The isolation of yeasts from grapes

The isolation of yeasts from grapes was performed as described
previously (Dimakopoulou et al., 2008) with small modifications.
Grape berries belonging to cv. ‘‘Cabernet sauvignon’’ and
‘‘Maratheftiko’’ – a grape variety indigenous to Cyprus (Hvarleva
et al., 2005) – were sampled from six vineyards in Koilani, Agios
Amvrosios, Pachna and Arsos, representative of the major grapegrowing
areas of Limassol district, an important wine-producing
area in Cyprus. Grape sampling was carried out in 2010 and epiphytic
yeasts were recovered from the surface of grape berries.
Ten plants were marked along two major diagonals of each vineyard.
Three bunches were collected from the central part of each
plant. The samples were kept in paper bags and stored in portable
refrigerators during transfer to the laboratory for isolation of
yeasts. From each vineyard ten different bunches were randomly
selected and from each bunch ten berries were collected and transferred
in sterile distilled water (SDW) containing 0.02% Tween-20.
The berries were shaken at room temperature for 10 min at
150 rpm and then 10-fold dilutions were prepared in SDW. From
each dilution 200 ll were plated in Petri dishes containing yeast
malt agar (YMA, containing 3 g yeast extract, 3 g malt extract, 5 g
bactopeptone, 10 g glucose, 15 g agar per lt). Petri dishes were of A. tubingensis or SDW containing 0.01% Agral as negative control.
The A. tubingensis isolate was grown for 7 days on potato dextrose
agar (PDA) at 25 C and the conidial suspension was obtained
by washing plates with SDW containing 0.02% Tween-20 (Sigma–
Aldrich). The berries were incubated at 25 C for 7 days in plastic
boxes under 100% relative humidity that was maintained by the
addition of 30 ml sterile water to each box. Each yeast isolate test
consisted of fifteen berries and the experiments were repeated at
least twice. The percentage of fungal growth inhibition was determined
7 days after A. tubingensis inoculation, using the formula:
100  [(diameter of fungal colony growth on berry treated with
yeast/without yeast)  100].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำการแยกของยีสต์จากองุ่นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Dimakopoulou et al. 2008) การแก้ไขขนาดเล็กเบอร์รี่องุ่นเป็นพันธุ์ '' Cabernet sauvignon'' ของ และ'' Maratheftiko'' – หลากหลายองุ่นพื้นเมืองในประเทศไซปรัส (Hvarlevaet al. 2005) – มีตัวอย่างจากไร่องุ่นหกใน Koilani อาAmvrosios, Pachna และ Arsos ตัวแทนของ grapegrowing ใหญ่พื้นที่ของเขต Limassol สำคัญผลิตไวน์พื้นที่ในประเทศไซปรัส สุ่มตัวอย่างองุ่นได้ดำเนินการใน 2010 