์ Caco 2แบคทีเรียได้ประเมินความสามารถในการยึดเกาะการลำไส้ใหญ่มนุษย์ carcinoma เซลล์บรรทัด Caco 2 เซลล์มีอ่างใน RPMI เสริม ด้วย 10%ยกเลิกความร้อนครรภ์วัวซีรั่มและ 1% ยาเพนนิซิลลิน –ส่วนผสมของ streptomycin เซลล์มีอ่างในดี 24 เนื้อเยื่อวัฒนธรรมแผ่น และ incubated ที่ 37° C 5% CO2ภายใต้บรรยากาศค่อนข้าง humidified จนมี confluentmonolayer ถูกก่อตั้งขึ้นก่อนทดสอบการยึดเกาะ สื่อในบ่อที่ประกอบด้วยออกเป็น monolayer เซลล์ Caco-2 และเปลี่ยนครั้งเดียวกับ RPMI ปราศจากยาปฏิชีวนะสด หลังจากนั้น1 9 107 cfu/mL ของแบคทีเรียถูกเพิ่มไปยังแต่ละดีรวมปริมาตร 1 mL แล้ว incubated สำหรับ h 3 ที่ 37° Cภายใต้บรรยากาศ 5% (v/v) CO2 เอา nonattachedเซลล์แบคทีเรีย บ่อถูกล้างเลยด้วยการใส่ prewarmed PBS โซลูชัน การแยกแบคทีเรียเซลล์จากบ่อ 1 mL 1% (v/v) ไตรตั้น X 100 ได้เพิ่มดีให้แต่ละ และส่วนผสมที่กวนสำหรับ10 นาที การวัดการตรวจนับเซลล์ทำงานได้ ระงับเซลล์ชุบลงบน MRS agar และ incubated ที่ 37° Cภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน ทำการทดสอบนี้ในtriplicateMTT assayCytotoxicity ของสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสที่แยกไปเซลล์เนื้องอก/ปกติถูกประเมิน โดยใช้การ microculturetetrazolium [MTT, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์] วิเคราะห์ สั้น ๆ เอชที-29 และFHs 74 เซลล์ (เซลล์ 1.2 9 104 ดี) ถูก seeded ลงในแต่ละดีของ microplate 96 ดีกับ RPMI เติบโตปานกลางหลังจากถึง 50% บรรจบ 24 ชมหลังจากการปลูก การเซลล์ได้รับการรักษา ด้วย supernatant กรองของการแยกสายพันธุ์ที่จุดเวลา 24 ชม หลังการรักษา การกลางถูกแทนที่ ด้วย 200 จะสดขนาดบรรจุ50 จะของ MTT (2 mg/mL ใน PBS) และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การปรับเปลี่ยน ที่จะสร้างการย่อยอาหารในกระเพาะอาหารน้ำย่อยที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ 5% (w / v) ถูกบันทึกอยู่ในตัวอย่างค่าพีเอชที่ถูกปรับให้3.0. กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการบ่มเป็นเวลา 120 นาทีที่ 37 ° C ที่มีการกวนอ่อนโยนที่110 รอบต่อนาที เพื่อจำลองการย่อยอาหารในลำไส้กลุ่มตัวอย่างมีการปรับค่าพีเอช 6.0 และการแก้ปัญหาของเกลือน้ำดีและPancreatin มีการเพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย0.3% และ 0.1% (w / v) ตามลำดับ กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 180 นาทีกวนอ่อนโยนที่110 รอบต่อนาที การตรวจสอบการนับเซลล์ตัวอย่างที่ถูกลบออกก่อนและหลังการย่อยอาหารในกระเพาะอาหารและลำไส้และaliquots ถูกปรับลดลำดับและชุบเพิ่มขึ้นสามเท่าในอาหารเลี้ยงเชื้อMRS แผ่นถูกบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน. การยึดติดของห้องปฏิบัติการเพื่อ Caco-2 เซลล์แบคทีเรียได้รับการประเมินความสามารถในการยึดเกาะสำหรับพวกเขาที่จะเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์สายCaco-2 เซลล์เพาะเลี้ยงใน RPMI กลางเสริมด้วย 10% ซีรั่มความร้อนการใช้งานของทารกในครรภ์วัวและ 1% penicillin- ส่วนผสม streptomycin เซลล์เพาะเลี้ยงในวันที่ 24 กันเนื้อเยื่อแผ่นวัฒนธรรมและการบ่มที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียสใน CO2 5% ภายใต้บรรยากาศที่ค่อนข้างความชื้นจนกว่าจะไหลมารวมกันmonolayer ที่ถูกสร้างขึ้น. ก่อนที่จะทดสอบการยึดเกาะที่สื่อในหลุมที่มีCaco-2 monolayer มือถือได้ เอาออกไปและแทนที่ครั้งเดียวกับยาปฏิชีวนะฟรีRPMI สด หลังจากนั้น1 9 107 โคโลนี / มิลลิลิตรของเชื้อแบคทีเรียที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีกับปริมาณรวมของ1 มิลลิลิตรและบ่มแล้ว 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสภายใต้บรรยากาศของ5% (ที่ v / v) CO2 ในการลบ nonattached เซลล์แบคทีเรียหลุมถูกล้างสามครั้งที่มีการแก้ปัญหาพีบีเอส prewarmed ผ่านการฆ่าเชื้อ การถอดแบคทีเรียเซลล์จากหลุม 1 มิลลิลิตร 1% (v / v) Triton X-100 ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีและส่วนผสมที่ถูกกวนสำหรับ10 นาที ในการวัดจำนวนเซลล์ทำงานได้ระงับเซลล์ถูกชุบลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน การทดสอบนี้ได้รับการดำเนินการในการเพิ่มขึ้นสามเท่า. ทดสอบ MTT พิษของสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสบางแห่งถึงเป็นเนื้องอก / เซลล์ปกติถูกประเมินโดยใช้ microculture tetrazolium [MTT, 3 (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5- diphenyltetrazolium โบรไมด์] ทดสอบ สั้น ๆ , HT-29 และFHS 74 เซลล์ (1.2 9 104 เซลล์ / ดี) มีเมล็ดในแต่ละดีของmicroplate 96 หลุมที่มีขนาดกลางการเจริญเติบโต RPMI. หลังจากที่ไปถึงจุดบรรจบ 50%, 24 ชั่วโมงหลังจากการเพาะที่เซลล์ได้รับการรักษาด้วยกรองสารละลายของที่แยกสายพันธุ์ที่จุดของเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากการรักษาที่กลางถูกแทนที่ด้วย 200 จะได้ของกลางที่มีความสดใหม่ 50 LL ของการแก้ปัญหา MTT (2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรในพีบีเอส) และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การปรับเปลี่ยน ที่จะสร้างในการย่อยอาหารในกระเพาะอาหาร เพพซิน
ที่มีความเข้มข้นสุดท้าย 5 % ( w / v ) คือเพิ่ม
ตัวอย่าง ที่ปรับค่า pH 3.0
ตัวอย่างที่บ่มที่ 37 ° C 120 นาทีกับ
อ่อนโยนการกวนที่ 110 รอบต่อนาที จำลองการย่อยอาหารของลำไส้
จำนวนค่า pH 6.0 และโซลูชั่น
ของเกลือน้ำดี และเพิ่มความเข้มข้นใน Pancreatin
สุดท้าย0.3% และ 0.1% ( w / v ) ตามลำดับ ตัวอย่าง
อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 180 นาที อ่อนโยน
การกวนที่ 110 รอบต่อนาที กำหนดจำนวนเซลล์จำนวน
เอาออกก่อนและหลังในกระเพาะอาหารและลำไส้ย่อยอาหาร และยังเป็นเฉยๆ

เจือจาง และชุบทั้งสามใบที่คุณวุ้น จานถูกบ่ม 48 ชั่วโมง ภายใต้สภาวะไร้อากาศ
.

caco-2 เซลล์ยึดเกาะของห้องทดลองเพื่อศึกษาความสามารถในการยึดเกาะของแบคทีเรีย

มนุษย์ลำไส้ใหญ่มะเร็งเซลล์เส้น caco-2 . เซลล์ RPMI
เพาะเลี้ยงในอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วย 10% fetal bovine serum
ความร้อนอนุภาคและ 1% เพนนิซิลิน (
สเตร็ปโตมัยซินที่ผสม เซลล์เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ
วัฒนธรรมดี 24 แผ่น และบ่มที่ 37 ° C ใน 5% CO2
ภายใต้บรรยากาศค่อนข้าง humidified จนกว่ากระจู๋กระจี๋
อย่างเกิดขึ้น .
ก่อนการตรวจสอบสื่อในบ่อที่มีการ caco-2 ถูกถอดออกอย่างเซลล์และถูกแทนที่ด้วยสด
เมื่อยาปฏิชีวนะฟรี RPMI . หลังจากนั้น ,
1 9 107 CFU / ml ของแบคทีเรียเพิ่มกันด้วย
ปริมาณ 1 มิลลิลิตร และบ่มเป็นเวลา 3 ชม. 37 ° C
ภายใต้บรรยากาศของ 5% ( v / v ) CO2 ลบ nonattached
แบคทีเรียเซลล์บ่อได้ซักสามครั้งด้วย
prewarmed PBS เป็นหมัน โซลูชั่น การแยกแบคทีเรีย
เซลล์จากหลุม 1 มิลลิลิตร 1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Triton X-100 คือ
เพิ่มกัน และส่วนผสมที่ถูกกวนให้
10 นาทีวัดได้นับเซลล์ , เซลล์แขวนลอย
ถูกชุบลงบนนางวุ้นและบ่มที่ 37 ° C
ภายใต้สภาวะไร้อากาศ . การทดสอบนี้เป็นการทำสำเนาสามฉบับ MTT assay


.ความเป็นพิษของเชื้อแลคโตบาซิลลัสที่แยก

/ เนื้องอกเซลล์ปกติถูกประเมินโดยใช้ microculture
tetrazolium [ MTT , 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2 , 5 -
diphenyltetrazolium โบรไมด์ ] ตามลำดับ สั้น ๆ , ht-29 และ
fhs 74 เซลล์ ( 1.2 9 104 เซลล์ / ดี ) มีเมล็ดในแต่ละ
ดีของ 96 ดีพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยกับอาหารเลี้ยงเชื้อ RPMI .
หลังจากถึง 50% บรรจบ 24 ชั่วโมง น้ำหนัก
เซลล์จะถูกนำกับกรองของแยก
สายพันธุ์ที่จุดเวลาของ 24 ชั่วโมง หลังการ ทดลอง
ขนาดกลางถูกแทนที่ด้วย 200 จะสดขนาดกลางที่มี
50 จะของ MTT โซลูชั่น ( 2 mg / ml ใน PBS ) และ