และบนต้นไม้รายีสต์ถูกกู้คืนจากพื้นผิวขององุ่นเบอร์รี่สิบพืชถูกทำเครื่องหมายตามแนวเส้นทแยงมุมหลักสองขององุ่นแต่ละสามช่อเก็บรวบรวมจากส่วนกลางของแต่ละโรงงาน ตัวอย่างถูกเก็บไว้ในถุงกระดาษ และเก็บไว้ในแบบพกพาตู้เย็นในระหว่างโอนย้ายไปยังห้องปฏิบัติการแยกของรายีสต์ จากไร่องุ่นแต่ละ 10 ช่อถูกสุ่มเลือก และ จากพวงละสิบถูกรวบรวม และถ่ายโอนกลั่นน้ำหมัน (SDW) 0.02% ที่ประกอบด้วยในโลก-20ผลเบอร์รี่ถูกเขย่าที่อุณหภูมิห้อง 10 นาทีที่ได้เตรียม 150 rpm แล้ว 10-fold เจือจางใน SDW จากแต่ละจะเจือจาง 200 ถูกชุบในจานเพาะที่ประกอบด้วยยีสต์วุ้นมอลต์ (YMA ที่ประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์ 3 กรัม สารสกัดจากมอลต์ 3 กรัม 5 กรัมbactopeptone กลูโคส 10 กรัม วุ้น 15 กรัมต่อลิตร) เพาะอาหารถูกของ SDW ประกอบด้วย 0.01% หรือ A. tubingensis Agral เป็นตัวควบคุมค่าลบIsolate A. tubingensis ถูกปลูก 7 วันบนมันฝรั่งเดกซ์โทรสวุ้น (PDA) ที่ 25 C และระงับ conidial ได้รับซักจาน SDW ประกอบด้วย 0.02% โลก-20 (Sigma –Aldrich) ผลเบอร์รี่ได้รับการกกที่ 25 C 7 วันในพลาสติกกล่อง 100% ภายใต้ความชื้นสัมพัทธ์ที่ถูกเก็บรักษาโดยการนอกจากนี้ของแต่ละกล่องน้ำหมัน 30 มล. ทดสอบแต่ละแยกยีสต์สิบห้าที่ประกอบด้วยผลเบอร์รี่และการทดลองซ้ำกันที่อย่างน้อยสองครั้ง กำหนดเปอร์เซ็นต์ของการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อรา7 วันหลังจากกักบริเวณ A. tubingensis ใช้สูตร:100 [(เส้นผ่าศูนย์กลางของโคโลนีเชื้อราเจริญเติบโตของเบอร์รี่ด้วยยีสต์/ไม่มียีสต์) 100]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แยกยีสต์จากองุ่นที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้
ก่อนหน้านี้ (Dimakopoulou et al., 2008) มีการปรับเปลี่ยนขนาดเล็ก.
เบอร์รี่องุ่นพันธุ์ที่อยู่ใน '' Sauvignon Cabernet '' และ
'' Maratheftiko '' - ความหลากหลายองุ่นพื้นเมืองไปยังไซปรัส (Hvarleva
. et al, 2005) - ได้รับตัวอย่างจากหกไร่องุ่นใน Koilani, Agios
Amvrosios, Pachna และ Arsos ตัวแทนของ grapegrowing ที่สำคัญ
พื้นที่ของ อำเภอลีมาซอลที่มีความสำคัญที่ผลิตไวน์
พื้นที่ในประเทศไซปรัส การสุ่มตัวอย่างองุ่นได้ดำเนินการในปี 2010 และอิงอาศัย
ยีสต์หายจากพื้นผิวของผลเบอร์รี่องุ่น.
สิบพืชถูกทำเครื่องหมายพร้อมสองเส้นทแยงมุมที่สำคัญของแต่ละไร่องุ่น.
สามพวงถูกรวบรวมมาจากภาคกลางของแต่ละ
โรงงาน กลุ่มตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ในถุงกระดาษและเก็บไว้ในแบบพกพา
ตู้เย็นระหว่างการถ่ายโอนไปยังห้องปฏิบัติการสำหรับการแยก
ยีสต์ จากแต่ละไร่องุ่นสิบช่อที่แตกต่างกันโดยการสุ่ม
เลือกและจากแต่ละพวงสิบเบอร์รี่ถูกเก็บรวบรวมและโอน
ในน้ำกลั่นปลอดเชื้อ (SDW) ที่มี 0.02% Tween-20.
ผลเบอร์รี่ถูกเขย่าที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาทีที่
150 รอบต่อนาทีและจากนั้น 10- เจือจางพับได้จัดทำขึ้น SDW จาก
แต่ละเจือจาง 200 LL ถูกชุบในจานเลี้ยงเชื้อยีสต์ที่มี
วุ้นมอลต์ (ที่นี่ที่มีสารสกัดจาก 3 กรัมยีสต์ 3 กรัมสารสกัดจากมอลต์ 5 กรัม
bactopeptone กลูโคส 10 กรัม, 15 กรัมวุ้นต่อ LT) จานเลี้ยงเชื้อเป็นของเอ tubingensis หรือ SDW ที่มี 0.01% Agral? เป็นตัวควบคุมเชิงลบ.
เชื้อเอ tubingensis ปลูกเป็นเวลา 7 วันใน potato dextrose
agar (PDA) ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและระงับเชื้อราที่ได้รับ
โดยการล้างจานด้วย SDW ที่มี 0.02% Tween-20 (Sigma-
ดิช) ผลเบอร์รี่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 วันในถุงพลาสติก
กล่องภายใต้ความชื้นสัมพัทธ์ 100% ที่ได้รับการดูแลโดย
นอกเหนือจาก 30 มล. น้ำหมันแต่ละกล่อง การทดสอบแต่ละยีสต์แยก
ประกอบด้วยสิบห้าเบอร์รี่และการทดลองที่ถูกซ้ำอย่าง
น้อยสองครั้ง ร้อยละของการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราถูกกำหนด
7 วันหลังจากที่เอ tubingensis ฉีดวัคซีนโดยใช้สูตร:
100 [(เส้นผ่าศูนย์กลางของการเจริญเติบโตของเชื้อราอาณานิคมบนแบล็กเบอร์รับการรักษาด้วย
ยีสต์ / ไม่มียีสต์)? 100]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกยีสต์จากองุ่นมีการปฏิบัติตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ ( dimakopoulou et al . , 2008 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยผลขององุ่นพันธุ์ " "cabernet Sauvignon " " และ" " " "maratheftiko –องุ่นหลากหลายท้องถิ่น ( hvarleva ไซปรัสet al . , 2005 ) - จำนวน 6 ไร่องุ่นใน koilani ผ่ ,amvrosios pachna arsos , และตัวแทนของ grapegrowing หลักพื้นที่ของ Limassol District , การผลิตไวน์ที่สำคัญพื้นที่ในไซปรัส ตัวอย่างองุ่นได้ดําเนินการใน 2010 และอิงอาศัยยีสต์ที่พบจากพื้นผิวของผลเบอร์รี่องุ่นพืช 10 ถูกทำเครื่องหมายตามสองเส้นทแยงมุมหลักของแต่ละไร่3 มัด รวบรวมจากภาคกลางของแต่ละพืช ตัวอย่างถูกเก็บในถุงกระดาษและเก็บไว้ในแบบพกพาตู้เย็นระหว่างการถ่ายโอนไปยังห้องปฏิบัติการสำหรับการแยกยีสต์ จากแต่ละที่แตกต่างกันสิบพวงองุ่น มีวัตถุประสงค์เลือกจากสิบและแต่ละกลุ่มเบอร์รี่การเก็บรวบรวมและโอนในการฆ่าเชื้อน้ำ ( sdw ) ประกอบด้วย 0.02% tween-20 .ผลเบอร์รี่ที่สั่นสะเทือนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาทีที่150 รอบต่อนาทีแล้ว 10 วิธีการพับเตรียมไว้ใน sdw . จากเจือจางแต่ละ 200 จะถูกหุ้มในจานเลี้ยงเชื้อยีสต์ที่มีข้าวมอลต์ ( yma ประกอบด้วย 3 กรัมยีสต์สกัด สารสกัดจากมอลต์ 3 กรัม 5 กรัมbactopeptone 10 กรัมน้ำตาล 15 กรัมวุ้นต่อมัน ) จานเลี้ยงเชื้อเป็น . tubingensis หรือ sdw ที่มี 0.01 % agral ควบคุมลบเอ. tubingensis แยกปลูก 7 วันใน potato dextroseAgar ( PDA ) ที่อุณหภูมิ 25 C และช่วงล่างจากที่ได้รับด้วยการล้างแผ่น sdw ประกอบด้วย 0.02% tween-20 ( Sigma )อัลดริช ) ผลเบอร์รี่ที่อุณหภูมิ 25 C เป็นเวลา 7 วัน พลาสติกกล่องใต้ 100 % ความชื้นที่ถูกเก็บรักษาโดยเพิ่ม 30 ml น้ำหมันไปแต่ละกล่อง ทดสอบแยกแต่ละยีสต์จำนวน 15 เบอร์รี่ และการทดลองซ้ำที่อย่างน้อยสองครั้ง ร้อยละของการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อรา คือ กำหนด7 วัน หลัง ก. tubingensis เชื้อโดยใช้สูตร :100 [ ( เส้นผ่าศูนย์กลางของการเจริญเติบโตของโคโลนีเชื้อราในการรักษาด้วยเบอร์รี่โดยไม่ใช้ยีสต์ยีสต์ / 100 ]